Диагностические препараты. Диагностикумы и антигены

Государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования (ГБОУ ВПО)

«Томская государственная медицинская академия»

Минздрава РФ

 

Кафедра управления и экономики фармации,

с курсами ботаники, фармакогнозии, фармацевтической технологии,

фармацевтической и токсикологической  химии

 

 

 

 

РЕФЕРАТ

ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ. ДИАГНОСТИКУМЫ И АНТИГЕНЫ

 

 

 

Выполнила студентка        ____________                 Валерия Сергеевна Иванова

                                                (подпись)

 

Научный руководитель      ____________                Татьяна Михайловна Сидорова

к.б.н., ассистент кафедры

                                                 (подпись)

 

 

 

 

 

 

 

Томск 2013

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………………..3

 

Глава 1 ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ О ДИАГНОСТИКУМАХ………………………………5

 

Глава 2 ДИАГНОСТИКУМЫ ДЛЯ РАСПОЗНАВАНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ…………………………………………………………………………..7

2.1 Бактерийные диагностикумы………………………………………………………...7

2.2 Риккетсиозные диагностикумы……………………………………………………12

2.3 Вирусные диагностикумы – антигены……………………………………………..15

 

ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………………………..17

 

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК…………………………………………………..18

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ВВЕДЕНИЕ

Эпидемическая обстановка в  мире никогда не была спокойной. Все  время наблюдались вспышки инфекционных заболеваний и появлялись новые  виды заразных болезней, а в последние 10 лет происходит возвращение «старых» инфекций. Генетическая изменчивость циркулирующих штаммов, внутрибольничные инфекции, бактерионосительство, трудности в обеспечении и применении иммунобиологических препаратов требуют усиления работы в области иммунопрофилактики и иммунотерапии. Недостаточное внимание к этим проблемам неминуемо приводит к подъему инфекционной заболеваемости. Профилактика и лечение, основанные на иммунологических принципах, стали решающим средством снижения детской смертности, увеличения продолжительности и улучшения качества жизни всех возрастных групп населения.

Хорошо известно, что профилактика является самым эффективным и  самым экономичным способом сохранения здоровья людей.

Люди научились бороться с инфекциями, однако их иммунная система  стала слабее реагировать на патогены и не всегда справляется с инфекционными заболеваниями [2].

Диагностические препараты  относятся к иммунобиологическим  препаратам, поскольку их действие основано на иммунологических принципах  и реакциях. Диагностические препараты, системы и наборы широко используют для диагностики инфекционных и  неинфекционных болезней, индикации  и идентификации бактерий, вирусов, грибов и простейших, для определения  иммунного статуса, аллергических  и иммунопатологических расстройств, иммунологической совместимости тканей, иммунных взаимоотношений матери и  плода и т.д.

Диагностикумы применяют для выявления специфических антигенов и антител, аллергенов, сенсибилизированных иммунокомпетентных клеток, факторов естественной резистентности, иммунорегуляторов. В соответствии с целевым назначением диагностических препаратов они содержат те или иные специфические иммунореагенты (антигены, антитела, аллергены, иммуномодуляторы, факторы естественного иммунитета и др.), которые используют для выявления объекта исследования в определенных реакциях или тест-системах. Эффект реакции в соответствии с характером иммунореагентов и механизма реакции регистрируют по физическим (например, мутность), химическим (например, изменение цветности) или клиническим (симптомы и проявления) показателям [1].

На основе перечисленных  иммунологических реакций созданы  сотни современных диагностических  систем, с помощью которых диагностируют  инфекционные (ВИЧ-инфекции, грипп, брюшной  тиф, чума, холера, хламидиоз, вирусные гепатиты и др.) и неинфекционные (онкологические, аллергические, иммунопатологические и др.) болезни. Иммунологические методы диагностики специфичны, высокочувствительны и достоверны, поэтому находят широкое применение в медицине и экологии [6].

Целью моей работы является изучение антигенных диагностикумов.

Для достижения данной цели необходимо решить следующие задачи: провести обзор соответствующей литературы, ознакомиться с понятиями антигенной диагностики, определить степень значимости в современной медицине.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Глава 1 ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ О ДИАГНОСТИКУМАХ

Диагностикумы – это взвеси убитых микробов, чаще всего в  физиологическом растворе, применяемые в качестве антигенов для серологических реакций. Преимущество диагностикумов перед живой культурой заключается в стабильности их агглютинабильных свойств, стандартности, безопасности и простоте обращения с  ними. Использование диагностикумов дает возможность широко применять серологические методы в практике массовой работы. Особое значение имеют диагностикумы в  случаях, когда работа с живыми бактериями или вирусами опасна из-за их высокой инфекционности (например, с бруцеллами, туляремийными бактериями, вирусами клещевого и японского энцефалитов и др.). Диагностикумы, используемые для распознавания инфекционных заболеваний, делятся на бактерийные, риккетсиозные и вирусные. С их помощью в сыворотке больных можно определить наличие антител по отношению к определенному виду микроба-возбудителя [1].

