Экологические факторы жилища человека и его здоровья

К общим колиформным  бактериям относятся грамотрицательные  не образующие спор палочки,  не обладающие  оксидазной активностью, ферментирующие глюкозу или маннит с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37 °С в течение 24-х часов.

Термотолерантные колиформные  бактерии обладают всеми признаками общих колиформных бактерий, которые, кроме того, способны ферментировать лактозу до кислоты и газа при  температуре 44° С в течение 24-х часов (МУК, 2001).

Метод основан на фильтрации установленного объема воды через мембранные фильтры, выращивании посевов на селективной питательной среде  с лактозой и последующей идентификацией колоний по культуральным и биохимическим  свойствам.

При исследовании воды анализировали 300 мл воды.

Необходимый  объем  воды  фильтровали  через мембранные фильтры. Их помещали на среду Эндо. Чашки с фильтрами ставили  в термостат дном вверх и инкубировали посевы при температуре 37 ±1° С  в течение 24±2 часов.

Результат считается  отрицательным, если на фильтрах вообще не выросли колонии, или выросли  колонии с неровными краями и  поверхностью (пленчатые, губчатые, плесневые, прозрачные, слизистые) (МУК, 2001).

При наличии типичных лактозоположительных колоний, дающих отпечаток на обратной стороне мембранного фильтра и среде - темно-красных, красных с металлическим блеском и без него, выпуклых с красным центром и других оттенков, а также лактозоогрицательных - розовых без отпечатков, подсчитывали число колоний каждого типа.

Для определения оксидазной активности использовали системы индикаторные бумажные (СИБ). Если СИБ изменилась на темно-синий или фиолетовый цвет, то реакция положительная. Если нет, то реакция отрицательная. Более  позднюю реакцию, позднее 30 секунд, не учитывали.

Все типичные лактозоположительные колонии засевали параллельно в  две пробирки с одной из лактозных  сред. Для определения общих колиформных  бактерий посев инкубировали при  температуре 37±1° С в течение 24±2 часов. Для определения термотолерантных бактерий посев производим в среду, предварительно прогретую до температуры 44°С и инкубируем при температуре 44±0,5°С в течение 24±2 часов.

Первичный учет газообразования  на подтверждающих средах осуществляем через 5-6 часов. При отсутствии кислоты и газа или при наличии только кислоты пробирки оставляем для окончательного учета через 24 часа.

При необходимости, если отсутствует газообразование в  пробирках с лактозой, допустимо, для подтверждения принадлежности колоний к общим колиформным  бактериям сделать пересев в среду с глюкозой, инкубируя посевы при температуре 37±1°С в течение 24±2-часов.

Колонии учитываем как  бактерии семейства Enterobaceriaceae при отрицательном оксидазном тесте, ферментации лактозы или глюкозы при температуре 37±1 °С с образованием кислоты и газа.

Среды этих колоний учитывали  как термотолерантные колиформные  бактерии при отрицательном оксидазном тесте и ферментации лактозы  при температуре (44±0,5)ºС с образованием кислоты и газа.

Результат анализа выражали числом колоний в 100 мл воды (МУК, 2001), используя формулу:        

Х =     (а •100) ÷ b                                                 (формула 1)

где

х - коли-индекс;

а - число выросших колоний;

b - объем исследуемой воды (в мл).

при подтверждении результата, в протоколе отмечалось "обнаружено".

В случаях сплошного  роста на всех фильтрах и невозможности  получения изолированных колоний  результат не учитывался. В протоколе  отмечалось "сливной рост".

При отсутствии ОКБ бактерий на всех фильтрах результат записывали как "не обнаружено - КОЕ в 100мл". Вычисление и обновление   результатов   в   протоколе   определения термотолерантных колиформных бактерий проводили аналогично (МУК,     2001).

