Методы качественного и количественного определения некоторых антибактериальных химиотерапевтических препаратов ряда пенициллинов и ни

Методика I. 1. Приготовление раствора антибиотика. В половине стакана кипяченной и охлажденной воды (100,0 см³) растворяют 1 таблетку препарата, предварительно растертую, содержащую 0,25 г антибиотика⁵. Для полного растворения раствор выдерживают при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем раствор над осадком сливают в другой стакан, получая в результате слегка мутный раствор с концентрацией антибиотика 0,051 – 0,062 моль/дм³. В полученный раствор добавляют чайную ложку (1 г) кальцинированной соды Na₂CO₃, перемешивают до полного ее растворения и оставляют на 10 минут.

2. Приготовление раствора сульфата меди. В половине стакана кипяченной и охлажденной воды (100,0 см³) растворяют 1 чайную ложку  
(~1,6 г) сульфата меди CuSO₄.

3. Выполнение определения. К раствору антибиотика прибавляют 3 чайных ложке 9% раствора уксусной кислоты (5 см³) и 1 столовую ложку раствора сульфата меди (7 – 10 см³). Перемешивают содержимое стакана и наблюдают происходящие изменения окраски раствора.

Анализу подвергались медицинские  препараты ряда пенициллинов: ампициллина тригидрат, амоксициллина тригидрат и оксациллина натриевая соль.

Таблица 9

Эффекты, наблюдаемые в результате реакции

Лекарственная форма изготовитель	Наблюдаемые эффекты
Оксациллина натриевая соль. Таблетки. ОАО «Органика», г. Новокузнецк, Россия	Сразу после смешивания растворов выпадает голубой осадок и образуется раствор светло-зеленого цвета, который через 5 минут меняет окраску на темно-зеленую
Ампициллина тригидрат. Таблетки. ОАО «Биосинтез», г. Пенза, Россия	Образуется раствор фиолетового  цвета. Через 5 – 7 минут окраска раствора переходит в темно-фиолетовую
Амоксициллина тригидрат. Таблетки. ООО  «Барнаульский завод медицинских  перепаратов»	Образуется раствор фиолетового  цвета. Через 5 – 7 минут окраска раствора переходит в темно-фиолетовую

 

Методика II. 1. Приготовление аммиачного раствора сульфата меди(II). Смешивают в стакане водные растворы аммиака (0,5 столовой ложки = 6 см³) и сульфата меди(II)⁶ (0,5 чайной ложки = 2,5 см³).

2. Выполнение  определения. В образующийся раствор, имеющий интенсивно синюю окраску, добавляют 2,5 столовых ложки воды и на кончике ножа (0,005 – 0,025 г) растертый порошок антибиотика. Перемешивают содержимое стакана и наблюдают происходящие изменения окраски раствора. В результате реакции, образуется раствор фиолетового цвета, который через 5 – 7 минут становиться зеленым. При большом содержании антибиотика цвет раствора изменяется на желто-коричневый.

Анализу подвергались медицинские препараты ряда пенициллинов: ампициллина тригидрат и амоксициллина тригидрат.

Методика  предусматривает некоторый избыток ионов меди(II) в реакционной смеси (мольное соотношение Cu(II) : антибиотик от 5,3 : 1 до 27,0 : 1). В присутствие более чем 27 кратного избытка ионов Cu²⁺ окраска раствора не изменяется и остается интенсивно синей при добавлении антибиотика.

2. Количественный химический анализ фармацевтических препаратов с антибактериальным действием
1. Йодометрическое определение содержания фурацилина в медицинском препарате «Фурацилин»

Методика 11 [48]. Около 0,02 г препарата (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см³, прибавляют 70 см³ воды и растворяют при нагревании до 70–80°С на водяной бане. Охлажденный раствор доводят водой до метки и перемешивают. 5,0 см³ раствора йода (0,01 моль/дм³ (1/2 I₂)), помещают в колбу вместимостью 50 см³ с притертой пробкой, прибавляют 0,1 см³ (0,1 М) раствора NaOH и вносят 5,0 см³ приготовленного раствора фурацилина. Оставляют на 1–2 минуты в темном месте. Затем к раствору прибавляют 2 см³ H₂SO₄ разведенной и выделившийся йод титруют раствором натрия тиосульфата (0,01 моль/дм³) в присутствии крахмала. 1,0 см³ 0,01 н. раствора йода соответствует 0,0004954 г фурацилина, которого в препарате должно быть не менее 97,5 % [43].

