Лейкоз крупного рогатого скота

      Для определения вируса в различных материалах используют методы, позволяющие выявлять инфекционный вирус или вирусные АГ. Являясь типичным ретровирусом, ВЛКРС находится у инфицированных животных в форме провирусной ДНК, которую можно выявить в лимфоцитах крови с помощью ПЦР или методами гибридизации нуклеиновых кислот.  При культивировании инфицированных клеток вирус можно выявить с помощью электронного микроскопа или по образованию синцития в соответствующих индикаторных культурах.     

Электронно-микроскопический метод. Позволяет выявлять вирусные частицы в краткосрочных культурах лейкоцитов крови животных, инфицированных ВЛКРС, и в монослойных культурах клеток, сокультивированных с инфицированными лимфоцитами. По некоторым данным, лейкоцитарные культуры (лейкоциты крови больных коров) через 48-72 ч представлены разнообразными клетками, среди которых находили лимфоциты и лимфобласты, продуцирующие вирусные частицы типа С. Зрелые вирионы имели ультраструктуру, типичную для онковируса типа С. Вирусные частицы находили, в основном, в межклеточных пространствах и на внешней мембране лимфоидных клеток. Методом ЭМ у больных лейкозом животных обнаруживают в лимфоцитах ядерные "карманы" в виде неправильного кольца и петли. 
     Тест  синцитиеобразования. ТСО применяется для выявления инфекционного вируса в различных материалах и основан на способности ВЛКРС образовывать синцитии в некоторых нетрансформированных монослойных культурах клеток и в трансформированных перевиваемых культурах клеток. Метод является воспроизводимым, специфическим и чувствительным.

 

 

 
Серологические  методы диагностики лейкоза крупного рогатого скота

В действующих в настоящее время "Правилах по профилактике и борьбе с лейкозом КРС" приоритет отдается именно серологическим исследованиям сыворотки крови. По их результатам судят об инфицированности животных вирусом лейкоза. В зависимости от этого определяют мероприятия по оздоровлению.

Реакция иммунодиффузии (РИД,  )

 

Сущность метода. Метод основан на обнаружении в сыворотке крови животных специфических преципитирующих антител к антигенам вируса лейкоза крупного рогатого скота. Специфические антитела появляются в крови через 2 - 8 недель после заражения животного ВЛКРС и сохраняются в организме пожизненно.

 

Разработанная и широко применяемая в ветеринарных лабораториях страны реакция иммунодиффузии в геле агара (РИД) с использованием антигена ВЛ в настоящее время остается основным диагностическим методом, по результатом которого проводят оздоровительные и профилактические мероприятия в неблагополучных по лейкозу хозяйствах. Это относительно чувствительный тест для выявления гликопротеина ВЛКРС. Позволяет выявлять гликопротеин вируса в концентрации 0,4 мкг/мл.

 
Животных, давших положительные результаты в  РИД, считают инфицированными, животных с гематологическими изменениями  в картине крови или с клиническими признаками – больными лейкозом. 

Метод иммуноферментного  анализа (ИФА, ELISA).

Сущность метода. Иммуноферментный анализ основан на иммунохимической реакции взаимодействия антиген-антитело и использовании в качестве индикатора этой реакции маркированных ферментами антител или антигенов.

 
Метод не прямого иммуноферментного  анализа (ИфА), основанный на применении антивидового конъюгата с использованием ферментов-маркеров, обладает значительно  большей чувствительностью, по сравнению  с РИД, позволяет автоматизировать процесс, то есть уйти от субъективной оценки результатов реакции. Кроме того, с помощью ИФА можно обнаружить антитела к ВЛКРС в молоке и моче.

Метод широко используют в США и  Бельгии.

Реакция агглютинации с латексом.     

РАЛ. В качестве теста для прижизненной диагностики лейкоза КРС можно использовать иммунохимическую реакцию агглютинации с латексом в соответствии с временными методическими рекомендациями Животные, сыворотки крови которых дали положительную реакцию агглютинации с латексом, подлежат тщательному обследованию на лейкоз другими методами. Данная реакция перспективна для прижизненной диагностики лейкозов Испытание этой реакции показало в 67% случаев совпадение результатов с гематологическими и около 90% с гистологическими методами диагностики гемобластозов КРС.

