Трубчатый теплообменник

Опыт работы по вызыванию суперовуляции у  коров-доноров сывороточными и  гипофизарными препаратами показал, что при использовании гипофизарных гормонов (ФСГ-п, ФСГ-супер, фолликотропин, фоллитропин) получаются более стабильные и высокие результаты суперовуляции и эмбриопродукции (табл.1). Так, процент коров-доноров, реагирующих на обработку сывороточными гонадотропинами, составил 75,0-78,3%, гипофизарными препаратами - 85,3-88,8%, число овуляций на донора - соответственно 8,3-9,7 и 10,2-12,0, количество пригодных эмбрионов - 3,5-4,0 и 5,5-6,1.  

Синхронизация половых циклов доноров и реципиентов 

Синхронность  проявления эструса между донором  и реципиентом - важнейшее условие  высокой приживляемости эмбрионов. Для синхронизации охоты используют простагландин ПГФ2-альфа или его синтетические аналоги (эстрофан, магэстрофан, ремофан, клопростенол, клатрапростин, суперфан, эстуфалан и др.). 

По технологии трансплантации на каждого донора следует  подготавливать не менее 5 реципиентов, причем день охоты реципиента должен совпадать с днем первого осеменения суперовулирующего донора. В случае использования в технологии трансплантации постоянных доноров (проверенных на гормональную обработку и имевших стабильный выход качественных эмбрионов) число реципиентов можно увеличить до 10. 

Перед гормональной обработкой животных исследуют ректально (определяют размеры и форму яичников, наличие и выраженность желтого  тела). Лютеиновая фаза цикла соответствует  оптимальному времени для инъекции препаратов. Простагландины вводят внутримышечно в дозах, указанных в наставлениях по их применению. Как правило, животные приходят в охоту через 48-72 часа после инъекции препарата. Не пришедших в охоту животных обрабатывают повторно через 10-11 дней с момента первого введения ПГФ2-альфа. Двукратное введение препарата (в любую фазу полового цикла) с 10-ти дневным интервалом эффективно использовать на большом поголовье доноров и реципиентов, так как это способствует увеличению числа животных, проявивших признаки половой охоты, и снижает трудоемкость операций обслуживающего персонала. 

 Исследованиями  установлено, что комплексное  использование гормональных препаратов  ФСГ, ПГФ2альфа Гн-РГ для синхронизации  эструса у самок крупного рогатого  скота существенно повышает эффективность  работ по трансплантации. Из 50 телок, обработанных в опыте, клинически выраженную охоту проявили 88% животных, что на 11,4% больше, чем в контроле, а число реципиентов, пригодных для эмбриотрансплантации, и приживляемость пересаженных зародышей увеличилась соответственно на 15,0 и 12,2%.  

Эффективность способов подготовки животных для эмбриотрансплантации 

  Аналогичная  закономерность наблюдалась по  группе коров-доноров. Количество  животных, пригодных для использования  в качестве доноров, увеличилось  на 15,5, а число коров, положительно реагирующих полиовуляцией, на - 14,8%. В опытной группе по сравнению с контрольной повысился выход полноценных эмбрионов от донора на 24% , а выход зародышей, пригодных для пересадки, от общего числа извлеченных зародышей --14,7%. 

Таким образом, комплексное использование гормональных препаратов для синхронизации эструса  самок крупного рогатого скота позволяет  повысить количество телок-реципиентов  и коров-доноров, пригодных для  эмбриотрансплантации, соответственно на 15 и 15,5%, уровень приживляемости зародышей - на 12,2%, выход полноценных эмбрионов от числа извлеченных - на 14,7%.(4)  

Осеменение коров-доноров. 

Результаты суперовуляции  определяются эффективным осеменением  коров-доноров. Проблема оплодотворения яйцеклеток и получения биологически полноценных эмбрионов все ещё остается открытой. Как показывают результаты исследований, только 60-65% эмбрионов пригодны для трансплантации, остальные яйцеклетки, образовавшиеся в результате гормональной обработки гонадотропинами, оказываются либо неоплодотворенными, либо после оплодотворения отстают в развитии или дегенерируют. Причина этих нарушений остается неизвестной. 