Анализу подвергался  медицинский препарат «Фурацилин» (ОАО «Татхимфармпрепараты», г. Казань, Россия) с номинальным содержанием активного вещества (5-нитрофурфурола семикарбазон) 0,02 г в 1 таблетке (масса таблетки ~ 0,8 г). 10 таблеток препарата (1 упаковка) предварительно тонко растирали пестиком в фарфоровой чашке. Раствор для анализа готовили растворением точной навески полученного порошка в дистиллированной воде и проводили исследования в соответствии с методикой 11. По результатам определения содержание 5-нитрофурфурола семикарбазона составило 0,020695 г в 0,80035 г препарата.

2. Методика количественного определения фурацилина 
   методом градуировочного графика

Методика III. Навеску в 0,77345 г, порошка растертых таблеток фурацилина⁷, количественно переносят в мерную колбу на 100 см³, добавляют 70 см³ воды и выдерживают на водяной бане при 70-80°С до полного растворения препарата. Охлажденный раствор доводят водой до метки и тщательно перемешивают. Исходный раствор препарата фурацилина имеет концентрацию ~ 0,02 %.

Градуировочный график. В ряд мерных колб вместимостью 25,0 см³ вносят соответственно 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0 см³ исходного раствора фурацилина, прибавляют по 2,0 см³ 0,1 М раствора NaOH и доводят водой до метки. Через 20 мин измеряют оптические плотности растворов в кювете толщиной 1 см относительно раствора сравнения (готовят без добавления исходного раствора препарата фурацилина) при длине волны около 450 нм.

Для построения градуировочного графика было приготовлено 5 серий растворов с различным содержанием фурацилина и измерена их оптическая плотность. На основании полученных данных для каждого значения концентрации было рассчитано среднее значение А и построена зависимость 
А = f (C). Как видно из полученного графика линейность его сохраняется до 
С ~ 6 · 10^–4 %.

Таблица 10

Значения  оптической плотности растворов фурацилина с различной концентрацией

С·104,% А	0,8	1,6	2,4	3,2	4,0	4,8	5,6	6,4	7,2	8,0
Серия 1	0,012	0,037	0,065	0,092	0,117	0,151	0,173	0,188	0,199	0,202
Серия 2	0,015	0,041	0,068	0,09	0,121	0,151	0,177	0,194	0,198	0,211
Серия 3	0,017	0,045	0,068	0,098	0,121	0,158	0,176	0,193	0,200	0,211
Серия 4	0,014	0,046	0,070	0,098	0,125	0,152	0,180	0,197	0,195	0,212
Серия 5	0,017	0,043	0,069	0,098	0,125	0,158	0,180	0,198	0,199	0,207
Среднее	0,015	0,042	0,068	0,097	0,122	0,154	0,177	0,194	0,198	0,209

Рис. 13. Градуировочный график для определения фурацилина с раствором NaOH в диапазоне концентраций (0,8 – 8,0)·10^–4, %. λ = 450 нм, l = 1 см, 
t = (20 ± 2)°С

 

 

Таблица 11

Апробация методики на растворах препарата  «Фурацилин»

Введено, С×10–4 %	Найдено, С×10–4 %	Результат анализа (Сх ± Δ)∙10–4, %
1,64	1,64 1,60 1,57 1,60 1,48 1,67	1,59 ±  0,18
3,28	3,36 3,34 3,36 3,31 3,31 3,28	3,33 ±  0,08
4,09	4,19 4,10 4,13 4,16 4,04 4,16	4,13 ±  0,15
4,91	5,01 5,04 5,10 4,89 4,92 4,99	4,99 ±  0,21

 

3. Йодометрическое определение содержания ампициллина в медицинском препарате «Ампициллина тригидрат»

