Микробиология стафилококковой инфекции

Тема: Микробиология стафилококковой инфекции.

 

План:

таксономия,

морфологические, тинкториальные, культуральные, биохимические и антигенные свойства возбудителя

факторы вирулентности

патогенз

клиническая картина

микробиологическая диагностика

этиотропная терапия

специфическая профилактика

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Таксономия

Стафилококки (греч. staphyle - виноградная гроздь, kokkos - зерно) относятся к отделу Firmicutes семейству Micrococcaceae. Стафилококки открыты в 1878 г. Р. Кохом, а в 1880 г. независимо друг от друга Л. Пастером и А. Огстоном. Стафилококки составляют три вида:

 

1. S. aureus (золотистый стафилококк) объединяет патогенные стафилококки.  

 

2. S. epidermidis (эпидермальный стафилококк) объединяет условно-патогенные стафилококки, постоянных обитателей кожи и слизистых оболочек.

 

3. S. saprophyticus (сапрофитный стафилококк) включает непатогенные стафилококки, часто выделяемые из внешней среды.

Морфологические свойства.

 Стафилококки имеют  сферическую форму. В мазках располагаются  в виде скоплений, напоминающих  виноградную гроздь. Неподвижные. Спор  не образуют. Некоторые штаммы  имеют микрокапсулу.

 

Тинкториальные свойства.

По Граму стафилококки окрашиваются положительно.

 

Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы, быстрее и лучше растут в аэробных условиях. Неприхотливы, растут на простых питательных средах. Могут расти в присутствии 15% NаСl, 40% желчи, при 45°С. Элективной средой является желточно-солевой агар (ЖСА). На агаре формируются круглые колонии, слегка возвышающиеся над поверхностью среды, с ровными краями, S-формы, диаметром 2-4 мм. Колонии окрашены в белый цвет или различные оттенки желтого цвета. В жидких средах стафилококки вызывают равномерное помутнение, затем – рыхлый осадок.

 

Биохимические свойства .

Обладают высокой биохимической активностью: ферментируют многие углеводы до кислоты. Разжижают желатин в виде воронки, образуют сероводород, не продуцируют индол.

 

 

Антигенные свойства.

 Имеются антигены полисахаридной  и полипептидной природы (более 50), обладающие видовой и групповой  специфичностью. Многие антигены  являются сильными аллергенами. Выявлены перекрестно реагирующие  антигены - общие с некоторыми  антигенами эритроцитов, кожи, почек  человека (с ними связаны аутоиммунные  процессы).

 

 

 

Факторы вирулентности стафилококков.

 

1. Факторы адгезии:

 

- микрокапсула (препятствует  фагоцитозу);

 

- протеин  А (располагается поверхностно, связан с пептидогликаном; термолабилен; способен связываться с Fс-фрагментом IgG, в меньшей степени - с IgМ и IgА; образующийся комплекс инактивирует комплемент, индуцирует реакции ГНТ, подавляет фагоцитоз).

 

2. Ферменты агрессии:

 

- нейраминидаза (разрушает  нейраминовую кислоту соединительной ткани);

 

- коагулаза (переводит протромбин в тромбин, который вызывает свертывание фибриногена, в результате чего каждая клетка покрывается белковой пленкой, защищающей от фагоцитов);

 

- фибринолизин (растворяет  сгустки фибрина, что способствует  распространению возбудителя);

 

- гиалуронидаза (разрушает гиалуроновую кислоту соединительной ткани, что способствует распространению возбудителя);

 

- лецитовителлаза (лецитиназа) – разрушает лецитин, содержащийся в строме эритроцитов и мембранах других клеток, обладает антифагоцитарной активностью, свойствами аллергена, способствует увеличению интоксикации;

 

- липаза (способствует разрушению  ткани и усилению интоксикации);

 

- лизоцимподобный фермент (лизирует  клетки микробов - представителей нормальной микрофлоры, облегчает выход из клетки ферментов агрессии и токсинов).

 

3. Экзотоксины:

 

3.1. Мембраноповреждающие токсины (гемолизины):

 

- α-токсин (гемолизин) обнаруживается  у стафилококков, выделенных от  человека. Он лизирует эритроциты человека, кролика, барана. К его действию  чувствительны эндотелиоциты, лейкоциты, фибробласты, гепатоциты, тромбоциты и другие клетки;

 

- β-токсин (гемолизин) продуцируют  стафилококки животного происхождения, лизирует эритроциты человека и барана;

 

- γ-токсин (гемолизин) - двухкомпонентный  гемолизин с умеренной активностью  в отношении эритроцитов человека;

 

- δ-гемолизин лизирует эритроциты человека и многих видов животных.

 

3.2. Эксфолиатины А и В вызывают разрушение зернистого слоя эпидермиса и отслойку рогового слоя. Синтез токсина А (термостабильного) кодируется хромосомным геном, В (термолабильного) - плазмидным. Один и тот же штамм может синтезировать оба эксфолиатина одновременно. Эти токсины обусловливают развитие синдрома “ошпаренной кожи” (пузырчатка новорожденных).

 

3.3. Энтеротоксины А, В, С1, С2, С3, D, Е - термостабильные низкомолекулярные белки. Выдерживают кипячение в течение 1-3 часов и даже кратковременное автоклавирование. Устойчивы к действию спирта, формалина, ферментов желудочно-кишечного тракта, хлора. Эти токсины отвечают за развитие пищевых отравлений. Наиболее часто регистрируют интоксикации, вызываемые энтеротоксинами А и D. У взрослого человека стафилококковый энтеротоксин вызывает поражение в дозе 1-4 мкг.

