Вирус иммунодефицита кошек

2. Виды патологического материала, направляемого от больных и  павших животных

 

Патологический материал для лабораторных исследований отбирают:

• от больных животных: кровь, слюна;
• от павших животных: кусочки органов, в которых обнаруживается вирус – костный мозг, тимус, лимфатические узлы.

3. По мере развития инфекции расширяется круг клеток, где обнаруживается вирус: в кровеносных сосудах, воспалительных очагах, в слюнных железах. 
   Этапы лабораторной диагностики

Индикация вируса  в патологическом материале проводят путем обнаружения инфекционной активности вируса методом биопробы на культуре клеток. Лимфоциты периферической крови инфицированных кошек с лимфоцитами здоровых или с клетками определенных перевиваемых линий в присутствии антител (АТ) культивируют на клеточных культурах течение 2-3 недель. Цитопатическое действие (ЦПД) проявляется в виде пузырьковой дегенерации, повышенной гибели клеток и образования гигантских клеток. Инфицированные культуры обнаруживают повышенный уровень активности обратной транскриптазы.

Наиболее широкодоступная тест-система представлена набором для постановки быстрой реакции точечного иммуноферментного анализа (ИФА) Cite FTLV (производитель - фирма IDEXX). Эта тест-система улавливает и концентрирует АТ к ВИДК из крови или плазмы на мембране, где в виде пятна иммобилизованы антигены (АГ) ВИДК. Связавшиеся АТ выявляются с помощью цветной ферментной реакции. Если у животного выявляется слабо положительная реакция, следует повторно провести тестирование через 4-6 нед.

По типу тест-системы Cite приготовлены также и наборы для комбинированного выявления АТ к ВИДК и ВПК. В США используется также тест-система для выявления АТ к BJTK на основе непрямой ИФ (HansenVeterinaryImmunology, Dixon,California).

Разработан иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения АТ к вирусу ИДК с использованием рекомбинантных поверхностного (SU), трансмембранного (ТМ) и капсидного (СА) АГ.

Сыворотки экспериментально инфицированных кошек тестируют тремя АГ для оценки сероконверсии и определяют уровень АТ. АТ к ТМ АГ обнаруживают в ранние сроки и на протяжении всего периода наблюдения их регистрируют на высоком уровне.

Иммунный ответ на AT SU и СА был менее выражен; у некоторых кошек уровни АТ к SU и СА снижались через 6 мес. после заражения. Специфичность метода с использованием АГ ТМ составляла 97%, а чувствительность - 98%. Таким образом, рекомбинантный ТМ можно рассматривать как очень высокий при выявлении ВИДК в ИФА.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) является прямым методом, определяющий генетический материал вируса.

Достоинства:

• Является одним из подтверждающих методов;

• Необходим для тестирования котят в возрасте до 6 месяцев, так как в этих случаях тесты, направленные на выявление антител против ВИК, будут недостоверны;

• Возможность определения вирусной загрузки при проведении количественной ПЦР. Так, ПЦР-лаборатории Auburn University и Idexx заявляют о возможности определять даже очень маленькое количество вируса (10/мл) в крови;

Недостатки:

• возможны ложноотрицательные результаты из-за генетической изменчивости вируса и низкой вирусной загрузки. Одной из важных особенностей вируса иммунодефицита и других лентивирусов является их генетическая изменчивость. Охарактеризовано 6 подтипов ВИКа (A, B, C, D, E, F) и возможно седьмой (U) описан в Новой Зеландии. Чувствительность и специфичность ПЦР варьирует в разных лабораториях и зависят от дизайна праймеров и зондов. В идеале праймеры должны амплифицировать все подтипы (поиск наиболее консервативных участков последовательностей).

Выделение вируса является высоконадежным методом. В лабораторных условиях, вирус может быть выделен из культуры клеток и тестирован на антиген. Была проведена работа, в результате которой у 10% кошек, считавшихся ранее сероотрицательными на основании ИФА, были выделены вирусы. Таким образом, выделение вирусов считается одним из наиболее точных методов распознавания ВИК-инфекции. К сожалению, технология метода не приспособлена для лабораторной диагностики, и большинство клинических исследований, в настоящее время, полагается на метод тестирования ИФА.

 

Вестерн-блоттинг.

Вестерн-блоттинг имеет специфичность, близкую к 100%, и считается золотым стандартом», используется для подтверждения положительных результатов, полученных методами ИФА и ИХА. Выявление 2 или 3 вирусных белков обычно рассматривается как положительный результат. К наиболее часто анализируемым  белкам относят р15, р24, р13 и р55.