 

 

Выявление вируса лейкоза крупного рогатого скота  с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) 

      Вирус лейкоза крупного рогатого скота присутствует в организме в виде ДНК-копий (провируса), встраиваясь в геном клетки-хозяина. Это делает возможным выявление ВЛКРС с помощью современных молекулярно-биологических методов, в частности методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для обнаружения провируса с помощью ПЦР используется геномная ДНК, выделенная из крови животных. В результате ПЦР определенный вирусоспецифический фрагмент выделенной ДНК амплифицируется (умножается) до количества, достаточного для его визуального определения.

     Как диагностический  метод ПЦР характеризуется высокой  специфичностью, которая обусловлена  выбором праймеров, и чувствительностью.  С помощью ПЦР удается обнаруживать  даже деградированную нуклеиновую  кислоту, присутствующую в следовых  количествах. Для проведения ПЦР-анализа  достаточно 50 мкл крови, и результат  может быть получен в течение  рабочего дня. Метод ПЦР может  использоваться для диагностики  лейкоза крупного рогатого скота  наряду с серологическими методами, а также в качестве подтверждающего  теста.

 

Число лейкоцитов в 1 мм³ крови здорового, подозрительного по заболеванию и больного лейкозом КРС

 

Возраст животных	Здоровые животные		Подозрительные по заболеванию	Больные животные
	Кол-во лейкоцитов в 1 мкл	Процент лимфоцитов	Абсолютное число лимфоцитов в 1  мкл	Абсолютное число лимфоцитов в 1  мкл
1 - 2 года	До 12000	До 75	9000- 11000	Свыше 11000
2-4	До 11000	До 70	8000-10000	Свыше 10000
4-6	До 10000	До 65	6500- 9000	Свыше 9000
Старше 6	До 9000	До 60	5500- 8000	Свыше 8000

 

 

Аллергическая реакция. Разработан аллерген для диагностики лейкоза у животных. Для проведения аллергических реакций наиболее подходящее место хвостовая складка у овец и КРС и дорсальная поверхность уха у свиней. 

2. 4.Особенности иммунитета и специфическая профилактика 
 
Длительность иммунитета у переболевших животных: 
 
Естественный иммунитет при гемобластозах крупного рогатого скота имеет ряд специфических особенностей, отличающих его от естественного иммунитета при других инфекционных болезнях. Главное отличие заключается в том, что антитела не способны элиминировать ВЛКРС, который обычно присутствует в инфицированных лимфоцитах в непродуктивном состоянии и защищен от действия антител. 
 
Биопрепраты для специфической профилактики: 
 
Проблема специфической профилактики лейкоза КРС не решена, хотя исследования в этой области продолжаются и по сегодняшний день. Против лейкоза КРС получена рекомбинантная вирусвакцина, содержащая генетическую информацию, кодирующую gp51 и gp30 поверхностного АГ. Также показана возможность вакцинации КРС против лейкоза гетерологичными клетками млекопитающих, способными продуцировать оболочечные АГ ВЛКРС и его внутренний белок р24. Опубликованы результаты исследований по получению и использованию рекомбинантных вирусов осповакцины, включающих либо полный ген белка оболочки (env), либо только фрагмент гена env с последовательностью, кодирующей гликопротеин gp51 env и часть gp30 ВЛКРС. Вакцинация овец рекомбинантными BLV-вакцинами, содержащими полный ген env, защищает овец от инфекции ВЛКРС, свидетельством чего служит отсутствие персистенции высоких титров анти-gp51-AT по сравнению с невакцинированными ВЛ инфицированными животными, ярко выраженная пролиферативная реакция клеток СД-4 вакцинированных овец на специфические синтетические пептиды gp51 ВЛКРС и отсутствие провируса ВЛКРС у вакцинированных животных спустя 4 мес. после заражения диким вирусом. 

В настоящее время продолжается совершенствование традиционных технологий изготовления вакцин и успешно разрабатываются  вакцины с учетом достижений молекулярной биологии и генной инженерии.