 

2.2.3. Метод определения  числа лактозоположительных кишечных  палочек в воде

 

В качестве основного показателя степени фекального загрязнения воды водоемов определяют лактозоположительные кишечные палочки  к которым относят грамотрицательные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 37+0,5 С в течение 24±2 часов с отрицательным оксидазным тестом.

Для анализа использовались пробирки с лактозо-пептонной средой.

1 мл пробы воды и  1 разведение вносили в пробирки  с 10 мл среды.

Посевы инкубировали при температуре 37±0,5° С в течение 24±2 часов.

Полное отсутствие изменения среды или помутнение без образования газа позволяет дать отрицательный ответ.

Из посевов в среду  накопления, где отмечено помутнение и газообразование, производили  высев на поверхность подтверждающей плотной фуксин-сульфитной среды  Эндо, разделенной на 3-4 сектора с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Посевы на среде Эндо инкубировались при температуре 37±0,5°С в течение 24±2 часов.

При наличии в среде  накопления помутнения и газообразования, а при высеве на подтверждающую среду характерных для лактозоположительных кишечных палочек колоний (темно-красных с металлическим блеском и без него) даем положительный ответ. Время анализа 48 часов.

После определения положительных  и отрицательных результатов  на наличие лактозоположительных кишечных палочек в объемах воды, засеянных в среду накопления, вычислялся коли-индекс по таблице расчета числа бактерий в 1 л воды ГОСТ 18963-73 (МУК, 2001), результат выражался в бляшко-образующих единицах (БОЕ) на 100 мл пробы воды.  Все полученные результаты анализов воды сравнивали с гигиеническими нормативными данными, приведенными в таблице 1.

 

Таблица 1

Гигиенические нормативы качества питьевой воды

(Питьевая вода, 2001)

 

Показатели	Единицы измерения	Нормативы
Термотолерантные колиформные бактерии	Число бактерий в 100 мл	Отсутствие
Общие колиформные бактерии	Число бактерий в 100 мл	Отсутствие
Общее микробное число	Число образующих колоний  в 1 мл	Не более 50
Колифаги	Число бляшко-образующих единиц (БОЕ) в 100 мл	Отсутствие

2.3. Химический анализ воды

2.3.1. Органолептические  методы

 

Органолептическими методами определяют характер и интенсивность  запаха и привкуса, цветности и  мутности по ГОСТу-3351-74. Объектом исследования была вода из водопроводной сети и 6 фильтров. Для отбора проб воды использовались стерильные флаконы вместимостью 0,5 дм³ с притертой каучуковой пробкой. Условием метода является то, что пробы должны быть исследованы не позже, чем через 2 часа после отбора (Государственный контроль качества воды).

Характер запаха воды определялся ощущением воспринимаемого запаха (землистый, хлорный, нефтепродуктов). Интенсивность запаха определялась при 20º С и 60º С, для этого колбу с пробой воды подогревали на водяной бане до нужной температуры. Интенсивность запаха оценивали по пятибалльной системе:

1 – очень слабый  запах, практически неощутимый;

2 – запах слабый, заметный  лишь в том случае, если обратить  на него внимание;

3 – запах легко  замечается и вызывает неодобрительный  отзыв о воде;

4 – запах отчетливый, обращает на себя внимание и заставляет воздержаться от питья;

5 – запах настолько  силен, что делает воду непригодной  к употреблению.

Характер привкуса определялся  ощущением воспринимаемого привкуса (соленый, кислый, сладкий, горький). Интенсивность  привкуса определяется при 20º С по пятибалльной системе:

1 – очень слабый  привкус;

2 – слабый привкус;

3 – заметный привкус;

4 – привкус отчетливый;

5 – очень сильный  привкус;

Цветность и мутность определяется путем сравнивания  проб исследуемой воды со стандартными суспензиями. Для приготовления стандартных суспензий используется электрофотоколлориметр с синим светофильтром (для определения цветности) и с зеленым светофильтром (для определения мутности). Цветность и мутность воды оценивается по шкале с градациями от 0 – 14. Цветность выражают в градусах цветности, а мутность в мг/дм³.

