Определение скорости свертывания крови

                                      СОДЕРЖАНИЕ

1.Определение  скорости свертывания крови

2.Группы крови

3. Реакция агглютинации

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                  Определение скорости свертывания крови

Скорость свертывания  крови зависит от ее физико-химических свойств, температуры окружающей среды, величины травмы и методики.

Определяют скорость свертывания  крови способами Бюркера, Фи-тзорда, Ситковского — Егорова. Необходимо учитывать, что результаты, получаемые этими методами, неодинаковые.

За последнее время  наиболее практическим и удобным  способом является метод Ли и Уайта, для выполнения которых требуется не более 1—2 мл свежевыпущенной крови.

По мнению некоторых авторов определение скорости свертывания крови в пробирках, предварительно обработанных силиконом, дает более точные результаты и возможность выявлять ранние формы нарушений свертываемости при патологическом состоянии организма.

Ускорение свертываемости отмечают при кровопотерях, замедление —  при повышении антикоагулянтной активности крови (гипофибри-лемия и др.)

Скорость свертывания крови замедляется на холоду, при механических желтухах, авитаминозе К и при некоторых заболеваниях, например гемофилии. Свертыванию крови препятствует гирудин, имеющийся в слюнных железах пиявок, который тормозит действие тромбина. Парафин, нанесенный на стенки сосуда, также резко замедляет свертывание крови, так как при этом создается гладкая поверхность и не происходит разрушения тромбоцитов.

Замедление скорости свертывания крови при авитаминозе , как показали еще первые исследования, связано с понижением содержания в крови одного из специфических белков - протромбина. Гипопротромби-немия встречается при авитаминозе К настолько закономерно, что обычно рассматривается как весьма характерное проявление этого авитаминоза. Таким образом, создалось впечатление, что витамин К необходим для нормального синтеза в печени протромбина.

Для определения скорости свертывания крови необходимо, чтобы взятие крови не сопровождалось травмой форменных элементов и не имело места внесение в кровь посторонних веществ.

Витамины группы К необходимы животным для нормального свертывания крови; при недостатке их скорость свертывания крови резко понижается, и иногда наблюдается гибель животных от внутренних кровоизлияний.

При авитаминозе К появляются подкожные и внутримышечные кровоизлияния  ( геморрагии) и снижается скорость свертывания крови. Свертывание крови [ - это сложный процесс, в котором участвуют, кроме протромбина, белок крови фибриноген, фермент тромбокиназа, соли кальция и ряд другюГменее изученных факторов. Гипопротромбинемия встречается при авитаминозе К настолько закономерно, что может считаться характерным проявлением этого авитаминоза. Все явления авитаминоза исчезают после введения препаратов витамина К.

Принцип определения содержания протромбина основан на том, что  в присутствии определенного  количества тромбокиназы скорость свертывания крови зависит от содержания в ней протромбина.

                                                  Группа крови

 
Определение группы крови – это  несложная, но очень ответственная  процедура. Поэтому врач должен контролировать правильность проведения исследования и оценивать его результаты. 
 
Группу крови в системе АВ0 определяют, исследуя эритроциты индивидуума в реакциях гемагглютинации с анти-А и анти-В сыворотками. Результаты этой реакции обычно подтверждают, выявляя "нормальные" анти-А- и анти-В-антитела. В сыворотке, как правило, присутствуют "нормальные" антитела только к тем антигенам, которые не экспрессированы на эритроцитах данного индивидуума. 
 
Прежде чем приступить к исследованию, необходимо убедиться, что флаконы со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками правильно расположены в штативе, прозрачны, не содержат осадка и срок годности, указанный на их этикетках, не истек. 
 
Ниже в таблице показаны результаты реакции с диагностическими препаратами сывороток и эритроцитов при группах крови А, В, О и АВ.

