Листерии

Содержание 

Введение

1.  История изучения

2.  Классификация и таксономия

3. Морфологические свойства

4.  Культуральные свойства

5.  Биохимические свойства

6.  Антигенные особенности 

7. Листериоз

1. Факторы патогенности
2. Пути передачи
3. Патогенез и клинические проявления
4. Лечение
5. Профилактика

8. Способы идентификации и индикации в объектах внешней среды и в организме человека

Заключение

Список используемой литературы

 

 

 

 

 

 

 

 

Введение 

Листерии являются возбудителями  острой инфекционной болезни зоонозной  природы, называемой листериозом. Листериоз характеризуется множественностью путей заражения, полиморфизмом клинической картины с поражением заглоточных и других лимфатических узлов, мононуклеарной реакцией белой крови, часто с септицемией и поражением центральной нервной системы. Листерии являются аэробами, представляют собой небольших размеров, грамположительные, подвижные - за счёт наличия жгутиков - палочки с тенденцией к образованию цепочек из трёх, пяти и более клеток.

Несмотря на то, что с  первого установления листериоза у животных прошло более 100 лет, проблема этой инфекции привлекает все возрастающее внимание ветеринарных и медицинских работников. Это обусловлено широкой распространенностью листерий в природе, увеличением числа заболевших листериозом людей, высоким уровнем летальности при генерализированных формах инфекции, бессимптомным листерионосительством, значительным экономическим ущербом от заболеваемости и падежа сельскохозяйственных животных и затратами на профилактические мероприятия.

1. История изучения

В 1924 г. в Лондоне Марри  и Иртон (Е- S. Murray, Irton), а в 1926 г. Марри, Уаоб, Суонн (Е. S. Murray, R. Webb, M. Swarm) описали микроорганизм, выделенный ими при своеобразном сепсисе, возникшем у морских свинок и кроликов в питомнике Кембриджского университета, и назвали его Bact. monocytogenes, так как введение его в кровь подопытных животных вызывало моноцитоз в крови. В 1927 г. Пири (J. H. Pirie) выделил тот же микроорганизм от крысоподобного грызуна Tatera lobengullae в Южной Африке и назвал его Listerella hepatolytica в честь Дж. Листера. Листериоз человека впервые наблюдал в 1915 г. австралийский врач Аткинсон (Б. Atkinson) в виде вспышки детского паралича. В 1918 г. Французские врачи Дюмон и Котони (J. Dumont, L. Cotoni) выделили из цереброспинальной жидкости солдата, умершего от менингита, микроб, который через 20 лет был идентифицирован Патерсоном (S. Раterson) как Listerella monocytogenes. Нифельдт (A. Nyfeldt) в 1929 г. выделил этого возбудителя при моноцитарной ангине человека. В 1935 и 1936 гг. Берн (С. Burn) описал листериоз у родильниц, новорожденных и у больного менингитом. К 1940 г. Нифельдт получил из крови и цереброспинальной жидкости больных моконуклеозом 13 штаммов возбудителя. В том же 1940 г. Пири переименовал родовое название «Listerella» в «Listeria», т. к. первое название уже было дано роду грибка Муcetozoon, и обозначил возбудителя как Listeria monocytogenes. Соответственно этому и болезнь принято называть листериозом. В СССР Л. описан сначала у свиней Т.П. Слабоспицким (1936, 1938, 1940), затем у кроликов П.П. Сахаровым и И.С. Истоминым (1940), П.И. Свинцовым (1942). П.П. Сахаров и Е.II. Гудкова 11946), А.Ф. Билибин (1949) описали листериоз у людей при менингоэнцефэлнтах (БМЭ, 1980).

2. Классификация и таксономия

Царство: Bacteria

Класс: Bacilli

Порядок: Bacillales

Семейство: Listeriaceae

Род: Listeria

Типовой вид: Listeria monocytogenes..

В определителе бактерий Берджи (1997), род Listeria включает около 7 видов: Listeria monocytogenes , Listeria welshimeri, Listeria grayi, Listeria murrayi, Listeria innocua, Listeria ivanovii, Listeria selligeri. Только L.monocytogenes патогенна для человека и животных, а L.ivanovii – для животных. Хотя известно не менее 16 сероваров L.monocytogenes, большая часть случаев заболеваний связана с сероварами 4b, 1/2а, 1/2b.

3. Морфологические свойства

Морфологически листерии представляют собой мелкие кокковидные палочки длиной 0,5—2 мкм и шириной 0,4—0,5 мкм. Палочки слегка изогнутой формы, с закругленными концами, в препарате часто располагаются под углом друг к другу или параллельно. Род Listeria образуют палочковидные бактерии, образующие короткие цепочки из 3-5 клеток. В мазках из молодых S-колоний располагаются в виде палисадника либо V- и Y-образно.

Бактерии подвижны, имеют  один или несколько (1—4) жгутиков (перитрихи) при выращивании при 20-25°С; совершают характерные «кувыркающиеся» движения. Культивирование при 37°С приводит к резкому снижению подвижности вплоть до её потери. Спор и капсул не образуют. Грамположительны, в старых культурах могут быть грамотрицательны.

