Объекты исследования в химико-токсилогическом анализе на сильнодействующие и наркотические вещества

При изменении температуры может изменяться диссоциация и ассоциация вещества в соответствующей фазе. Поэтому при изменении температуры изменяется гидратация (сольватация) и экстрагируемость химических соединений.

Влияние электролитов на экстракцию. Понижение растворимости веществ в водных растворах под влиянием электролитов называется высаливанием, а повышение растворимости – всаливанием.

Высаливание является фактором, понижающим растворимость веществ в воде и повышающим их экстрагируемость органическими растворителями из водных растворов.

Лекарственные и наркотические средства, поступающие на исследование, крайне редко являются индивидуальными соединениями. Нередко объектами исследования являются поступающие из незаконного оборота синтетические наркотические средства, которые производятся в подпольных лабораториях. В подавляющем большинстве случаев они имеют в своем составе различные наполнители и добавки (сахар, соли жирных кислот, крахмал, сода, тальк и др.), либо содержат загрязнения или промежуточные и побочные продукты синтеза, содержание же наркотически активного компонента в таких препаратах очень низкое.

При этом разделение, выделение, концентрирование и очистка целевых компонентов традиционными методами (например, жидкостной экстракцией) неэффективны, а иногда просто невозможны. Решение такого рода проблем возможно при применении на стадии пробоподготовки метода твердофазной экстракции, позволяющего осуществлять одновременное разделение, выделение и концентрирование целевых компонентов из биологических жидкостей и их экстрактов, лекарственных и нативных наркотических средств.

Такой подход дает возможность получения веществ в чистом виде, что в дальнейшем позволяет проводить идентификацию методами ИК-, УФ– спектроскопии, ТСХ, ГЖ, ВЭЖХ, методом хромато-масс-спектрометрии.

В основе метода твердофазной экстракции лежит принцип колоночной хроматографии, который основан на специфическом взаимодействии выделяемого из биоматериала компонента с сорбентом, находящимся в небольшом патроне. Патрон–картридж имеет полиэтиленовую оболочку, внутри которой находится сорбент, упакованный между двумя пористыми фильтрами. Патроны могут соединяться друг с другом, представляя более широкие возможности для их использования. Чаще всего для заполнения патронов применяют сорбенты на основе силикагеля и химически модифицированного силикагеля. Для модификации силикагеля используются вещества, содержащие различные функциональные группы (нитрильные, диольные, амино-, карбокси- и сульфогруппы), а также алифатические (С1 –С18) и ароматические (фенильные) группы. Выбор соответствующего типа патрона связан со свойствами определяемого вещества и осуществляется по типу подобия.

Часто в практике ХТА используются отечественные патроны фирмы “Диапак”, заполненные немодифицированным силикагелем (Диапак Силикагель) и силикагелем, модифицированным гексадецильными группами С16 (Диапак С16).

При использовании патронов Диапак для большинства веществ проводят следующие операции.

1. Активация –  приведение патрона в рабочее  состояние путем промывки этиловым  или метиловым спиртом (2-10 мл). Скорость  пропускания 2, мл/мин.

2. Кондиционирование  – пропускание буферного раствора (ацетатного или аммиачного) в  зависимости от исследуемых веществ. Объем буферного раствора – 10 мл. Скорость пропускания 2,5 мл/мин.

3. Сорбция –  пропускание исследуемого раствора  через патрон. Объем пробы обычно 100 мл. Скорость пропускания 2,5 мл/мин.

4. Десорбция –  удаление исследуемого вещества  с сорбента с помощью воздуха  шприцем или вакуумным насосом.

5. Элюирование  образца осуществляется реагентом, который применялся на стадии  активации. Объем элюента – 50-100 мл.

Высокая эффективность выпускаемых патронов позволяет использовать их для пробоподготовки широкого круга объектов – от лекарственных препаратов сложного состава до “уличных наркотиков” и биологических жидкостей (моча, кровь, сыворотка и т.д.), а также экстрактов биологических жидкостей.

Жидкость – жидкостная экстракция как метод изолирования является на сегодняшний день самым распространенным способом выделения наркотических веществ из биообъектов.

Экстракция веществ кислого и основного характера. 50 мл мочи в делительной воронке на 200 мл подкисляют 2 М соляной кислотой до рН 1-2 по универсальному индикатору. Добавляют 50 мл диэтилового эфира и проводят экстракцию в течение 3-5 минут (перемешивая фазы, без энергичного встряхивания). После разделения фаз нижнюю водную фазу сливают в другую делительную воронку, содержащую 50 мл диэтилового эфира, а органическую фазу фильтруют через безводный сульфат натрия в сухой стакан. Повторную экстракцию из водной фазы проводят аналогично. Эфирное извлечение фильтруют через безводный Na2SO4 и обе эфирные вытяжки объединяют (экстракт I).

Водную фазу сохраняют, переносят в делительную воронку, доводят рН до 9-10 NaOH. Затем проводят экстракцию 50 мл хлороформа в течение 3- минут. Затем нижнюю органическую фазу сливают, фильтруя через безводный сульфат натрия в сухой стакан. Водную фазу повторно экстрагируют 50 мл хлороформа. Органические фазы объединяют (экстракт 2). Водную фазу отбрасывают.

Органические растворители из экстрактов 1 и 2 удаляют в испарительных чашках в токе теплого воздуха. Сухие остатки экстрактов 1 и 2 растворяют в 1-2 мл хлороформа или диэтилового эфира и переносят в маркированные пробирки с притертыми пробками.

Экстракт 1 содержит вещества кислого, нейтрального и слабоосновного характера), экстракт 2 – вещества основного характера. Далее проводят анализ экстрактов.

Некоторые вещества метаболически связаны с белком или конъюгированы (т.е. биохимически переведены в водорастворимые производные, например, с глюкуроновой кислотой). Поэтому биожидкость перед экстракцией необходимо гидролизовать для того, чтобы разрушить конъюгант перед изолированием.

 

 

 

 

Литература

 

Учебно-методическое пособие для студентов по специальности 060108 – Фармация Воронеж 2004 2 Утверждено научно-методическим советом фармацевтического факультета, протокол №3 от 11.05.2004 г.