 

 

 

Патогенез.

 

 

 В организм стафилококки  проникают через поврежденную  кожу и слизистые оболочки, энтеротоксины — с пищей.

 

 Стафилококковые инфекции  чаще развиваются и тяжелее  протекают в условиях снижения  естественной резистентности организма  и при иммунодефицитных состояниях. В патогенезе стафилококковых процессов ведущая роль принадлежит экзотоксинам и ферментам патогенности. Важное значение может иметь и аллергия. Все эти факторы вместе и определяют, возникнут ли локальные гнойно-воспалительные очаги, системные заболевания внутренних органов, сепсис или пищевые токсикозы

Клиника.

Около 120 клинических форм проявления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гнойно-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглотки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (интоксикации).

 

Микробиологическая диагностика.

 Материал для исследования  – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.

 

Бактериоскопический метод: из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие  грам«+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.

Бактериологический метод:

 Материал засевают  петлей на чашки с кровяным  и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСА S. aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков. S.aureus – «+»: образование плазмокоагулазы, лецитиназы. Ферментация: глюк, маннита, образование а-токсина.

Для установления источника госпитальной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по нали­чию лизиса культуры

Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте ( компонент клеточной стенки).

 

Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к бета-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитоксическая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизированный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином. Стафилококковый анатоксин: получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой  и адсорбцией на гидрате оксида алюминия.

Стафилококковая вакцина: взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.

 Иммуноглобулин человеческий  противостафилококковый: гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Ситуационная задача.

В стационар поступил больной с направительным диагнозом «Подозрение на микоплазменную пневмонию».

 

Какой материал взять на исследование?

 

Какой метод микробиологической диагностики следует использовать?

Как этот метод реализовать ?

 

 

 

Материалами для исследования при пневмонии служат: мокрота,

полученная при глубоком откашливании, плевральная жидкость (плевральный

экссудат); пунктат инфильтрата или абсцесса легких, ткань легкого,

полученную при пункции и биопсии легкого, кровь. Посев бронхиальных

смывов (содержимое бронхов, полученное при бронхоскопии) менее

информативен.

 

Микробиологические исследование :необходимо проводить в первые 4

дня от начала заболевания и до назначения антибиотиков (что, к сожалению, не

всегда удается). Кровь исследуют 2-3-кратно (не только на высоте лихорадки,

но и в разные интервалы подъема температуры) не позднее 3-4 дней от начала

заболевания. Тяжелое течение пневмонии или ее предполагаемая

«госпитальная» этиология являются абсолютными показаниями для посева

крови по общепринятым методам с целью получения гемокультуры аэробных и

анаэробных возбудителей.

Повторные микробиологические исследования проводятся при

неэффективности антибактериальной терапии, при затяжном течении

пневмонии при появлении рентгенологических, клинических и лабораторных

данных, указывающих на возникновение суперинфекции, а также при

выделении нетипичных условно-патогенных бактерий в диагностических

титрах.

Успешность проведения микробиологических исследований определяется

своевременным получением полноценного материала из очага воспаления,

чувствительностью и специфичностью методов индикации возбудителя, его

выделения и идентификации с учетом критериев оценки их этиологической

значимости.

Комплексное микробиологическое обследование больных при

пневмониях начинается с исследования мокроты.

 

 

При сборе мокроты путем откашливания необходимо соблюдать

следующие правила:

- исследуют утреннюю порцию  мокроты, полученную до приема  пищи 

(при возможности получить  мокроту до начала антибактериальной 

терапии сбор можно осуществлять в любое время);

- перед сбором мокроты  необходимо осуществить туалет  полости рта 

(больной должен почистить  зубы, тщательно прополоскать рот 

кипяченой водой или слабым раствором антисептика,);

- больного необходимо  проинструктировать о необходимости  получить 

содержимое нижних отделов дыхательных путей, но не содержимого

ротоглотки и носоглотки;

- мокроту собирают в  стерильную посуду;

- храниться собранная  мокрота должна не более 2 часов  при комнатной 

температуре, или 2-3 часов в холодильнике при 40С, поскольку более

длительное хранение может привести к искажению результатов за счет

чрезмерного роста контаминирующей микрофлоры и гибели

малоустойчивых видов микроорганизмов (стрептококки) до начала

исследования, а также развития процессов брожения.

При отсутствии мокроты или плохом ее отделении (непродуктивный

кашель), что характерно для пневмоний, вызванных Mycoplasma spp.,

бронхиальный секрет аспирируют через назотрахеальный зонд. Для лучшего

отхождения мокроты иногда проводят ингаляцию аэрозолем теплого

физиологического раствора.

Для ориентировочного суждения о характере и количестве микрофлоры в

мокроте из нее готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют.

Мазки для бактериоскопии готовят (без разведения!) из гнойных

комочков мокроты (хлопьевидные включения) или из материала, более всего

приближенного к ней.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского» Министерства здравоохранения Российской Федерации

(ГБОУ ВПО  Саратовский ГМУ им. В.И.Разумовского  Минздрава России)

 

 

 

 

КОНТРОЛЬНАЯ РАБОТА

 

Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологи

Тема: «Микробиология пневмококковой инфекции.»

 

 

 

 

 

 

 

 

 Выполнила:студентка 2-го курса .группы № 3

Заочного отделения  фармацевтического факультета СГМУ,

Янкина Мария Станиславовна

Шифр : 120670

,

 

 

Саратов 2014.

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского» Министерства здравоохранения Российской Федерации

(ГБОУ ВПО  Саратовский ГМУ им. В.И.Разумовского  Минздрава России)