 

4. Культуральные свойства

Выделение культуры и ее идентификация являются необходимыми для окончательного подтверждения  диагноза листериозной инфекции. Для выделения листерий из клинического материала и продуктов питания используют селективные факторы. Наибольшее значение имеют температурный фактор и селективные добавки. Метод холодового обогащения при температуре +4^oС, основанный на психрофильности листерий, весьма эффективен, но из-за длительных сроков инкубации (10-60 дней) не может быть рекомендован для клинической диагностики. В современных схемах выделения листерий обычно используют инкубацию при температуре 30^oС в течение 24-48 ч в бульоне с селективными добавками для обогащения исследуемого образца.

Среди широкой гаммы селективных  агентов, использовавшихся в разное время для выделения листерий, наибольшее значение сохраняют ингибиторы сопутствующей микрофлоры и дифференцирующие индикаторы: теллурит калия, налидиксовая кислота, хлорид лития, акрифлавин, эскулин, красители (фенилрот), антибиотики (цефтазидим, полимиксин B), циклогексимид.

Наибольшее распространение  для выделения листерий получили Оксфорд агар и PALCAM агар. В состав Оксфорд агара входят следующие селективные добавки (в г/л): эскулин – 1,0; цитрат железистого аммония – 0,5; хлорид лития – 15,0; циглогексимид – 0,4; колистин – 0,02; акрифлавин – 0,005; цефотетан – 0,002; фосфомицин – 0,01. В состав PALCAM агара входят (в г/л): эскулин – 0,8; цитрат железистого аммония – 0,5; хлорид лития – 15,0; акрифлавин – 0,005; полимиксин В – 0,01; цефтазидим – 0,02; фенилрот – 0,08.

В качестве обогатительного  бульона обычно используют различные  варианты триптиказосоевого бульона с дрожжевым экстратом и селективным компонентом, включающим солянокислый акрифлавин (0,02-0,01 г/л), налидиксовую кислоту (0,05-0,01 г/л) и циклогексимид (0,05-0,01 г/л).

Схемы выделения листерий в зависимости от степени контаминации и количества листерий в исследуемом  материале включают либо непосредственный высев на селективный агар, либо обогащение исследуемого образца на селективном бульоне при температуре 30^oС в течение 24-48 ч с последующим высевом на селективный агар.

На Оксфорд агаре вырастают черные колонии L.monocytogenes, окруженные черным ореолом.

На PALCAM агаре колонии листерий серо-зеленые с черным вогнутым центром (рис. 3). Для них также характерен черный ореол на красном фоне агара. Последующий анализ характерных колоний, утилизирующих эскулин (в результате чего и происходит почернение среды), позволяет на основании ограниченного числа тестов идентифицировать культуру L.monocytogenes.

Весьма информативен САМР-тест, в котором культура L.monocytogenes дает положительную реакцию, образуя зону усиления гемолиза с гемолитическим штаммом Staphylococcus aureus и, в большинстве случаев отрицательную с Rhodococcus equi на чашках с кровяным агаром. Для идентификации листерий в качестве дополнительных тестов используют агглютинацию с поливалентной листериозной сывороткой и фаготипирование с помощью диагностичесого набора типовых листериозных бактериофагов (L2A и L4A), лизирующих 60-80% выделенных культур листерий.

5. Биохимические свойства

Листерии — факультативные аэробы, хорошо, но не обильно развиваются  на обычных нейтральных или слабощелочных (при рН 7,0—7,2) мясопептонных средах, пышно растут при добавлении в  среды глюкозы или сыворотки.

На твердых средах при  сплошном посеве листерии образуют сплошной тонкий и голубоватый налет, иногда с трудом обнаруживаемый. Культуры имеют характерный запах творога  или молочной сыворотки, обусловленный  накоплением продуктов углеводного  обмена. Изолированные 24-48-часовые колонии  мелкие (1-2 мм), больших размеров достигают  на средах с глюкозой. Образуют S- и R-диссоциаты. S-колокии гладкие, резко очерченные, вьпуклые (позднее происходит их уплотнение с центральным возвышением), прозрачные, бесцветные или нежно-голубоватые, в падающем свете серовато-молочные.R-колонии шероховатые, с утолщённым зазубренным краем и возвышающейся грубозернистой массой, достигают 1,5-3 мм; S-R-переход сопровождается снижением гемолитической активности ч потерей вирулентности. В жидких средах дают равномерное помутнение, с последующим выпадением осадка, осадок слизистый, трудно диспергируемый. В полужидких средах дают рост по уколу, более обильный у поверхности (факультативный аэроб) с отходящим помутнением (особенно на глубине 3-5мм). В МПЖ некоторые 10- суточные культуры образуют перпендикулярные выросты; в желатине с глюкозой растут в виде «щёточки» или «вязанки хвороста».