Более тонкие различия антител  в изучаемой сыворотке устанавливают при помощи специфических монодиагностикумов. Так, при брюшном тифе для определения групповых О-антител и видовых Н-антител применяются соответствующие О- и Н-диагностикумы из культуры брюшнотифозных бактерий 0-901 или бактерий паратифа № 2, обладающих общим О-антигеном с брюшнотифозными бактериями; Н-диагностикум представляет собой взвесь бактерий, обладающих выраженной подвижностью [3].

Диагностические препараты  применяются для следующих целей:

1. для определения с помощью специфических иммунных сывороток вида или типа микроба выделенного от больного, носителя или из объектов внешней среды;
2. для обнаружения с помощью диагностикумов антител в сыворотке больных или реконвалесцентов;
3. для выявления с помощью аллергенов перестройки организма, возникающей при некоторых инфекционных заболеваниях.

Все диагностические препараты  представляют собой антигены или  антитела [4].

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Глава 2 ДИАГНОСТИКУМЫ  ДЛЯ РАСПОЗНАВАНИЯ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

2.1 Бактерийные диагностикумы

Для приготовления бактерийных диагностикумов берется агаровая суточная культура определенного вида микроба, находящегося в S-форме. Культуры должны агглютинироваться соответствующими эталонными сыворотками в разведении до титра, определяемого реакцией агглютинации на три креста, а также быть типичными по морфологическим и биохимическим свойствам. Агглютинация с гетерологичными сыворотками в разведении выше 1/8 титра не должна иметь места [1].

Производство диагностикумов, как и всех биологических препаратов, требует стерильных условий. Проверенные 18-20 часовые агаровые культуры или 4 часовые бульонные засевают на матрацы с агаром, приготовленным на мясном, дрожжевом или казеиновом гидролизате. Через 18-20 часов инкубации в термостате при 37 °С из культур делают мазки (с каждого матраца отдельно) для проверки чистоты. Затем культуру смывают физиологическим раствором и полученную взвесь разных штаммов одного вида микробов сливают в одну градуированную бутыль. При массовом производстве применяется котловой метод выращивания бактерий. Диагностикумы готовят из разных количеств штаммов соответствующих микробов [5].

Густоту маточной взвеси определяют по оптическому стандарту. Допускается  получение маточной взвеси, содержащей в 1 мл 10 млрд. микробных тел. Далее маточная взвесь инактивируется. Инактивацию можно проводить различными способами: прогреванием, действием формалина, алкоголя и др. Так, для определения фагоцитарной активности лейкоцитов диагностикумы готовят из микробов, убитых нагреванием, так как фенол или формалин обусловливают отрицательный хемотаксис лейкоцитов.

При изготовлении формалинизированных диагностикумов к 10-миллиардной взвеси добавляют разные количества формалина в зависимости от вида диагностикума. После прибавления формалина бутыль закрывают резиновой пробкой, тщательно встряхивают и помещают в термостат при 37 °С на 18-20 часов или оставляют на 2 суток при комнатной температуре. По истечении этого срока производят посев для определения стерильности, после чего проверяют агглютинабильность маточной взвеси с гомологичными сыворотками. Маточную взвесь разводят формализированным 0,1 % физиологическим раствором до густоты в 3 млрд. по оптическому стандарту. После разведения диагностикума снова производят контроль на стерильность [6].

Для изготовления спиртового диагностикума суточная культура О-штамма смывается с матрацев физиологическим раствором, содержащим 0,5 % карболовой кислоты. Маточная взвесь разводится до густоты 4-х млрд. в 1 мл. Для разведения применяется смесь карболизированного физиологического раствора с 96 % этиловым спиртом, взятым в соотношении 1:2. Спирт предварительно фильтруется через бактериальный фильтр. Содержимое бутылей тщательно перемешивается. Диагностикум помещается на 48 часов в термостат при 37 °С и затем оставляется на трое суток при комнатной температуре. Спиртовые диагностикумы также контролируются на стерильность [4].

