Методы заражения лабороторных животных

      Клеймение кроликов и морских свинок производят при помощи готовых металлических бирок с номерами или наложением тавра татуировочными щипцами.

        Металлические номерки имеют заостренные концы, которыми и прокалывают ушную раковину животных с внутренней стороны; на выпуклой стороне уха концы номерков загибаются. Номерки можно приготовить своими силами из нарезанных кусочков мягкой жести.

     Номер надписывают жидкостью, состоящей из смеси 5 частей насыщенного раствора медного купороса и 1 части крепкой соляной кислоты. Пишут на металле заостренной палочкой и тотчас же надпись высушивают фильтровальной бумагой.

          Мышей и крыс метят надрезом ушей или же окрашиванием различных частей тела животного насыщенным раствором пикриновой кислоты или 0,5% спиртовыми растворами анилиновых красок. Этих лабораторных животных можно нумеровать непосредственно во время опыта, пользуясь для этой цели красками, дающими стойкое окрашивание, например насыщенным спиртовым раствором фуксина, насыщенным водным или спиртовым раствором пикриновой кислоты или насыщенным водным раствором перманганата калия. У подопытных животных окрашивают разные части тела. Одной краской, как правило, метят первые 9 номеров. Сочетание двух различных красок позволяет пометить до 100 животных.

        Ниже в качестве примера приводится одна из схем нумерации. Метки пикриновой кислоты соответствуют единицам, метки фуксином обозначают десятки. Окрашенные таким образом животные в зависимости от места расположения пятна и его окраски будут иметь следующие условные номера:

левая передняя лапа—No1, левый  бок—No2, левая задняя лапа—No3, голова—No4, спина—No5, область крестца—No6, правая передняя лапа—No7, правый бок—No8, правая задняя лапа—No9. Нанесение фуксина на те же места (вместо пикриновой кислоты) будет означать соответственно: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90.

     При комбинации двух красок может быть получен любой двузначный номер, например: лапа левая передняя (фуксин) + лапа левая передняя (пикриновая кислота)—No11, лапа правая задняя (фуксин) + лапа левая задняя (пикриновая кислота)—No93.

  У птиц металлические номера (браслеты) надевают на одну из ножек.

     Взвешивание животных производят, смотря по их величине, или в ящике на обычных столовых весах (Беранже), или на весах для взвешивания новорожденных детей (по Метелкину). Мелких животных, например, мышей, взвешивают на ручных (аптекарских) весах с роговыми чашками.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Определение пола

Общие признаки: самцы крупнее  самок по величине и грубее по конституции; передняя часть туловища самцов развита  сильнее задней.

     Для определения пола у кроликов захватывают их левой рукой за кожу в области шеи вместе с ушами, а другой рукой, оттянув хвост, натягивают свободными пальцами кожу у полового отверстия: у самок обнаруживается щель, сужающаяся к спине, а у самцов открывается круглое отверстие с выступающим из него половым членом. Таким же образом определяют пол у морских свинок. У самцов мышей и крыс расстояние между заднепроходным отверстием и половым значительно длиннее, чем у самок; кроме того, у последних хорошо заметны грудные соски.

    Определение возраста у лабораторных животных при отсутствии соответствующих записей довольно трудно. У старых животных редкий, без глянца шерстный покров, длинные когти, тусклый взгляд и темный налет на зубах. Приблизительное определение возраста у нормально упитанных, здоровых животных возможно по их живому весу.

     Измерение температуры тела у лабораторных животных производится обычным максимальным термометром перед постановкой опыта, а иногда и во время нахождения животного под опытом. Колебания нормальной температуры тела у животных зависят от многих причин: глубины введения термометра в прямую кишку, времени года, суток, пищевого режима и т. д. Нормальной глубиной для введения термометра принято считать 3,5 см. (удобно надевать на определенной высоте термометра резиновое колечко). Установлено, что на глубине 3 см температура тела у морских свинок равна 37,6°, на глубине 4 см 38,3°, а при 7,5 см 39,4°. Для установления нормы рекомендуют предварительное измерение температуры у животных до постановки опыта. Измерение температуры тела у животного следует производить постоянно в одни и те же часы, одним термометром, вводя его на одну и ту же глубину.

   Термометр перед введением в прямую кишку дезинфицируется спиртом, вытирается досуха, а затем смазывается (вводимый его конец) вазелином.

