Возбудители маститов КРС

Синегнойная палочка. Маститы, вызываемые синегнойной палочкой, регистрируются у 5,3 % больных коров. Микроорганизмы широко распространены в окружающей среде (пол, подстилка, вода и др.). Встречается при заболевании коров эндометритом, на кожном покрове животных. Заражение животных происходит через сосковый канал, контаминированную микроорганизмами доильную аппаратуру, лечебные препараты, воду. Микроорганизмы весьма устойчивы к наиболее распространенным антибиотикам и лечебным препаратам. Кроме Pseudomanadaceae auroginosa, маститы могут вызывать Ps.fluorescens, Ps. putida и др.

Бациллы. Спорообразующие микроорганизмы широко распространены в почве, откуда они попадают на кожу животного и в молочную железу. Не исключается возможность заноса этих микроорганизмов в молочную железу при введении в нее различных лечебных препаратов. В качестве возбудителей мастита зарегистрированы Bac. cereus, Bac.subtilis, Bac.mesentericus.

Пастереллы. Как возбудители маститов пастереллы (P. multocida, P.haemolytica, P.septica) неоднократно описаны в зарубежной литературе. Заболевание встречается спорадически или эпизоотически в пределах стада. Пастереллы могут проникать в вымя от телят-молочников, инфицированных этими микроорганизмами.

Патогенные анаэробы. Зарегистрированы спорадические острые маститы, возбудителем которых является Clostridium perfringens. Патогенные анаэробы выделялись из абсцессов вымени Peptococcus indolieus и Bacteroides fragillis. Для выяснения роли облигатных анаэробов в этиологии мастита были бактериологически происследованы пробы молока из 10 стад. При этом установлено, что культуры анаэробов выделяли от 12 % больных коров во всех стадах.

Аэромонады. Микроорганизмы рода Aeromonas (семейство Vibrionaceae) широко распространены в стоячей воде и в сточных водах. Инфицирование вымени возможно с водопроводной водой, доильными стаканами. Основным возбудителем мастита является A.hydrophila.

Микоплазмы. Возбудителем мастита могут явиться микоплазмы  M.genitalium, M.bovis  и другие. Наиболее патогенные для крупного рогатого скота M.bovis. Возбудитель передается с молоком, спермой, секретами органов дыхания, выделениями из половых органов, через доильные аппараты. Микоплазменные маститы возникают внезапно и поражаются, как правило,  все четыре доли вымени. Микоплазмозный мастит может поражать до 30% животных.

Лептоспиры. О массовых вспышках лептоспирозных маститов у крупного рогатого скота за рубежом сообщали W. Ellis (1976) и L. Gordon (1977). Лептоспирозные маститы могут возникать в благополучных и неблагополучных на лептоспироз местностях. При серологических исследованиях в крови появляются специфические антитела в титрах 1:100, микрофлора выделяется из секрета вымени не во всех случаях.

Особое значение имеет заболевание вымени при таких инфекциях, как туберкулез, сибирская язва, актиномикоз, хламидиоз и другие. В случае вовлечения молочной железы в патологический процесс происходит выделение инфекции с молоком. При этом так называемый выброс микроорганизмов значительный – до 109 колониеобразующих единиц в 1 мл. Немедленная изоляция, выбраковка больных, ведение борьбы в целом с заболеванием в соответствии с существующими рекомендациями, способствует уменьшению возможности распространения возбудителей в воздушной среде, снижению обсеменения ими молока и заражению других животных.

Дрожжи и дрожжеподобные организмы. Процент заболеваемости вымени дрожжеподобными организмами в последнее время значительно увеличивается. Из молока больных маститом коров выделено 23 вида различных грибов. Наиболее встречались Pichia farinosa, Candida parapsilosis, Trichosporon cutaneum.

Вирусы. Маститы могут вызываться вирусом инфекционного ринотрахеита-пустулезного вульвовагенита, вирусом диареи.  Мастит, вызванный вирусом инфекционного ринотрахеита, протекает также как оспа и псевдооспа. При этом изменения носят деструктивно-пролифиративный характер. При продолжительном отеке сосков кожа становится коричнево-черной, общий вид пораженного соска напоминает вид гангрены. Иногда присоединяются вторичные инфекции, ведущие к образованию обширных нагноений.