Оптимальная температура  выращивания 37°С, может расти при более низких температурах, физиологическое развитие происходит при 18-20'С (температура оптимальна для образования жгутиков, но удлиняет срок выделения и роста культуры). Ферментативные свойства выражены слабо: они ферментируют до кислоты без газообразования глюкозу, мальтозу, рамнозу, левулезу, эскулин, салицин и непостоянно — сахарозу, глицерин, лактозу; не образуют индол, не гидролизируют мочевину, желатину не разжижают, молоко не свертывают. Каталазоположительны, оксидазоотрицательны. Не ферментируют арабинозу, дульцит, инулин и сорбит, не образуют индола и сероводорода, не разжижают желатин, не восстанавливают нитраты в нитриты. При распаде листерий выделяется эндотоксин, экзотоксина возбудитель не продуцирует.

Листерии высокоустойчивы  во внешней среде, растут в широком  интервале температур (от 1 до 45°С) и  рН (от 4 до 10), хорошо переносят низкие температуры и способны размножаться при температуре 4—6°С в почве, воде, на растениях, в органах трупов. В различных пищевых продуктах (молоко, масло, сыр, мясо и др.) листерий размножаются при температуре бытового холодильника, при 70°С погибают через 20—30 мин, при 100°С — через 3—5 мин; инактивируются растворами формалина (0,5—1%), хлорамина (3— 5%) и другими обычными дезинфицирующими средствами. Листерий чувствительны к пенициллином, тетрациклином, аминогликозидам, фторхинолонам нового поколения, устойчивы к цефалоспоринам.  

Входные ворота для возбудителя— миндалины, слизистые оболочки глаз, дыхательных путей, полости рта и кишечника, а также микротравмы кожных покровов. Возбудитель может диссемииировать по кровеносным и лимфатическим путям и проникать в различные органы и ткани, а том числе мозговые оболочки и ЦНС.

Важным фактором патогенности листерий является листериозин О, обладающей гемолитической активностью и определяющей вирулентность микроба; к менее значимым факторам их патогенности относятся фосфатидилиназитол, интерналин А, интерналин В, белок ActA и др.

Лучше всего изучен листериозин О – порообразующий тиолзависимый гемолизин с молекулярной массой 58 кДа. Листериозин, "главный фактор" патогенности листерий, обладает выраженным токсическим эффектом при заражении лабораторных животных, вызывая их гибель. При взаимодействии с эукариотической клеткой листериозин О участвует в лизисе вакуоли (первичной и вторичной), обеспечивая свободное деление листерий в цитоплазме.

Металлопротеаза – полипептид с молекулярной массой около 60 кДа. Благодаря металлопротеазе неактивная форма лецитиназы с молекулярной массой 33 кДа переходит в активную форму с молекулярной массой 29 кДа.

На этапах инвазии выявлена роль нескольких поверхностных белков. Интерналин А (InlA), белок с молекулярной массой 88 кДа, участвует в инвазии эпителиальных клеток. Интерналин В, белок клеточной стенки с молекулярной массой 65 кДа, необходим для инвазии клеток гепатоцитов, но не эпителия кишечника. По-видимому, экспрессия inlA и inlB отражает специфику клеточного тропизма листерий. На этапе инвазии важную роль играет главный внеклеточный белок Р60. Это муреингидролаза, необходимая также для клеточного деления и выявляемая у всех видов рода Listeria.

Способность листерий индуировать полимеризацию актина обеспечивает возможность активного движения возбудителя по цитоплазме клеток. В этом процессе участвует поверхностный белок actA с молекулярной массой 67 кДа, индуцирующий полимеризацию актина. Гены, кодирующие известные факторы вирулентности, расположены на фрагменте хромосомы размерами около 10 тыс. пар нуклеотидов. Функционально они объединены в 4 оперона, транскрипция которых полностью (ген plcA и гены mpl – actA оперона) или частично (hly и inlAB) находится под контролем регуляторного белка PrfA. Сам ген prfA может транскрибироваться как с двух собственных PrfA-независимых промоторов, так и в составе бицистронного транскрипта, индуцирующегося на промоторе гена plcA. Это позволяет PrfA контролировать свою собственную экспрессию.

6. Антигенные особенности

Листерии имеют два  типа антигена: соматический (О-Аг) и жгутиковый (Н-Аг). По структуре пяти термолабильных жгутиковых (Н-) и: четырнадцати термостабильных углеводных соматических Аг выделено 16 сероваров. Три серовара (4b, l/2b, 1/2а) вызывают 90% всех случаев листериоза человека.

Листерии имеют антигенное родство со стафилококками, энтерококками, сенной палочкой и особенно с возбудителем свиной рожи (эризипелоид), что затрудняет серологическую диагностику болезни.

7. Листериоз.

1. Факторы патогенности

Патогенные листерии обладают набором биологически активных молекул  и белков (листериолизин О, фосфолипаза С, лецитиназа, интерналин, белки ActA и PrfA), позволяющим активно проникать и размножаться не только в фагоцитах, но и эндотелиальных и эпителиальных клетках. Способность перемещаться по цитоплазме клетки за счет полимеризации актина и переходить из клетки в клетку «продавливая» мембрану позволяет патогенным листериям легко преодолевать барьеры слизистой оболочки кишечника без контакта с антителами, комплементом и нейтрофилами. Поступая в кровяное русло возбудитель может перемещаться в главные места локализации поражая мозг и плаценту.