Для искусственного осеменения коров-доноров необходимо использовать сперму только выдающихся быков-производителей, достоверно оцененных по качеству потомства. Надежным критерием наследственных качеств быка служит коэффициент повторяемости, т.е. коэффициент регрессии будущих дочерей быка на число фактически имеющихся дочерей. Если генетическое превосходство дочерей быка, выраженное величиной отклонения от сверстниц, умножить на коэффициент повторяемости, то полученная величина будет характеризовать генетическое превосходство будущих дочерей быка, или предсказанную разность. Предсказанная разность является одним из наиболее объективных качеств быка, разработанных в современной селекции молочного скота. 

Для искусственного осеменения коров-доноров следует  использовать, как правило, сперму производителей 1-й племенной категории, т.е. таких, племенная ценность которых превышает  среднюю популяционную величину на два стандартных отклонения. В этом случае существенно повышаются темпы селекции, и улучшается племенная ценность новой генерации. 

Племенной подбор быков-производителей и коров-доноров  осуществляется по заказному или  целевому спариванию родителей. В его основе должен лежать принцип индивидуального подбора в соответствии с селекционной программой совершенствования существующих или создания новых пород, типов и линий. 

Требования к  оценке оплодотворяющей способности  спермы быков, предназначенной для осеменения коров-доноров, должна быть значительно выше, чем при оплодотворении остальных коров. Для повышения оплодотворяемости доноров  и выхода эмбрионов, наряду с использованием высококачественной спермы, необходимо определить сроки половой охоты для своевременного проведения искусственного осеменения. Как правило, коров с гормонально вызванной половой охотой осеменяют дважды: первый раз при начале появления половой охоты и второй - через 12-24 часа. 

В нашей стране коров-доноров искусственно осеменяют дважды в день с интервалом 10-12 часов каждый раз двумя-тремя дозами замороженной спермы. Так как при суперовуляции повышается число овулировавших яйцеклеток, в каждой дозе спермы должно быть не менее 50 млн подвижных спермиев. 

День, в который проводится искусственное осеменение коровы-донора, считается датой оплодотворения. С этого дня начинается отсчет развития эмбрионов in vivo до их извлечения.(1)  

Извлечение и  оценка эмбрионов. 

Эффективность метода трансплантации во многом определяется способом извлечения эмбрионов. Оплодотворенные яйцеклетки от суперовулированных коров-доноров могут быть извлечены тремя способами: после убоя коровы-донора; хирургическим; нехирургическим. 

Извлечение эмбриона после убоя коровы-донора. Самым  простым и надежным способом извлечения эмбрионов является убой коровы-донора. Этот способ практиковался только на первых этапах освоения метода трансплантации. В настоящее время из-за потери генетически ценной коровы-донора он не используется. 

Извлечение эмбриона хирургическим способом. Важным моментом, обеспечивающим эффективность извлечения эмбрионов, является определение стадии их развития и места положения в половых путях коровы-донора. Для трансплантации рекомендуется использовать бластоцисты, поэтому эмбрионы извлекают между 7-8-ми сутками после первого искусственного осеменения . 

Имеется несколько  способов хирургического извлечения эмбрионов: разрез верхнего свода влагалища, лапаротомия  по белой линии живота и лапаротомия  в области голодной ямки. 

Хирургический способ извлечения эмбрионов является трудоемким, дорогостоящим и, что особенно важно, им нельзя пользоваться многократно. В настоящее время хирургический способ извлечения применяется в редких случаях, главным образом в научных целях. 

Извлечение эмбрионов нехирургическим способом. Основное преимущество нехирургического способа извлечения эмбрионов заключается в простоте манипуляций. Для этого не требуется специального операционного помещения. Эмбрионы можно извлекать непосредственно в производственных условиях. С селекционной точки зрения, при правильном применении нехирургического способа воспроизводительная способность доноров не нарушается, что позволяет многократно использовать генетически ценных коров-доноров для получения от них большого числа потомков. 