Прототеки. Аэробные микроскопические бесхлорофильные водоросли-прототеки широко распространены в животных и растительных отходах, сточных и стоячих водах, на скотных дворах. Мастит у коров вызывается в основном Prototheecсa zopfii.

В сухостойный период возбудителями мастита являются те же микроорганизмы, что и в период лактации.

Неинфекционные факторы. Неинфекционные факторы (механические, физические, химические) наиболее часто обуславливают патологическое состояние молочной железы.

Механические факторы. К механическим факторам относятся самая большая группа причин вызывающая микротравмы вымени и сосков (раны, ушибы, травмы, трещины кожи) и микротравмы, возникновение которых обусловлено несовершенством доильной техники, ее неисправностью, нарушениями технологии машинного доения и высокий вакуум.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ИССЛЕДОВАНИЯ НА МАСТИТ

Лабораторная диагностика мастита основана на выявлении физико-химических, биологических изменений секрета, увеличения в нем количества соматических клеток (лейкоциты, эпителиальные клетки выводных протоков) и выделении возбудителя.

Косвенно соматические клетки определяют с помощью диагностических реактивов беломастина, мастидина, димастина, мастоприма, пробы Уайтсайда, содержащих поверхностно-активные вещества (ПАВ). ПАВ разрушают мембраны клеток, высвобождают из ядер ДНК и вступают с ней в реакцию, образуя желе. По степени образования желеобразного сгустка косвенно судят о количестве соматических клеток в молоке. Реакцию молока с диагностическим реактивом проводят на молочно-контрольных пластинках ПМК-1 или ПМК-2, имеющих 4 луночки, соответственно долям вымени коровы. Определение соматических клеток с помощью диагностических реактивов проводят в молоке из отдельных долей вымени или удоя коровы.

После каждого исследования необходимо промывать молочно-контрольные пластинки.

Проба с беломастином. Реакция основана на способности поверхностно-активного вещества образовывать гель с молоком, содержащим соматические клетки. При исследовании молока (секрета) из вымени коров, диагностикум разводят дистиллированной или кипяченой водой в соотношении 1: 3 (к 100 мл беломастина добавляют 300 мл воды). Срок использования рабочего раствора 8 месяцев.

Для проведения пробы с беломастином в луночки молочно-контрольной пластинки (МКП-1) из соответствующих долей вымени выдаивают по 1 мл испытуемого молока и добавляют 1 мл рабочего раствора диагностикума с помощью пипетки. Смесь молока с реактивом перемешивают стеклянной палочкой в течении 9-10 секунд. Результаты реакции:

• отрицательная реакция (-) - жидкая смесь остаётся однородной;
• сомнительная реакция (-, +) - в смеси образуются слизистые нити;
• положительная реакция (+) - смесь приобретает консистенцию слизистой массы или желеобразного сгустка.

Для контроля результатов лечения больных маститами животных молоко исследуют на 10-14 день после введения препаратов. В сборном молоке при отрицательной реакции в 1 мл содержится до 500 тыс. соматических клеток, при сомнительной - от 500 тыс. до 1 млн; при положительной - свыше 1 млн.

Проба с 2% раствором мастидина. Для приготовления 2% раствора мастидина к 100 мл 10% раствора, выпускаемого отечественной промышленностью, прибавляют 400 мл дистиллированной или прокипяченной воды. В луночки молочно-контрольной пластинки (ПМК-1, ПМК-2) из соответствующих долей вымени надаивают по 1 мл молока и добавляют 1 мл приготовленного 2% раствора мастидина с помощью пипетки-автомата или дозатора жидкости. Смесь молока с реактивом перемешивают палочкой в каждой луночке ПМК-1 поочередно в течение 10-15 секунд. При использовании ПМК-2 смешивание молока с реактивом проводят одновременно во всех луночках, путем ротационного вращения пластинки в горизонтальной плоскости. Реакцию учитывают по густоте желе:

• отрицательная реакция (-) - однородная жидкость;
• сомнительная реакция (-, +) - следы образования желе;
• положительная реакция (+) - ясно видимый сгусток, который можно выбросить из луночки палочкой при перемешивании.