Реагент	Фенотип исследуемогообразца				Примечания
	А	В	0	АВ
Сыворотка анти-А	+	–	–	+	Реакцию проводят с исследуемыми эритроцитами и стандартной анти-сывороткой (определяют группу эритроцитов)
Сыворотка анти-В	–	+	–	+
Эритроциты группы А	–	+	+	–	Реакцию проводят с исследуемой  сывороткой и стандартными эритроцитами (определяют группу сыворотки)
Эритроциты группы В	+	–	+	–
Эритроциты группы 0	–	–	–	–

 

 
Группа крови – это индивидуальная антигенная характеристика эритроцитов. Определяется методами идентификации специфических групп белков и углеводов, которые включены в мембраны эритроцитов у животных. Таким образом, происходит разделение представителей одного биологического вида по особенностям их крови.  
 
Переливание крови разноименных групп вызывает групповую несовместимость. Групповая несовместимость обусловлена тем, что взаимодействие одноименных агглютининов и агглютиногенов вызывает склеивание эритроцитов и последующий гемолиз. Перед переливанием крови необходимо исследовать совместимость крови реципиента и донора крови. 
 
У разных животных разное количество групп крови. У собак – 8, у кошек – 3, у свиней – 16, у лошадей – 8 или 10, у кур – 14 и т.д. Наиболее изучены группы крови сельскохозяйственных животных и птиц, а также наиболее распространенных домашних животных. В ветеринарии определение групп крови необходимо не только в медицинских целях, а как правило для определения отцовства, для линейного разведения, для того, чтобы установить структуру породы, для проверки породы предназначенной на импорт или экспорт.  
Группы крови у собаки. 
У собаки имеется 6 групп антигенов, соответствующих 6 группам крови. На практике учитывается статус собаки на основании двух детерминант, которые имеют наиболее выраженную антигенную реакцию и рассматриваются в рамках А1 и А2. Иными словами, животное располагает одной из этих двух детерминант и имеет название А+ (А1+ или А2+) или они отсутствуют у собаки с А-. 
Собак с А- меньше (40% собак), но они также составляют популяцию, чувствительную к развитию трансфузионных осложнений, если они содержат в крови антитела анти-А1 или анти-А2. 
Собаки с А-, наоборот, являются «универсальными донорами»., в то время как особи с А+ относятся к «универсальным реципиентам». 
Проблема совместимости возникает в случае, когда собаке назначили трансфузию неоднократно: у собак редко встречаются естественные антитела к антигенам эритроцитов ( выявлено у 15% собак), но, с другой стороны, персистенция этих антител, направленных против антигенов другой группы, не имеет отношения к осложнениям, возникающим в результате трансфузии. Стимуляция иммунной системы антигенами при трансфузии приводит к появлению антител, направленных против антигенных детерминант донора. Гемолитические последствия при этом возможны, если проводится повторная трансфузия несовместимой крови. Таким образом, первое переливание крови у собак считается безопасным. Перед повторной трансфузией необходимо либо определение группы крови, либо проведение перекрестной пробы. 
Другие группы крови менее иммуногены и не вызывают проблем во время трансфузии. Обычно они ответственны за снижение выживаемости эритроцитов. 
Группы крови у кошек. 
У кошки можно встретить 3 фенотипа- группы крови: А, В и АВ. В отличие от собаки, кошка, как и человек, имеет естественные антитела в плазме, специфичные к другим группам крови. 
Группа А является достоянием 90% популяции кошек. Из них 35% особей содержат антитела анти В, но в слабом титре, и, следовательно, кошка А не рискует иметь осложнений, когда она получает кровь от донора с группой В при проведении ей гемотрансфузии впервые. 
Группа В не так распространена, в нее входит 10% популяции кошек (встречается чаще у абиссинских, бурманских, персидских, сомалийских кошек, скоттиш-фолдов, экзотов, британцев, корниш-рексов и девон-рексов). При этом 93% особей, входящих в группу В, содержат антитела анти А в высоком титре, которые обладают гемолитическими и агглютинирующими свойствами. Следовательно, кошки, относящиеся к группе В, рискуют получить осложнения при проведении им гемотрансфузии, если они получают кровь от доноров с группой А в первый раз или в случае аллоиммунизации матери плодом. Группа АВ встречается особенно редко. Она описана исключительно в Австралии с инцидентностью равной 0,4%.

