Перенос генетического материала и генетическое картирование у актиномицетов

2. Генетическое  картирование актиномицетов

Генетика актиномицетов  исследована достаточно хорошо. Для  наиболее изученных видов еще  с конца 50-х гг. составлялись на основании конъюгационных скрещиваний подробные генетические карты с множеством нанесенных на них маркеров. Эти карты были кольцевыми.

Генетическое  картирование проводится с помощью  Днк – гибридизации. Данный метод основан на способности ДНК и РНК специфически соединяться (гибридизироваться) с комплементарными олигонуклеотидными фрагментами, искусственно синтезированными и меченными ферментом, флюорохромом или изотопом. Эти фрагменты называются зондами. Для проведения молекулярной гибридизации молекулу исследуемой ДНК расплетают, одну нить закрепляют на специальном фильтре, который помещают в раствор, содержащий меченый зонд. Создаются условия, благоприятные образованию двойных спиралей. При наличии комплементарности между зондом и исследуемой ДНК они образуют между собой двойную спираль. После окончания гибридизации и отмывания несвязавшихся продуктов проводится детекция образовавшегося комплекса при помощи соответствующей метки.

Данные о  наличии перестроек генома ряда мутантов актиномицетов получены в экспериментах по ДНК - гибридизации, в которых в качестве зонда использовали 0,85 т.п.н. фрагмент плазмиды pUS8, несущий ген kmr.

Поскольку ДНК  актиномицетов имеет высокий  ГЦ-состав (70-74%) , для получения макрофрагментов  хромосомной ДНК используются эндонуклеазы рестрикции, сайты узнавания которых содержат лишь АТ-пары. А в результате картирования актиномицетов определяют размеры хромосомной ДНК исследуемых штаммов как сумму размеров обнаруженных макрофрагментов ДНК, а также определяют длину молекулы ДНК. Дальнейшие исследования в этой области позволят сделать новые открытия в этой области.

Заключение

Таким образом, на настоящий момент у актиномицетов описана передача генетического материала с помощью плазмид, причем для данной группы микроорганизмов характерны не только кольцевые плазмиды, но также и линейные. Хорошо изучен процесс трансдукции, осуществляемый с помощью актинофага, а рекомбинация еще находится на стадии изучения.

На основании конъюгационных скрещиваний с конца 50-х годов были созданы кольцевые генетические карты актиномицетов. При создании генетических карт применяются химические и физические методы, наиболее эффективным является метод ДНК-гибридизации, осуществляемый с использованием олигонуклеотидных праймеров.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Айала Ф., Кайгер Дж. Современная генетика / Ф. Айала, Дж. Кайгер.- М.: Мир, 1987.- 368 с.
2. Гершковиш И. Генетика / И. Гершковиш. - М.: Мир, 1970. – 280 с.
3. Захаров И.А., Мацелюх Б.П. Генетические карты микроорганизмов / И.А.Захаров, Б. П. Мацелюх. - М.: Наука, 1986. – 250c.
4. Прозоров А.А. Строение генома бактерий: единство или многообразие? // Генетика. – 1995. – Т. 31. – № 6. – С. 741–752.
5. Прокофьева-Бельговская А.А. Строение и развитие актиномицетов / А.А. Прокофьева-Бельговская. – М., 1963. – 250 с.
6. Рыбчин В.Н. Основы генетичесой иженерии./ В.Н.Рыбчин. - С.-П.: Издательство СПбГТУ,1999.- 350с.
7. Сингер М., Берг Б. Гены и геномы./ М. Сингер, Б. Берг.- М.: Мир, 1998.- 394с.