На пластинке ПМК-2 при отрицательной реакции:

• (-) - образуется однородная смесь;
• (-,+) - при сомнительной реакции во время вращения пластинки на дне луночки заметны тонкие нити (тяжи) без тенденции образования сгустка;
• (+) - положительная реакция отчетливое появление слабого или быстро образующегося плотного сгустка, концентрирующегося при вращении пластинки в центре луночки.

Определение рН молока по цвету с 2% раствором мастидина:

• светло-сиреневый, дымчатый - рН молока нормальная (рН = 6,5-6,8);
• почти белый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);
• темно-сиреневый - повышенная щелочность молока (рН больше 8).

Проба с 5% раствором мастидина. Раствор мастидина готовят на дистиллированной или прокипяченной теплой воде.Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Определения рН молока по цвету:

• оранжевый, оранжево-красный (красно-оранжевый) - нормальная реакция молока (рН = 6,5-6,8);
• желтый - повышенная кислотность молока (рН меньше 6,5);
• красный - повышенная щелочность молока (рН больше 6,8);
• алый и малиновый - ярко выраженная щелочность молока (рН больше 7.0).

Проба с 1% раствором мастоприма. Препарат мастоприм представляет собой порошок желтоватого цвета, состоящий из смеси сульфанола (4 части) с едким натрием (1 часть). Раствор мастоприма готовят на дистиллированной воде.

Постановку пробы и учет реакции желеобразования проводят как при исследовании молока с 2% раствором мастидина.

Проба с димастином (по В.И. Мутовину.) Димастин включает в себя 2 реагента: поверхностно активное вещество акрилсульфонат и индикатор бромкрезол пурпур.

Проба позволяет одновременно выявлять в молоке щелочную реакцию и повышенное содержание клеток. Для этого в лунку молочно-контрольной пластинки вносят пипеткой по 1 мл исследуемого молока. Добавьте к нему из склянки 1 мл 5% раствора димастина. Стеклянной палочкой смешивают0 молоко с реагентом и сравните показания реакции. Молоко из больной четверти приобретает малиновый цвет и образует желеобразный сгусток. Молоко из здоровой доли - оранжевый цвет, а его консистенция не изменяется.

Проба Уайтсайда. Проба основана на косвенном учете повышенного содержание лейкоцитов и эпителиальных клеток. В лунку молочно-контрольной пластинки вносят глазной пипеткой 5 капель молока и добавляют 2-3 капли 4% водного раствора едкого натра. Реактивную смесь перемешивают стеклянной палочкой 20-30 сек. Молоко из больной доли вымени дает образование желеобразного сгустка.

Проба с розоловой кислотой. В лунку молочно-контрольной пластинки вносят 10 мл молока и добавить 1 мл 0,1% раствора розоловой кислоты на 65% спирте. В норме содержимое приобретает светло-розовую окраску. При патологии окраска содержимого имеет цвет от светлого до темно-красного.

Проба с мастит-диагностом. В состав мастит-диагноста входит: вода 100 мл, сульфанол-30, тринолинфосфат-5г, бромтимоловый синий - 0,02г, 1% раствор розоловой кислоты-0,5 мл.

В лунки молочно-контрольной пластинки вносят 1 мл молока и 1 мл реактива и смешивают. Гомогенная смесь - молоко от здоровых коров; наличие плотного желеобразного сгустка, тягучей массы или редко слизи - положительная реакция на скрытый мастит.

Бромтимоловая проба по Эрасту. Реактив: 0,1 г бромтимолблау + 100 мл 960 спирта. Берут 5 мл молока и добавляют 1 мл реактива, встряхивают в пробирке. При норме цвет желтоватый, желтый, желто-салатовый, желто-зеленый. Патология - светло-зеленый, зеленый, ярко-зеленый, сине-зеленый и синий цвет

Бромтимоловая проба по Логвинову. Реактив: 0,1 г бромтимолового индикатора + 20 мл 960 спирта + 80 мл дистиллированной воды. Берем 1 мл молока и 1 мл бромтимоловой пробы в луночки прибора для определения качества молока. Если появляется синяя окраска смеси, то реакция положительная. Если желтоватый цвет или без изменений, то реакция отрицательная.