2.3.2. Методы  определения содержания остаточного  свободного хлора, хлоридов и железа в воде

 

Объектом исследования являлась водопроводная, кипяченная и  фильтрованная вода. Забор воды производился из водопроводной сети Железнодорожного района и 2-го поселка Орджаникидзе.

 Для отбора проб  воды использовались флаконы  вместимостью 0,5 дм³ с стеклянной пробкой. Пробы воды из водопроводной сети отбирались при соблюдении правил стерильности, обжиганием пламенем горящего тампона, смоченного в спирте и последующего спуска воды в течение 15 минут при полностью открытом кране. Условием метода является то, что пробы должны быть исследованы немедленно после отбора пробы.

Для определения остаточного  свободного хлора по ГОСТу 18190-74, 100 см³ анализируемой воды помещался в фарфоровую чашку, добавляли 2-3 капли раствора соляной кислоты и титровали раствором метилового оранжевого (пара- диметиламиноазобензольсульфокислый натрий) до появления неисчезающей розовой окраски. Содержание остаточного свободного хлора вычисляется по формуле (мг/л).

        

Х =  0,04  +  (D•0,0217) • 100 ÷V               (формула 2)

D – количество раствора метило оранжевого, см³

0,0217 – титр раствора  метило оранжевого

0,04 – эмперический  коэффициент

V – объем исследуемой воды.

Определение хлоридов в  воде по ГОСТу-4245-72, осуществлялся титрованием  азотнокислой ртутью. Содержание хлоридов (мг/л) вычисляли по формуле:

Х = υ • 0,5 • K • 100  ÷ V                                        (формула 3)

                   

υ – количество азотной  ртути, см³

K – поправочный коэффициент

V – объем воды, взятой для определения, см³

Метод определения железа в воде по ГОСТу 4011-72 основан на взаимодействии железа в щелочной среде с сульфосалициловой  кислотой. 100 см³ анализируемой воды помещали в фарфоровую чашку и добавляют 5 капель сульфосалициловой кислоты с образованием окрашенного в желтый цвет комплексное соединения. Интенсивность окраски, пропорциональную массовой концентрации железа, измеряют фотоколориметр с фиолетовым светофильтром и определяли по градуировочному графику.             

Массовую концентрацию железа вычисляли по формуле:

Х = С • 50 ÷ V                                         (формула 4)

Где С – концентрация железа, найденная по градуировочному графику, мг/дм³

50 – объем, до которого  разбавлена проба

V – объем воды взятый на определение см³

Нормативы качества питьевой воды, полученные путем химического  анализа отражены в таблице 2.

Таблица 2

Химические  нормативы качества питьевой воды  (Питьевая вода, 2001)

Показатели	Величина допустимого  уровня, единицы измерения
Мутность	Не более 1,5 мг/л
Цветность	Не более 20 градусов
Запах	Не более 2,0 баллов
Привкус	Не более 2,0 баллов
Остаточный свободный  хлор	Не более 1,2 мг/л
Хлориды	Не более 350,0 мг/л
Железо	Не более 0,3 мг/л

 

 

3. Результаты и обсуждение

 

В бактериологических исследованиях  особая роль принадлежала, выявлению  в воде бактерий группы кишечной палочки, поскольку она служит санитарно-показательным  микроорганизмом.  Результаты исследования представлены в таблице 3.

По гигиеническим нормативам качество питьевой воды присутствие  общих и термотолерантных  колиформных  бактерий и колифагов недопустимо (таблица 1). Однако в исследуемых  годах наблюдалась высеваемость этих микроорганизмов в Железнодорожном районе, хотя в 2003 году   общих и термотолерантных  колиформных бактерий не выявлялось. Проанализировав результаты баканализа водопроводной воды по исследуемым районам можно отметить увеличение общего микробного числа в Железнодорожном районе на 1,6%, и снижение - во втором поселке Орджаникидзе на 1,4% по сравнению с 2003 годом.