В общем виде извлечение эмбрионов нехирургическим  методом происходит по следующей  схеме. Коров-доноров обследуют на наличие желтых тел, чистят и моют, ограничивают рацион и кратность  кормления, а за сутки прекращают кормление и поение. Перед самым извлечением эмбрионов дезинфицируют наружные половые органы коров-доноров. Извлекают эмбрионы под местной анестезией. В рог матки вводят продезинфицированный двухканальный резиновый или пластмассовый катетер с надувным баллончиком, в который нагнетают 10 куб см воздуха. Выход из рога матки закрывают, надувая воздухом тонкостенный резиновый баллончик. Затем в рог вводят промывную жидкость и осторожно массируют, чтобы отделить эмбрионы от стенок матки. В качестве промывной среды применяют PBS до 500 мл. Этот состав используется и для кратковременного культивирования эмбрионов. 

Вымывание повторяют 5-8 раз. Основную часть эмбрионов  извлекают в первых трех-четырех  смывах. Промывание в обоих рогах  матки, включая введение катетеров, продолжается 20-50 минут. За это время можно извлечь более 50% эмбрионов, находящихся на стадии морулы или бластоцисты. 

После вымывания  эмбрионов в матку вводят раствор  антибиотика с целью антисептики. 

Во многих странах  разработаны различные устройства для нехирургического извлечения эмбрионов. В нашей стране успешно освоены нехирургические методы извлечения, позволяющие получать 60% от числа овулировавших яйцеклеток. Нужно иметь в виду, что в среднем из вымытых яйцеклеток до 25% оказываются неоплодотворенными или дезинтегрированными. Причины выхода биологически неполноценных зигот до сих пор окончательно не выяснены. 

         Кратковременное культивирование  и хранение эмбрионов. Манипуляции  с ранними эмбрионами, находящимися  на предимплантационных стадиях  развития, т.е. от момента их получения до введения в рога матки реципиента, занимают от 1 до 5 часов. В этот период нужно создать оптимальные условия, обеспечивающие сохранение их биологических качеств. Кратковременное хранение эмбрионов дает также возможность транспортировать их в другие хозяйства. 

Эмбрионы крупного рогатого скота можно сохранить  путем пересадки их в яйцепровод самок других видов млекопитающих. Лучше всего обеспечивается нормальное предимплантационное развитие эмбрионов  коров в яйцепроводе крольчих. Установлено, что эмбрионы коровы в яйцепроводе крольчихи могут успешно развиваться до стадий, пригодных для трансплантации реципиентам, т.е. до морулы и бластоцисты. Недостатком этого метода является его трудоемкость и возможные потери зигот при их переносе. В настоящее время широкое распространение получил метод краткосрочного хранения эмбрионов in vitro. 

После извлечения и оценки на жизнеспособность эмбрионы переносят в питательные среды  с температурой 37 градусов. Большинство  сред, 

в которых культивируют и хранят эмбрионы, включают растворы солей, аминокислоты с бикарбонатным ионом как буферным агентом, обеспечивающим pH в пределах 7.2-7.6. Проведенные исследования показали, что продолжительность культивирования без потери биологических качеств эмбрионов возможна до 95 часов.  

В последние  годы проводятся исследования по краткосрочному хранению эмбрионов in vitro при их охлаждении ниже 37 градусов. Разработка этого метода имеет большое практическое значение, т.к. позволяет существенно упростить  манипуляции с эмбрионами и надежнее обеспечивает их транспортировку. 

Оценка эмбрионов. Оценка эмбрионов крупного рогатого скота производится несколькими  методами. Наибольшее распространение  получил морфологический метод. Установлено, что результаты имплантации  эмбрионов зависят от того, насколько полно оценена способность оплодотворенных яйцеклеток к развитию. 

По морфологическим  признакам и эмбриональной стадии развития, эмбрионы можно классифицировать  на пригодные и непригодные к  трансплантации. При морфологической  оценке эмбрионов основное внимание обращают на форму зиготы, состояние её зоны пеллюцида, число бластомеров, равномерность дробления, выраженность эмбриобласта и трофобласта.