Гемофилы и инфекции, вызванные гемофильной бактериями

В 1889 г. М.И. Афанасьев и в 1892 г. Р. Пфейффер и С. Китасато при изучении этиологии гриппа из мокроты больных выделили мелкие палочковидные грамотрицательные микроорганизмы. Выделенные бактерии, которые впоследствии были включены в род Haemophilus, долгие годы считались возбудителем гриппа. При дальнейшем их изучении было установлено, что они не являются возбудителями гриппа, а способны вызывать различные воспалительные процессы.

Морфология и физиология. Haemophilus influenzae имеет вид мелких палочек. Встречаются нитевидные формы. Свежевыделенные бактерии имеют капсулу. Спор не образуют. Палочки инфлюэнцы требовательны к условиям культивирования, они нуждаются в присутствии гемина и НАД (никотинамиддинуклеотида). Гемин освобождается из эритроцитов при нагревании. Для культивирования используют агар с гретой кровью. В настоящее время разработаны Синтетические питательные среды с добавлением факторов роста. Выросшие колонии небольшие, прозрачные, плоские. Обладают небольшой ферментативной активностью. Расщепляют глюкозу и сахарозу с образованием кислоты, менее постоянно расщепляют галактозу, фруктозу, мальтозу и ксилозу.

Антигены. Видовая антигенная специфичность обусловливается капсульным полисахаридом. Капсульные штаммы на основании различия в капсульном полисахариде разделяются на несколько сероваров: а, b, с и т.д. Некапсульные штаммы имеют только термостабильный соматический антиген. Наиболее часто из организма выделяются штаммы серовара b.

Патогенность и патогенез. Вирулентные свойства Н.influenzae связаны с капсульным полисахаридом, который защищает бактерии от фагоцитоза. Токсичность связана с ЛПС и продукцией мембранотоксина (гемолизина). Гемофилы инфлюэнцы выделяют фермент протеазу, разрушающую секреторные иммуноглобулины (SIgA). В организме человека Haemophilus influenzae локализуется на слизистой оболочке верхних дыхательных путей и вызывает у человека заболевания с различными клиническими проявлениями: менингит, эндокардит, поражения дыхательного тракта, отит, конъюнктивит, гнойные воспалительные поражения суставов и др. Некапсульные варианты возбудителя часто выделяются от больных хроническими бронхитами, бронхиальной астмой. Наиболее часто болеют дети до 5 лет.

Экология и эпидемиология. У здоровых людей средой обитания Н. influenzae является слизистая оболочка верхних дыхательных путей. Источник инфекции - человек. Передача происходит воздушно-капельным путем. Во многих случаях является причиной вторичных инфекций, которые возникают как осложнения после перенесения основного заболевания в связи с развитием иммунодефицита.

Инфекции, вызванные гемофильной бактериями

Часто возбудителем менингита, септицемии, пневмонии, бронхита, отита, эндокардита, острых респираторных и вторичных инфекций может быть Haemophilus influenzae. Наиболее чувствительными к гемофильная бактерий дети от 3-х месяцев до 6 лет. По структуре капсульных антигенов HAnfluenzae разделяют на 6 сероваров (a, b, с, d, е, f). Тяжелые формы заболеваний, особенно менингита, как правило, вызывает серовар Ь. Вторым патогенным представителем рода гемофил является Н. ducrey - возбудитель мягкого шанкра. Остальные 14 видов для человека не патогенны.

Материалы для исследования

Материалом для исследования при менингите служит ликвор, септицемии - кровь, при пневмонии - мокроты, при других процессах - навоз и слизь из носоглотки, которые забирают от больных с помощью ватных тампонов.

Микроскопические исследования

Изготовлены и зафиксированы мазки окрашивают по Граму или водным фуксином в течение 5 мин. При микроскопии видны мелкие палочковидные грамотрицательные бактерии, которые не образуют спор, но имеют капсулы, располагаются поодиночке, реже в виде цепочек. При большом количестве возбудителя в исследуемом материале (спинномозговая жидкость, гной, слизь, мокрота) его легко и быстро можно обнаружить с помощью феномена набухание капсул или реакции иммунофлуоресценции, если использовать соответствующие диагностические сыворотки.

Бактериологические исследования

Чистые культуры гемофильная бактерий выделяют путем немедленного посева исследуемого материала на специальные питательные среды (кровяной, шоколадный или сердечно-мозговой агар, среда Левинталя или Файлдса). Для подавления кокковой флоры к сред добавляют 15-25 ЕД / мл пенициллина. На простых средах гемофильные бактерии не растут. Спинномозговую жидкость и серозные обшлага сначала центрифугируют и осадок сеют петлей на одном из плотных сред. При септицемии сеют 10 мл крови в 100 мл жидкой среды Файддса. Через 24 часа делают высев на агар, где через сутки вырастают маленькие выпуклые прозрачные колонии. На шоколадном агаре колонии появляются через 36-48 ч, они немного больше по размерам и полупрозрачные. На кровяном агаре с добавлением сердечно-мозгового экстракта через сутки вырастают мелкие выпуклые колонии с радужными переливами. Колонии безкапсульних вариантов гемофил не имеют такого радужного расцвета. Из типичных колоний готовят мазки и окрашивают по Граму. При обнаружении маленьких грамотрицательных палочек сообщают врачу предварительные результаты. Н. influenzae первых генерациях может быть в капсульные и безкапсульний форме. Для окончательной идентификации выделенных культур проводят реакцию набухание капсул, исследуют потребности для роста X-и Y-факторов, Каталазную, оксидазно, уреазный, в-галактозидазной и гемолитическую активность, ферментацию углеводов, выделение индола и сероводорода. H.influenzaeпродукуе каталазу, уреазу, в-галакгозидазу, нитратредуктазы, выделяет индол, постоянно ферментирует глюкозу и сахарозу. Другие из перечисленных биохимических тестов отрицательные. Основное значение для идентификации имеют феномен набухания капсул и исследование потребности для роста X-и Y-факторов. Для выявления такой необходимости исследуемый материал засевают на среду, на поверхность которого затем кладут стандартные полоски бумаги, пропитанные X-и Y-факторами. Интенсивный рост бактерий вокруг полосок (а не в других участках агара) подтверждает наличие Н. influenzae. Серологическую идентификацию культур, еще на этапе получения изолированных колоний, можно провести с помощью реакции агглютинации на стекле с капсульный антиген (a, b, с, d, е, f) с соответствующими поли-и монорецепторными диагностическими сыворотками. Выделенные культуры необходимо дифференцировать от возбудителей коклюша и паракоклюш. Для диагностики менингита, вызванный гемофильной бактериями, используют также метод встречного имуноелекгрофорезу. Образование линий преципитации обнаруживает полисахаридные антигены гемофил, что доказывает этиологическую роль H.influenzae в возникновении заболевания.