    Морских свинок для измерения температуры помещают в горизонтальное положение на ладонь согнутой в локтевом сгибе левой руки, нажимая большим пальцем на паховую область. Пальцем другой руки производят поглаживание (несколько раз) по шерсти от шеи до симфиза. Спустя несколько секунд морская свинка остается лежать совершенно неподвижно. Термометр вводят в прямую кишку сначала почти вертикально, а затем параллельно линией оси тела животного. Замечают время и следят за столбиком ртути.

   Кроликов помещают на колени, охватывают левой рукой с упором головы животного в локтевой сгиб и той же рукой захватывают и поднимают хвост; правой рукой вводят термометр. Или же кролика завертывают в кусок какого-либо плотного материала («пеленают»), подтягивая конечности под живот.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Подготовка материала и инструментов для заражения

       Материалом для заражения лабораторных животных в повседневной практике диагностических лабораторий обычно служат эмульсии, приготовленные из различных органов и тканей присланного для исследования материала. Кроме того, материалом для заражения могут быть различные истечения, мокрота, кровь, отделения ран, язв и т. п., полученные от больных. Эмульсии из органов (тканей) обычно готовятся на физиологическом растворе, примерно в соотношении 1:10. Для этой цели берутся небольшие кусочки из наиболее пораженных участков и растираются с физиологическим раствором в стерильной ступке до получения равномерной взвеси. Последняя вводится непосредственно животным или же предварительно фильтруется в простерилизованную посуду через марлю (вату). При наличии трудно растираемого материала добавляют прокаленный песок, и после получения эмульсии фильтруют ее через марлю.

      Бактериальную культуру готовят для заражения согласно схеме опыта или инструкции по выделению определенного микроорганизма, что указано в схеме по диагностике диагностики инфекционной болезни. Кроме материала для заражения, следует подготовить белую вату, спирт, заготовить этикетки на клетки подопытных животных, а также заранее простерилизованные маленькие пакетики с ватой и т.д. На этикетках для клеток (банок) указывается фамилия ответственного за данный опыт сотрудника, дата, количество и вид животных, чем привиты, метод прививки и вводимая доза.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Подготовка шприцов к  заражению

      Для обеспечения безопасности при заражении животных разработаны специальные методические приёмы, включающие в себя:

• Подготовку шприцов для заражения,
• Наполнение шприцов заразным материалом,
• Заражение животных,
• Разборка шприцов после заражения,
• Обеззараживание.

Шприцы должны отвечать следующим  требованиям: поршень должен плотно входить в цилиндр, не выпадать из него, свободно двигаться в нём, не пропускать набранную для контроля воду за поршень, цилиндр не должен иметь трещин.

          При сборке шприца после проверки иглы на проходимость, определяют притёртость иглы к канюле цилиндра – шприц насухо вытирают стерильным ватным тампоном, наполняют через иглу водой из стерилизатора, воду под большим давлением выпускают и проверяют место насадки иглы – отсутствие капель в этом месте свидетельствует о правильной сборке шприца, плотной притёртости иглы к канюле и пригодности его к работе с инфекционным материалом. Наполнение шприца инфекционным материалом проводят над ёмкостью с дезраствором. При наполнении шприца следует избегать попадания в него пузырьков воздуха. Пузырьки воздуха из шприца с инфекционным материалом удалять категорически запрещается. Вводить животным материал с пузырьками воздуха не рекомендуется, т.к. это может повлечь за собой образование капель при извлечение иглы после заражения. В этом случае инфекционный материал следует выпустить в тампон, погружённый в дезраствор, шприц разобрать и поместить в ёмкость для кипячения. Для дальнейшего заражения использовать запасной шприц. Шприц с инфекционным материалом следует держать над ёмкостью с дезраствором горизонтально между указательным и средним пальцем снизу и большим пальцем сверху, не касаясь поршня.

 

 

       

          Разборка шприцов после заражения проводится над ёмкостью, предназначенной для кипячения последних. Для предотвращения разбрызгивания при разборке шприц должен быть опущен в ёмкость иглой вниз. Осторожно пинцетом последовательно снимается и опускается игла, поршень и цилиндр. Пинцет после разборки опускают в стакан со спиртом. При наличии в шприце остатков инфекционного материала его перед разборкой шприца выпускают в тампон, погружённый в дезраствор.