Реакция агглютинации с помощью неполных анти-D-антител (IgG) в присутствии высокомолекулярных добавок 
 
Реакция проводится либо со специально приготовленным реагентом, уже содержащим усилитель (универсальный реагент с полиглюкином или альбумином для плоскости), либо усилитель добавляют в процессе проведения реакции (реакция конглютинации с желатином в пробирке). 
 
Техника постановки реакции агглютинации на плоскости не отличается от описанной в гл.6.2.2.1. Однако универсальные реагенты могут давать ложноположительную реакцию с резус-отрицательными эритроцитами за счет содержащихся в них высокомолекулярных веществ, а также могут вызывать агглютинацию эритроцитов, покрытых антителами другой (не антирезус) специфичности. Поэтому необходимо проведение параллельных тестов с контрольным раствором используемого усилителя, но без анти-0-антител. Если контрольный раствор вызывает агглютинацию эритроцитов, то результаты тестирования не достоверны и следует повторить определение с другим реагентом, содержащим полные антитела IgM (лучше с моноклональными). 
 
Реакции конглютинации с применением желатина. Для проведения этого теста могут быть использованы моноклональные реагенты и стандартные изоиммунные антирезус сыворотки с неполными антителами.

1.  
   Вносят в пробирку 1 каплю (около 0,05 мл) исследуемой крови или взвеси эритроцитов (примерно 50%) в сыворотке.
2.  
   Добавляют 2 капли (0,1 мл) 10% раствора желатина, предварительно подогретого до разжижения при +46...+48°С.
3.  
   Добавляют 2 капли (0,1 мл) реагента анти-D и смешивают.
4.  
   Помещают пробирку в водяную баню с температурой +46...+48°С на 5–10 мин или в суховоздушный термостат при той же температуре на 30 мин.
5.  
   Доливают в пробирку 5–8 мл физиологического раствора и осторожно 1–2 раза переворачивают закрытую пробкой пробирку для перемешивания.
6.  
   Определяют наличие агглютинатов, просматривая пробирку на свет невооруженным глазом или через лупу.
7.  
   Немедленно записывают результаты определения.

 
Желатиновая проба требует обязательного  проведения следующих контролей: 
 
со стандартными резус-положительными эритроцитами;  
 
со стандартными резус-отрицательными эритроцитами;  
 
с исследуемыми эритроцитами и раствором желатина, но без анти-0-антител. 
 
При положительном результате агглютинаты различимы в виде агрегатов разной величины на прозрачном фоне – кровь является резус-положительной. При отрицательном результате в пробирке агрегатов нет, а видна равномерно окрашенная непрозрачная взвесь эритроцитов – кровь является резус-отрицательной. Если наблюдается мелкозернистая, вызывающая сомнение агглютинация, то кровь необходимо тестировать в непрямом антиглобулиновом тесте (см. гл.6.2.2.3). Результаты желатиновой пробы являются достоверными только в случае, когда желатин сам не вызывает агглютинацию исследуемых эритроцитов, а результаты контролей со стандартными эритроцитами соответствуют ожидаемым. В случае неадекватных результатов контролей определение резус-принадлежности следует повторить с использованием другого реагента или образца желатина. Если желатин вызывает сам по себе агглютинацию исследуемых эритроцитов, то можно предполагать наличие на них антиэритроцитарных антител антирезус или иной специфичности (это наблюдается при гемолитической болезни новорожденных, аутоиммунной гемолитической анемии и некоторых инфекционных заболеваниях). В этом случае кровь должна быть направлена на исследование в специальную серологическую лабораторию

                          Список используемой литературы

1. Ипполитова Т.В. Этология животных. – М.: МГАВМиБ им. К.С. Скрябина,2000.-32с
2. Физиология сельскохозяйственных животных / Под ред. Н.А. Шманенкова. – Л.: Наука, 2008. -744 с.