Стимулом к разработке и созданию вакцин третьего поколения  послужили причины, обусловленные  ограниченностью использования  традиционных вакцин для профилактики ряда инфекционных заболеваний. Прежде всего это связано с возбудителями, которые плохо культивируются в  системах in vitro и in vivo (вирусы гепатита, ВИЧ, лейкоза возбудители малярии) или обладают выраженной антигенной изменчивостью (грипп).

Основой ДНК вакцины является бактериальная  плазмида, способная размножаться в  клетках E.coli. В эту плазмиду встраивается «смысловой» ген, кодирующий иммуногенный белок того вируса от которого будут защищать ДНК вакцины. Таким образом накапливают, очищают эти плазмиды и используют их в качестве вакцин. 
 
Общие мероприятия по профилактике лейкоза крупного рогатого скота включают в себя соблюдение ветеринарно-санитарных требований при содержании, кормлении и ветеринарном обслуживании животных. Продажу, сдачу на убой, выгон, размещение на пастбищах и все другие перемещения и перегруппировки животных, реализацию животноводческой продукции проводят только с ведома и разрешения ветеринарных специалистов. Осуществляют карантинирование в течение 30 дней вновь поступивших животных для проведения клинического осмотра, серологического и гематологического исследований. 
 
Контроль за благополучием поголовья скота осуществляют на основании показателей послеубойной экспертизы на мясокомбинатах; данных экспертизы при внутрихозяйственном убое животных, вскрытиях трупов животных; результатов плановых серологических и гематологических исследований на лейкоз; результатов контрольного убоя животных с повышенным уровнем лимфоцитов в крови и патоморфологических исследований биоматериалов 
 
Лечение. Не разработано.

 

 

 

3. Заключение

Лейкоз – тяжелое хроническое  заболевание неопластического типа, в основе которого лежит системное  поражение лейкопоэтической ткани. Болезнь сопровождается усиленной  выработкой форменных элементов  крови, лишенных способности к морфологической дифференцировке и физиологическому созреванию. 
 
Избыточный рост (гиперплазия) патологической кроветворной ткани первоначально возникает в пределах органов и тканей, где кроветворение осуществляется у здорового крупного рогатого скота (костный мозг, селезенка, лимфатические узлы). В дальнейшем, по мере прогрессирования болезни, патологические очаги проявляются в тех местах, где имеются кроветворные клетки, находящиеся в ассоциации с различными компонентами соединительной ткани. 
 
При изучении лейкоза крупного рогатого скота научными исследованиями определены интенсивное развитие и эффективность вирусологического, генетического и эпизоотологического направлений. Получены интересные данные по этиологии, патогенезу, диагностике, эпизоотологии и профилактике болезни. Открытие вируса лейкоза крупного рогатого скота, разработка иммунологических методов контроля животных – носителей этого вируса позволили по-новому рассмотреть принципы профилактики и борьбы с заболеванием.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список использованной литературы

 

1.Справочник ветеринарного врача/ П.П. Достоевский, Н.А. Судаков, В.А. Атамась и др. – К.: Урожай, 1990. – 784 стр. 
 
2. Справочник ветеринарного врача/ А.Ф Кузнецов. – Москва: «Лань», 2002. – 896 стр.

 
3.  Гавриш В.Г. Справочник ветеринарного врача, 4 изд. Ростов-на-Дону: «Феникс», 2003. – 576 стр.

 
4. Васильев В.А., Луговцев В.Ю. Лекционный курс по частной вирусологии: «Вирусы, вызывающие болезни жвачных и однокопытных» для студентов ФВМ, , Ульяновск 2004 г. – 87 стр. 
 
 
5. Инфекционные болезни животных / Б.Ф. Бессарабов, А.А., Е.С. Воронин и др.; Под ред. А.А. Сидорчука. – М.: КолосС, 2007. – 671 стр.

 

6. Белоусова Р.В., Преображенская  Э.А., Третьякова И.В. –Ветеринарная  вирусология – М.: КолосС, 2007г.  – 424 стр.