Готовый диагностикум проверяют на агглютинабильность гомологичной агглютинирующей сывороткой и для выявления групповых агглютининов - гетерологичными сыворотками. Кроме того, диагностикум испытывают в реакции агглютинации с сыворотками здоровых людей (5 сывороток). Реакцию агглютинации с диагностикумами ставят по классической методике [1].

Готовые диагностикумы разливают в ампулы по 5 или 10 мл; они, как правило, содержат 3 млрд. микробных тел в 1 мл за исключением туляремийного, содержащего 50 млрд. бактерий в 1 мл, и бруцеллезного диагностикума, содержащего 20 млрд. микробных тел в 1 мл. После контроля производят этикетировку препарата. Диагностикумы годны в течение года с момента разведения маточной взвеси.

 Формалинизированные Н-диагностикумы дают крупнохлопчатую Н-агглютинацию, при которой хлопья легко разбиваются, в связи с чем при чтении реакции следует избегать сильного встряхивания пробирок. О-диагностикумы дают мелкозернистую агглютинацию, не разбивающуюся при встряхивании [3].

Используется также Vi-диагностикум, позволяющий обнаружить Vi-антитела в сыворотках больных брюшным тифом и бактерионосителей. Он представляет собой взвесь брюшнотифозных палочек, обезвреженных формалином (0,4 %). Для получения препарата рекомендуются штаммы в V-форме, типичные по всем признакам и не имеющие жгутикового аппарата. Диагностикум содержит 3 млрд. микробных тел в 1 мл взвеси. Специфическая активность его проверяется в реакции агглютинации с эталонной монорецепторной Vi-сывороткой. Срок годности 1 год. В ряде случаев для целей серологической диагностики применяют не корпускулярные диагностикумы, а выделенные из микробных тел антигены.

Микробная клетка представляет собой сложный глюцидо-липоидно-полипептидный комплекс, в который входят как полноценные антигены, так и гаптены. Изготовление полных антигенов проводится по способу Буавена и Мезробеану. Для этой цели берут хорошо изученную чистую культуру определенного вида микробов и производят посев на питательные среды. Через сутки инкубации при 37 °С смыв культуры дважды промывают (при центрифугировании), физиологическим раствором, затем экстрагируют при низкой температуре десятикратным количеством ¼ N раствора трихлоруксусной кислоты. Экстракт нейтрализуют углекислой содой до рН 7,0 и диализуют в течение 2 суток в текучей водопроводной воде и в течение 1 суток – в дистиллированной воде. Диализованный экстракт осаждают четырьмя объемами ацетона, растворяют в дистиллированной воде и вторично осаждают ацетоном. Полученный осадок полного антигена промывают спиртом и эфиром, высушивают и хранят в виде сухого порошка [2].

Антигены из микробных клеток извлекают и другими способами: многократным замораживанием с последующим оттаиванием, кипячением, действием ультразвука, спирта, соляной кислоты и др.

 Бактерийные антигены применяются в реакциях преципитации, пассивной гемагглютинации с диагностическими целями и для изучения антигенного аппарата микробов и их типизации [4].

В настоящее время разработаны  методы приготовления эритроцитарных диагностикумов с длительным сроком годности. Действующим началом их являются извлеченные из тех или иных микроорганизмов антигены, которыми сенсибилизированы эритроциты.

Принцип приготовления эритроцитарных диагностикумов сводится к следующему: дефибринированная кровь человека О (1) группы или барана фильтруется через марлю и трижды отмывается на центрифуге охлажденным физиологическим раствором. После этого производится обработка эритроцитов формалином. Готовят взвесь, содержащую 12,5 % эритроцитов, в нее помещают целофановый мешок с формалином и встряхивают на шюттель-аппарате в течение 16 часов. В первые 2 часа формалин поступает через поры целофана, затем его прокалывают и, наконец, разрывают. Этот прием позволяет получить медленное вначале и постепенно усиливающееся действие формалина на эритроциты. По окончании срока встряхивания эритроциты вновь фильтруют через марлю, отмывают 6 раз десятикратным объемом охлажденного до 4-5 °С физиологического раствора на центрифуге при 2500-3000 об/мин, соединяют с равным объемом стерильного нейтрального физиологического раствора и разливают во флаконы. В таком виде формалинизированные эритроциты можно хранить до года. В дальнейшем, в зависимости от характера антигена, эти эритроциты либо обрабатывают дополнительно таннином, либо соединяют с антигеном без этой обработки [1].