      Инструменты тотчас после окончания инъекции разбираются (шприцы) и вновь кипятятся 10 минут и больше (в зависимости от прививочного материала). Инструменты после кипячения вытирают досуха и хранят в коробках в шкафу. Иглы после кипячения необходимо тщательно продуть, затем вставить мандрен, т. е. нержавеющую латунную проволочку. Стальные иглы в целях предохранения их от ржавчины, можно хранить также в насыщенном на холоду и профильтрованном растворе буры или же в жидкости следующего состава: карболовая кислота (жидкая) 0,3 мл + сода двууглекислая 1,5 г + формалин  2 мл + дистиллированная вода 100 мл.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Фиксация лабораторных животных

   Фиксация животных при заражении лабораторных животных применяют различные, в зависимости от вида животных и метода введения материала, способы фиксации. Для этой цели предложено довольно большое количество всякого рода станков, досок-фиксаторов и т.п., но в обычной диагностической работе вполне можно обойтись без подобных приспособлений.

    Исключение составляет только заражение кроликов в мозг или под твердую мозговую оболочку, когда необходим фиксирующий столик.

      В обычных условиях фиксация животных производится следующим образом. Кроликов помещают на стол в левом боковом положении, головой вправо от оператора. В этот момент фиксируют кролика правой рукой за кожную складку на спине; левую же руку ладонью вверх подводят под жи­вот кролика, ближе к задним конечностям. Затем захватывают между ука­зательными средним пальцами левое бедро (возможно выше), а большой па­лец охватывает тело животного со стороны правого паха. Приподняв заднюю часть животного и, освобождая правую руку, подводят ее (ладонью вверх) под грудную клетку позади передних конечностей. Затем захватывают указательным и средним пальцами выше локтя левую ногу, а большим пальцем охватывают грудь в области правой подмышки так, чтобы правая нога была вынесена вперед. После этого кролика снимают со стола и вытягивают во всю длину.

    Для внутривенных инъекций удобнее всего завертывать («пеленать») кролика в кусок плотного материала, предварительно подогнув ему ноги под живот; голову кролика оставляют свободной. Животное при этих способах фиксации держит помощник.

    Для этой цели существуют также специальные закрытые ящики (боксы) с отверстием только для головы.

    Туловище кролика плотно зажимают между коленями или прижимают локтем левой руки, оставляя свободной для проведения необ­ходимых манипуляций голову животного, повернутую вправо.

  Фиксация головы кролика. Для этого удобно пользоваться боксом (рис.8), имеющим вид ящика с верхней выдвижной крышкой. Передняя стенка ящика состоит из двух частей: укрепленной неподвижно нижней, и выдвигающейся верхней. Посередине передней стенки имеется круглое отверстие диаметром 5 см, состоящее из двух половин: одна половина вырезана на нижней, другая—на верхней выдвигающейся части передней стенки. Через это отверстие выводят наружу и фиксируют голову кролика. В задней части ящика с внутренней стороны на обеих боковых стенках набито по нескольку вертикальных планок, между которыми находятся пазы. Вставляя вертикально фанерную дощечку в тот или иной паз, можно увеличивать или уменьшать длину бокса.

     Длина бокса 40 см, ширина 15 см, высота 15,5 см (высо­та нижней передней стенки 9 см, верхней—6,5 см). Фиксация кролика в боксе описанной конструкции осуществляется следующим образом. Выдвигают верхнюю крышку бокса и вынимают верхнюю половину передней стенки. В ящик сажают кролика так, чтобы шея его проходила через выемку нижней половины передней стенки, после чего голову живот­ного фиксируют, опуская на нее верхнюю половину передней стенки. В один из пазов вдвигают фанерную дощечку; ограничивая тем самым возможность движений кролика в ящике, а затем закрывают верхнюю крышку, которая фикси­рует подвижную часть передней стенки.

      Фиксация кролика и других лабораторных животных (морские свинки, крысы) в лежачем положении на спине или животе. Для фиксации кроликов и других животных (морские свинки, крысы) в лежачем положении на спине или животе пользуются специальными станками. Наиболее просто устроенный станок представляет собой обычную доску на низких ножках, по размерам соответствующую тому или другому виду животного. На ребрах боковых сторон доски имеется по 2 крючка или петли. У одного из узких краев находится приспособление для фиксации головы животного головодержатель. Он представляет собой надеваемое на голову животного кольцо, соединенное со штативом. При помощи винтов высоту кольца на стойке штатива можно регулировать.

    Животное кладут в удобном для опыта положении, спи­ной или животом кверху. Все 4 лапы продевают в петли, сделанные из бинта, которые затем плотно затягивают. Свободные концы тесемок из бинта (в первую очередь от передних лап и во вторую—от задних) привязывают к крючкам или петлям доски. Фиксацию животного к станку производят с помощником.