Антиоксидантная система растения

 

На аналитических весах в стаканчике взвешивают (0,0500 ± 0,0001) г галловой кислоты, добавляют туда приблизительно 30 см3 бидистиллированной воды. После растворения галловой кислоты содержимое стаканчика количественно переносят  в мерную колбу вместимостью 50 см3, доводят объем до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают. Срок хранения раствора в холодильнике - 1 месяц при температуре (4 ± 1) о С.

  

 

 

Приготовление раствора галловой кислоты с массовой концентрацией 100 мг/дм3

 

В мерную колбу вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором вводят 1 см3 исходного раствора галловой кислоты, доводят объем до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают.

Раствор готовят непосредственно перед градуировкой.

 

 

Приготовление градуировочных растворов галловой кислоты с массовой концентрацией 0,2; 0,4; 2,0; 4,0 мг/дм3

 

В мерные колбы вместимостью 10 см3 пипеточным дозатором  вводят  20, 40, 200, 400 μл раствора  галловой кислоты с массовой концентрацией 100 мг/дм3, доводят объем до метки  бидистиллированной водой и тщательно перемешивают.

Градуировочные растворы галловой кислоты готовят каждый раз при градуировке.

Погрешность приготовления градуировочных растворов не должна превышать (±2,5) %.

 

 

 

Приготовление раствора ортофосфорной кислоты с молярной концентрацией 0,0022 моль/дм3 (элюент)

 

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 наливают приблизительно 700 см3 бидистиллированной воды, добавляют пипеточным дозатором 150 μл концентрированной ортофосфорной кислоты, доводят до метки бидистиллированной водой и тщательно перемешивают.Раствор хранят в вытяжном шкафу в колбе с притертой пробкой, срок хранения  2 недели

 

 

 

Обработка результатов измерений

 

массовую долю антиоксидантов, Х, мг/г, рассчитывают по формуле (2)

,  (2)

где  ХГ - значение массовой концентрации антиоксидантов, найденное по градуировочному графику, мг/дм3;

Vn - объем раствора (экстракта) анализируемой пробы, см3;

mn - навеска анализируемого вещества, г.

N - кратность разбавления анализируемого образца.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Антиоксидантная система защиты водяного кресса

 

Но чтобы понять, как растительные антиоксиданты защищают организм человека, необходимо знать закономерности формирования системы антиоксидантной защиты в самом растении при воздействии стрессоров. Основными антиоксидантами водяного кресса являются аскорбиновая кислота и фенольные соединения, которых в высших растениях обнаружено более 8 тысяч. Локализуются они в большом количестве в зеленых листьях, несколько меньшем в стеблях. В процессе вегетации растения антиоксидантная система клетки приспосабливается к действию неблагоприятных факторов среды, изменяя состав и содержание антиоксидантов.

Исследовали механизм адаптации антиоксидантной системы листьев и стеблей водяного кресса к фото стрессу. Оптимальные условия вегетации водяного кресса в защищенном грунте наблюдаются при температурном режиме 20…25°С и интенсивности освещения 14-16 клк, при которых листья и стебли растения окрашены в зеленый цвет. Высокая интенсивность освещения (40 клк) индуцирует образование пигментов, окрашивающих стебель в сине-фиолетовый цвет, при этом листья остаются зелеными, но более жесткими, как и стебель. Морфологические изменения указывают, что высокая интенсивность освещения для водяного кресса является слабым стрессором, который тем не менее инициирует в клетках растения развитие окислительного стресса. Поэтому важно изучить особенности формирования пула антиоксидантов фенольной природы в листьях и стеблях водяного кресса в процессе вегетации при высокой интенсивности освещения.

Результаты исследования фракционного состава и содержания фенольных соединений в листьях растений водяного кресса, выращенных при разной интенсивности освещения выявили, что суммарное содержание фенольных соединений в них практически сравнимо, тогда как содержание полифенолов отдельных групп различается между собой (табл. 1.). Содержание простых фенолов, включая фенолкарбоновые кислоты, и биофлавоноидов было выше на 25 и 6%, соответственно, в листьях растений, выращенных при низкой интенсивности освещения (15 клк), тогда как количество конденсированных полифенолов в них снизилось на 36% по сравнению с растениями, вегетирующими при высокой интенсивности света.

В зеленых стеблях растений водяного кресса общее содержание фенольных соединений было на 13% ниже по сравнению с сине-фиолетовыми стеблями, а кроме того, в зеленых стеблях растений в отличие от листьев обнаружено накопление лейкоантоцианов (предшественников антоцианов). При высокой интенсивности освещения содержание лейкоантоцианов в зеленых стеблях существенно снижается и индуцируется синтез антоцианов, окрашивающих стебли в густо сине-фиолетовый цвет. В пигментированных стеблях обнаружено также снижение количества флавоноидов в 2 раза по сравнению с зелеными стеблями при значительном уменьшении содержания конденсированных и полимерных полифенолов. Кроме того, в пигментированных стеблях обнаружена хлорогеновая и кофейная кислоты.

 

 

 

 

 

 

ГЛАВА III. Результаты и обсуждение

 

Результаты и обсуждение. Суммарное содержание антиоксидантов в 12 дневных проростках коллекционных образцов представлено в табл. 1. Возможности качественного определения антиоксидантов продемонстрированы на интегральной вольтамперограмме (рис. 1). Отношение сигналов при разных потенциалах характеризуют вклад веществ с различной антиоксидантной активностью. Чем меньше потенциал рабочего электрода, при котором происходит окисление, тем легче соединение донирует электрон и тем выше его реакционная способность. В нашем случае - это способность in vivo взаимодействовать со свободными радикалами с разрывом цепи свободнорадикального окисления [4]. При снятии интегральных вольтамперограмм, разбавление экстрактов проводилось таким образом, чтобы сигналы при потенциале рабочего электрода 1,3 В (т.е. при условиях, в которых определяется суммарное содержание антиоксидантов) были примерно одинаковы. Видно, что при одном и том же потенциале, отличном от 1,3 В, сигналы от образцов отличаются. Это связано с различием в составе исследуемых образцов.

 

Таблица. 3

Суммарное содержание антиоксидантов

 

№	Образец	Х, мг. экв. галловой к-ты / г сырого образца
	Салат (обр. 6)	0,131±0,004
	Водяной кресс	0,85±0,03
	Укроп (обр. 4)	1,08±0,03
	Укроп (обр. 3)	1,52±0,05
	Мангольд (обр. 1)	1,01±0,03

 

 

Рис. 1. Интегральные вольтамперограммы водных экстрактов образцов из коллекции ВНИИССОК.

 

 

       

 

 

 

 

 

 

 

Заключение

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Выводы