Методика 12 [5]. Точную навеску препарата (0,06 – 0,1 г) растворяют в воде в мерной колбе емкостью 100 см³, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. 5,0 см³ раствора переносят в коническую колбу с притертой пробкой емкостью 250см³, прибавляют 2,0 см³ 1 М раствора натрия гидроксида и оставляют на 20 минут. После этого к смеси прибавляют 2,0 см³  
1 М раствора хлороводородной кислоты, 5,0 см³ 0,3 М раствора ацетатного буфера⁸ (рН 4,50 ± 0,05), 20,0 см³ 0,01 н. раствора йода и оставляют на 20 минут в темном месте. Избыток йода оттитровывают 0,01 н. раствором тиосульфата натрия до слабо-желтого цвета, затем прибавляют раствор крахмала и титруют до обесцвечивания.

В контрольную  колбу переносят 5,0 см³ раствора пенициллина, прибавляют 5,0 см³ 0,3 М раствора ацетатного буфера (рН 4,50 ± 0,05), 20,0 см³ 0,01 н. раствора йода и оставляют на 20 минут в темном месте. Избыток йода оттитровывают 0,01 н. раствором тиосульфата натрия до слабо-желтого цвета, затем прибавляют раствор крахмала и титруют до обесцвечивания.

Разность в  объемах между титрованиями соответствует  содержанию суммы пенициллинов в  препарате. Препарат должен содержать не менее 80% ампициллина (в пересчете на сухое вещество).

Расчет содержания суммы пенициллинов в препарате (X, %) проводят по формуле:

,

где: X – содержание суммы пенициллинов в препарате, %;

а – исходная навеска препарата, г;

V₁ – объем раствора препарата первого разведения, см³ (100 см³);

V₂ – объем аликвотной части разведения, взятой для определения, см³ (5см³);

V – разность в объемах стандартного 0,01 М раствора натрия тиосульфата, пошедшего на титрование в контроле и опыте, см³;

К – поправочный коэффициент к титру стандартного 0,01 М раствора натрия тиосульфата (0,99353);

Э – величина эквивалента 1 см³ 0,01 М раствора йода в граммах стандартного образца натриевой соли бензилпенициллина или в граммах стандартного образца феноксиметилпенициллина (с пересчетом на химически чистое вещество). Величину Э можно найти по таблице 1 (см. Приложение 1), учитывая температуру, при которой проводились йодометрические определения суммы пенициллинов в препарате.

С – коэффициент пересчета стандартного образца натриевой соли бензилпенициллина на исследуемый пенициллин, указанный в соответствующей частной статье (1 мг)

100 – коэффициент  пересчета (в процентах).

Анализу подвергался медицинский препарат «Ампициллина тригидрат» (ОАО «Биосинтез», г. Пенза, Россия) с номинальным содержанием активного вещества (тригидрата (6R)-6(L-фенил-D-глициламино)-пенициллановой кислоты) 0,250 г в 1 таблетке (масса таблетки ~ 0,37 г). 20 таблеток препарата (2 упаковка) предварительно тонко растирали пестиком в фарфоровой чашке. Раствор для анализа готовили растворением точной навески полученного порошка в дистиллированной воде и проводили исследования в соответствии с методикой 12. По результатам определения содержание тригидрата (6R) - 6(L-фенил- D-глициламино) пенициллановой кислоты составило 0,06058 г в 0,10285 г препарата.

 

4. Методика количественного определения ампициллина методом градуировочного графика

Методика 13 [49]. 1. Приготовление раствора ампициллина тригидрата. Навеску в 0,3910 г, порошка растертых таблеток ампициллина, растворяют в 150 см³ воды. Полученный раствор фильтруют, количественно переносят в мерную колбу на 250,0 см³ и доводят до метки водой. Исходный раствор ампициллина, приготовленный из навески препарата предварительно стандартизованного по методике 12 (см. п. 3. 2. 2. 3.), имеет концентрацию 0,0022837 М.

2. Приготовление 0,01 М раствора CuSO₄ в 1 М растворе NH₃. 87,5 см³ исходного раствора СuSO₄ (С⁰(Сu²⁺) = 0,11429 М) помещаем в мерную колбу вместимостью 1,0 дм³, добавляем 141,0 см³ концентрированного раствора аммиака (С⁰(NH₃) = 7,05185 М), доводят до метки водой и перемешивают.