Микрофлора снежного покрова г. Кирова

3.1 Объекты исследования.

Объектом исследования являлись пробы снегового покрова, отобранные на территории г. Кирова в феврале 2014 года в районах завода «Авитек», ОЦМ, «Искож» , а так же Александровский сад и парк им. Кирова со строгой картографической привязкой к местности (рис. 1). Были выбраны территории с разной степенью антропогенной нагрузки (территории вблизи промышленных предприятий, вдоль железных дорог, автомагистралей, социальных объектов, парка культуры и отдыха и т.д.).

Рис.1. Основные места взятия проб снега

               3.2 Методы индикации бактерий в окружающей среде.

Выделение отдельных видов микроорганизмов и получение чистой культуры является основой всей бактериологической работы. Чистой культурой микроорганизма называют популяцию, состоящую из особей одного вида. При выделении чистых культур из исследуемого материала, содержащего смесь бактерий, используют методы, подразделяющиеся на две основные группы:

• Методы, основанные на принципе механического разделения микробов.
• Методы, основанные на биологических особенностях самих микроорганизмов.

Методы механического разделения микроорганизмов (методы разбавления).

1. Метод Пастера. Из исследуемого посевного материала делается ряд последовательных разведений в жидкой питательной среде: капля посевного материала вносится в колбу или пробирку со стерильным МПБ, из нее каплю переносят в следующую пробирку и так до 8-10 колб или пробирок, которые термостатируют при оптимальной температуре. С каждым разведением количество микробных клеток, попадающих в среду, будет уменьшаться. В жидких средах микроорганизмы растут диффузно, т.е. легко распространяются по всей толще среды, что не всегда обеспечивает получение чистой культуры. В настоящее время этот метод не применяется, а используется только для предварительного уменьшения концентрации микроорганизмов в материале перед его посевом на плотную питательную среду.
2. Метод Коха. 3-4 пробирки с МПЖ расплавляют в водяной бане при 40-45°С. Исследуемый материал вносят бактериологической петлей или пастеровской пипеткой в пробирку с расплавленным МПЖ, равномерно размешивают его, вращая пробирку между ладонями, каплю разведенного материала из первой пробирки переносят во вторую, из второй в третью и т.д. Содержимое каждой пробирки выливают в стерильные чашки Петри. МПЖ должен равномерно покрыть дно чашки. После того как желатин застынет, чашки ставят, чашки ставят крышкой вверх в термостат при температуре 20-22°С. Вместо МПЖ в настоящее время используют МПА. Каждая попавшая в желатин или агар микробная клетка размножается только в том месте, куда была внесена вначале, и образует видимое невооруженным глазом скопление микроорганизмов - колонию, которую отсеивают на МПБ или скошенный МПА для получения чистой культуры.
3. Метод Дригальского (метод фракционного посева). Этот метод основан на механическом разобщении микробных клеток друг от друга на поверхности плотной питательной среды. Каждая микробная клетка, фиксируясь в том месте, куда она попала, начнет размножаться и через 1-2 дня образует колонию. Используют несколько чашек Петри (чаще 3) с залитой в них плотной питательной средой (МПА). На поверхность застывшей среды в первую чашку вносят каплю исследуемого материала, содержащего микроорганизмы. Затем с помощью стеклянного шпателя бактериологической петли каплю растирают по всей поверхности агара после чего этим же шпателем (не обжигая его) проводят по поверхности среды во второй и в третьей чашках. В процессе растирания микробные клетки разъединяются друг от друга. После посева на крышках чашек делают надпись: наименование исследуемого материала или номер анализа посева и номер чашки, фамилия студента Из изолированных колоний выделяют чистую культуру.
4. Метод фильтрации. Основан на пропускании исследуемого материал через специальные мелкопористые фильтры с определенным диаметром пор и разделении содержащихся микроорганизмов по величине. Этот метод применяется, главным образом, для очистки вирусов от бактерий.

 

Методы выделения культур, основанные на биологических особенностях микроорганизмов.