Проба с бензидином. Используется для выявления в молоке пигментов крови. В пробирку наливают 5 мл 3% -ного раствора перекиси водорода и 2 мл насыщенного раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте. После тщательного взбалтывания в смесь прибавляют 2-10 капель молока. Положительная реакция - смесь окрашивается сначала в зеленый, а через минуту в темно-синий цвет; отрицательная - смесь светлая с беловатым хлопьевидным осадком.

Проба отстаивания. Молоко из каждой четверти вымени положительно реагирующее, проверяют пробой отстаивания. При положительной пробе, корова считается больной маститом. В конце доения из каждой доли в пробирку берут 10-15 мл молока и ставят на 16-18 часов в холодное место (в холодильник, при температуре от +4 до 100С), чтобы молоко не прокисло. Реакцию читают на второй день у источника света. Исследуют: цвет молока, наличие осадка, толщину и характер слоя сливок. Молоко от здоровой коровы белого или слегка синеватого цвета, осадок не образуется. Молоко от больной коровы - водянистое, консистенция сливок изменена (тягучие, слизистые, хлопьевидные). Главный признак - наличие осадка высотой 1 мм и более. Слой сливок толщиной более 1,5 см - нет мастита, слой менее 5 мм - есть мастит.

Коров с отрицательным результатом при постановке пробы отстаивания проверяют повторно при помощи вышеуказанных диагностических тестов не позднее чем через 6 дней после первой проверки.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛОКА

Секрет вымени коров, давших положительную реакцию с одним из быстрых маститных тестов, дополнительно исследуют бактериологически для выделения патогенной микрофлоры.

Для таких исследований отбирают пробы молока из четвертей вымени, реагирующих на быстрый маститный тест и дающих положительную пробу отстаивания. Исследуемое молоко отбирают в стерильные пробирки в количестве 10-15мл. Полученный материал в количестве 0,2 мл наносят на поверхность твердых питательных сред: Эндо, Левина, ЖСА (желточно-солевом агаре), Сабуро, 5 % -ый кровяной агар; а также в жидкие питательные среды накопления: селенитовый бульон и сахарный бульон. Посев на поверхность твердых питательных сред проводят шпателем. Посевы на средах Эндо, Левина, 5 % -го кровяного агара, а также жидкие питательные среды накопления инкубируют в термостате при температуре 370С в течении 24 часов; посевы на ЖСА инкубируют в термостате при температуре 370С в течении 48 часов; посевы на среде Сабуро инкубируют в термостате при температуре 220С в течении 5 суток. Ежедневно все среды просматривают. Через 24 часа со сред накопления проводят пересев исследуемого материала, с помощью петли, на плотные питательные среды: с селенитового бульона - на среду Плоскирева и Висмут-сульфит-агар; с сахарного бульона - на 5% -ый кровяной агар, ЖСА, среду Эндо. Подозрительные (лактозонегативные) колонии (КОЕ - колонии образующие единицы) со сред Эндо, Левина, Плоскирева отсевают на дифференциально-диагностический скошенный агар Клиглера. Подсчитывают число выросших колоний (КОЕ) на плотных питательных средах. На ЖСА через 48 часов учитывают рост белых, кремовых, палевых, золотистых колоний (КОЕ), обладающих лецитиназной активностью и без нее. Отсевают на скошенный МПА, ставят пробы на плазмокоагуляцию и ферментацию маннита и пробу на окисление глицерина. С косяков агара Клиглера и МПА делают мазки с окраской по Граму и наблюдают: в одних случаях - грамотрицательные палочки средних размеров с закругленными концами, распологающиеся беспорядочно; в других случаях - грамположительные кокки мелких и средних размеров, располагающиеся гроздьями, поодиночке, попарно. В итоге определяют вид стафилококков. На 5% -ом кровяном агаре учитывают рост мелких колоний (КОЕ): белесых, бесцветных, сероватых, дающих зону альфа и бетта гемолиза и без нее. Отсевают на сектора 5% -го кровяного агара и изучают морфологию с окраской по Граму. В случае обнаружения грамположительных кокков мелких и средних размеров, распологающихся поодиночке, попарно, цепочками, беспорядочно, отсевают на МПА, обезжиренное молоко с метиленовым синим, желчный бульон, ЭДДС-агар. По изменению или наличию роста на данных средах определяют род и вид некоторых стрептококков.