Достоинства:

• высокая специфичность;

• подтверждающий тест;

Недостатки:

• необходимо отправлять в специализированную лабораторию с квалифицированным персоналом;

• высокая стоимость;

 

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Также имеет высокую степень надежности, за исключением случайного присутствия неспецифической флуоресценции которая может скрыть как положительный, так и отрицательный результат. РИФ  является доступным, в целом надежным тестом, с чувствительностью, близкой к ИФА и специфичностью близкой к вестерн-блоттингу. Так как РИФ определяет антитела, то имеет, такие же ограничения в применении, как и иммуноферментный анализ.

При тестировании неинфицированных кошек должен быть получен отрицательный результат при проведении всех тестов.

При тестировании кошек в возрасте старше 6 месяцев и кошек, не вакцинированных против ВИК, получение положительного результата указывает на наличие ВИК-инфекции; однако, положительные результаты экспресс-тестов всегда следует подтверждать ПЦР, вестерн-блоттингом или ИФА, особенно у клинически здоровых кошек без внешних признаков инфекции.

Если ВИК-инфекция выявлена у беременной кошки, инфицироваться может только часть ее потомства. Котят следует исследовать по методу ИФА в возрасте старше 6 месяцев, либо в любом возрасте методом ПЦР.

Вакцинация кошек против вируса иммунодефицита кошек (FIV) с использованием инактивированных штаммов  приводит к быстрому и стойкому образованию антител.

Такие вакцины имеются в США, но не лицензированы в Европе и России, и поэтому не могут быть использованы. Диагностические тесты, доступные в настоящее время, не различают вакцинированных кошек от инфицированных, что создает определенные трудности в регионах, где проводится вакцинация.

В такой ситуации рекомендуется определение  количества CD4 + и CD8 + лимфоцитов. Однако из-за сложности этих исследований и тот факт, что значение этих показателей не был известен до заражения, означает, что этот метод не является в настоящее время клинически значимым.

 

 

 

4. Специфическая профилактика

 

Вакцинация ВИК-инфицированных животных является спорным вопросом. Экспериментальные исследования показали, что у кошек с бессимптомной инфекцией в ответ на вакцинацию  развивается сильный иммунный ответ, что говорит об эффективности применения вакцины. Тем не менее, не известно, на сколько эффективна вакцинация кошек на более поздних стадиях развития иммунодефицита.

Есть мнение, что вакцинация ВИК-инфицированных кошек может быть не безопасным. Во-первых, стимулирование иммунной системы, связанное с введением вакцины, может привести к прогрессированию иммунодефицита в результате изменения неустойчивого баланса между иммунной системой и вирусом. Так, стимуляция инфицированных лимфоцитов in vitro приводит к репродукции вируса. In vivo, вакцинация хронически инфицированных кошек синтетическим вирусным пептидом приводила к с уменьшению соотношения CD4/CD8. Потенциальные плюсы и минусы вакцинации кошек с иммунодефицитом должны рассматриваться индивидуально. У взрослых кошек,  которых вакцинировали ранее, даже несколько лет назад, риск заражения инфекцией низок, так что новой вакцинации  лучше избежать. У кошек, имеющих постоянный доступ на улицу риск заражения очень высок, поэтому вакцинация им настоятельно рекомендуется.

Хотя нет никаких научных доказательств того, что ВИК-инфицированные кошки находятся в группе повышенного риска при использовании живых вакцин, следует иметь ввиду, что  рекомендуются к использованию  инактивированные вакцины. Применение живых вакцин кошкам с иммунодефицитом может спровоцировать клиническое заболевание, поскольку  вакцинный антиген может сохранять некоторый патогенный потенциал.

В настоящее время в России нет коммерчески доступной вакцины против ВИК. В экспериментальных условиях удавалось иммунизировать  кошек путем использования инактивированной вакцины или  сочетания  инактивированного вируса и ДНК-вакцины. В США коммерческая вакцина доступна с 2002 года, а в Австралии и Новой Зеландии с 2004 года.

 

5. Заключение

 

6. Иммунодефицит кошек — тяжелое заболевание, вызываемое вирусом иммунодефицита кошек, поражающего иммунную и нервную систему. Болезнь характеризуется медленным, постепенным развитием, полиморфностью клинических проявлений, высокой летальностью. Вирус иммунодефицита кошек— довольно распространенное инфекционное заболевание, которое присутствует на всех континентах. Клинические симптомы проявления FIV у кошек сходны с подобными симптомами при СПИДе, однако FIV не способен нанести вред человеку и не может инфицировать приматов других видов. 
   Список использованной литературы

 

1. Вирусология. Под редакцией Б. Филдса, Д.Найпа – М.: Мир, 1989.-492с.
2. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных. – Москва, ВНИТИБП, 928с.
3. С.В. Старченков Заразные болезни собак и кошек. – Санкт-Петербург, 2001
4. Р.М. Гаскелл, М. Беннет Справочник по инфекционным болезням собак и кошек
5. А.А. Кудряшов Патогенез и патологическая анатомия инфекционных болезней собак и кошек. – Санкт-Петербург, 1997