1. Метод нагревания исследуемого материала. Применяется для выделения чистых культур споровых форм микробов (гнилостных, масляно-кислых бактерий и др.). Перед посевом исследуемый материал прогревают на водяной бане при температуре 75-85°С в течение 20-30 мин. Вегетативные клетки погибают, а споры микробов остаются живыми и при последующих высевах на плотную питательную среду прорастают, образуя колонии.
2. Метод Шукевича заключается в точкообразном посеве исследуемого материала в конденсационную воду скошенного агара (у основания скоса). При размножении подвижные формы микробов из конденсационной воды распространяются на агар. Для получения чистой культуры производят отсев выросших микробов из верхней части пробирки. Метод используется для выделения очень подвижной палочки Proteus vulgaris.
3. Метод выделения чистых культур с помощью химических веществ используется для изоляции микроорганизмов, устойчивых к определенным химическим веществам. Некоторые химические вещества (красители, кислоты и антибиотики) угнетают одни и не оказывают влияния на рост других микроорганизмов. Так небольшие концентрации пенициллина задерживают рост грамположительных микробов и не влияют на развитие грамотрицательных; 5-10 % растворы кислот (серной, хлористоводородной) и щелочей быстро убивают большинство микроорганизмов, а микобактерии туберкулеза выживают в растворах такой концентрации и после посева на питательные среды дают рост.
4. Метод обогащения применяют для выделения чистых культур различных микроорганизмов (например, сальмонелл). Для этого производят посев исследуемого материала на питательные среды, способствующие росту определенного микроба. Такие среды называются элективными, например среды Кауфмана, Мюлера для выделения сальмонелл из сильно загрязненного материала. В состав этих сред входят химические вещества, подавляющие рост посторонней микрофлоры и не препятствующие росту сальмонелл. Для молочнокислых бактерий средой обогащения является обезжиренное молоко, развиваясь в котором они образуют молочную кислоту, подавляющие посторонние микроорганизмы.
5. Биологический метод выделения чистой культуры применяется для изоляции патогенных микроорганизмов из исследуемого материала, загрязненного большим количеством сапрофитных бактерий. Предполагая в исследуемом материале наличие определенного возбудителя, заражают этим материалом   (вводят  внутримышечно,   подкожно   или   внутрибрюшинно) лабораторное животное, которое наиболее восприимчиво к данному виду патогенного  микроба.   Для  выделения   возбудителя   сибирский язвы и стафилококки чаще используют белых мышей; лептоспироза - золотистых хомяков; анаэробных инфекции-кроликов. Если в исследуемом материале содержится подозреваемый возбудитель, то лабораторное животное заболевает и погибает. Труп павшего животного вскрывают и, соблюдая требования асептики, производят посевы из внутренних органов на питательные среды, где вырастает чистая культура только патогенного микроба, так как клетки сапрофитных микроорганизмов, находящиеся вместе с ним, отмирают в организме лабораторного животного под влиянием его защитных факторов (антител, фагоцитов).

Для микробиологического анализа пробы снега собирали по общепринятой методике в стерильную посуду. Посевы осуществляли в день отбора образцов по 0,1 мл талой воды поверхностным способом на твердые питательные среды. Для выделения и количественного учета гетеротрофных микроорганизмов использовали ГРМ-агар, а для выделения микромицетов . Учет численности микроорганизмов производили на 3-7-е сутки и выражали в колониеобразующих единицах (КОЕ) в 1 мл талой воды.

 

 

 

 

4. Заключение.

Одной из важных проблем крупных городов является возрастающее микробиологическое загрязнение окружающей среды. В больших количествах накапливаются разнообразные соединения естественного и антропогенного происхождения, обуславливающие загрязненность среды и создающие оптимальные условия для развития микрофлоры. С каждым годом все сильнее развивается промышленность. Большой вклад в загрязнение городов вносит автотранспорт. Актуальность работы состоит в том, что микроорганизмы самые распространенные живые организмы на Земле. Повышенное содержание различных микроорганизмов в воздухе окружающей среды может являться патогенетическим фактором для развития различных заболеваний человека, вызывать болезни, снижение иммунитета, повышенную утомляемость и снижение общей резистентности организма.

 

Список литературы.

1. Грегори Ф. Микрофлора атмосферы. – М., 1964. – 340 с.

2. Заварзин Г.А., Колотилова Н.Н. Введение в природоведческую

микробиологию. М: АрбисД, 2001. – 256 с.

3. Василенко В.С. Влияние природных факторов на микробоценозы. М,

1985. – 320 с.

4. Громов Б.В., Павленко Г.В. Экология бактерий. Л.:ЛГУ, 1989. – 248 с.

5. Микробиология./ Под ред. А.А. Воробьева. - М.: Медицина, 1998.- 324с.

6. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. Изд. 4-е, перераб.и доп. М.: Медицина, 1978, 394с.

7. http://meduniver.com/Medical/Microbiology/

8. http://microbiologu.ru/