Методы диагностики туберкулеза

Московский государственный университет имени М. В. Ломоносова

Факультет фундаментальной медицины

Кафедра внутренних болезней

 

 

 

 

Реферат на тему:

Методы диагностики туберкулеза

 

 

 

 

 

Выполнила: студентка 603 группы

Ипатова Д.В.

Проверила: к.м.н., доцент

Краснова Т.Н.

 

 

 

 

 

 

 

2014 год

ОГЛАВЛЕНИЕ

 

ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………………………2

КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА…………………………………………………………………………………..2

А. Специфические методы лабораторной диагностики туберкулеза…………………3

1. Бактериологические методы…………………………………………………..3

2. Молекулярно-генетические  методы…………………………………………..4

3. Цитогистологические методы…………………………………………………4

4. Иммунологические методы……………………………………………………4

Б. Неспецифические методы лабораторной диагностики туберкулеза ……………….7

РЕНТГЕНОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА………………………………………………….9

ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………………………………..11

ЛИТЕРАТУРА……………………………………………………………………………………11

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ВВЕДЕНИЕ

 

Туберкулёз — инфекционное заболевание с длительным инкубационным периодом, протекающее со специфическим  поражением легких и других органов.

В соответствии с информацией ВОЗ, около 2 миллиардов людей, треть общего населения Земли, инфицировано. В настоящее время туберкулёзом ежегодно заболевает 9 миллионов человек во всём мире, из них 3 миллиона умирают от его осложнений1.

В связи с  широкой распространенностью, тяжестью течения, а также большим полиморфизмом клинических проявлений  данного заболевания проблемы диагностики (как индивидуальной, так и скрининга) не теряют своей актуальности.

КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ТУБЕРКУЛЕЗА

 

История лабораторной диагностики туберкулеза берет начало с середины XIX века. Первое гистологическое исследование специфической гранулемы было выполнено в 1852 г. выдающимся хирургом Н. И. Пироговым. Он описал гигантские клетки, содержащиеся в туберкулезном бугорке (многоядерные клетки Пирогова-Лангханса). Этиологическую лабораторную диагностику туберкулеза впервые осуществил немецкий бактериолог Роберт Кох в 1882 г., открывший возбудителя этого заболевания.

Исследование кожной чувствительности к микобактериям туберкулеза было предложено австрийским патологом и педиатром Клеманс фон Пирке в 1907 г. Для проведения накожной пробы он использовал туберкулин Коха - препарат, содержащий антигенный материал микобактерии туберкулеза (Р. Кох получил в 1890 г. водно-глицериновую вытяжку туберкулезных культур, названную туберкулином, и предложил использовать ее для лечения туберкулеза).

В настоящее время для лабораторной диагностики туберкулеза применяется целый ряд информативных методов, так как по причине изменчивости возбудителя и патогенетических особенностей инфекционного процесса во многих случаях невозможно получить однозначное лабораторное заключение в результате применения только 1-2 методов.

Все методы лабораторной диагностики туберкулеза можно разделить на специфические (этиологические) и неспецифические.

А. Специфические методы лабораторной диагностики туберкулеза

 

В свою очередь специфические методы по видам исследований можно разделить на несколько групп. Бактериологические и молекулярно-генетические методы являются основным инструментом в лабораторной диагностике туберкулеза, они позволяют определять в организме больного присутствие возбудителя туберкулеза. Если бактериовыделение не удается выявить, а клинически исключить туберкулез не представляется возможным, могут быть использованы цитогистологические методы, с помощью которых можно обнаружить специфические туберкулезные изменения (элементы гранулемы).

С помощью иммунологических методов можно оценить реакцию иммунной системы на микобактериальные антигены и определить уровень специфических антимикобактериальных антител, что в комплексе с результатами других исследований является важной диагностической информацией. Например, при обследовании детей наиболее информативными являются иммунологические методы (реакция Пирке, проба Манту, определение специфических антимикобактериальных антител методом ИФА).

 

Специфические методы лабораторной диагностики туберкулеза делятся на 4 группы:

1. Бактериологические методы:

1. Бактериоскопия

Стандартной методикой является окраска препарата по Цилю-Нильсену карболфуксином с последующей микроскопией при 1000-кратном увеличении. Эта методика должна выполняться в условиях клинических лаборатории, начиная с уровня поликлиник, и входит в поликлинический и клинический минимум обследования пациента, страдающего кашлем с мокротой (3-кратное микроскопическое исследование мокроты на микобактерии туберкулеза). Бактериоскопия мокроты должна проводиться и больным хроническими заболеваниями органов дыхания и мочевыводящей системы, а также работникам неблагополучных по туберкулезу животноводческих хозяйств.

При обнаружении в мазке в одном поле зрения 5 и более микобактерии вероятность получения положительного результата посева материала на питательные среды значительно возрастает.

Метод люминесцентной микроскопии основан на способности липидов микобактерии туберкулеза связывать флюоресцентные красители (аурамин,родамин), которые светятся под воздействием коротких синих и ультрафиолетовых лучей.

При помощи этого метода дополнительно, по сравнению с возможностями обычной бактериоскопии, можно выявить микобактерии туберкулеза в 17% случаев исследования нативных мазков и в 8% случаев исследования мазков из флотационных колец.

Частота выявления микобактерии у больных туберкулезом при микроскопии мокроты составляет, по данным разных авторов, от 48 до 87%, а плевральной жидкости - до 2%. При этом сравнение данных микроскопических исследований с данными культуральных исследований показывает, что доля ложноположительных результатов составляет до 6%. При исследованиях материала из очагов внелегочной локализации чувствительность и специфичность метода микроскопии еще ниже.

2. Посев на питательные среды

Данные культуральных исследований более информативны, чем бактериоскопических методов, но получить ответ о наличии возбудителя туберкулеза можно лишь через несколько недель.

Посев мокроты на классические элективные среды (Левенштайна - Йенсена и др.) входит в перечень методов, выполняемых бактериологическими лабораториями. Рост первых колоний отмечают через 4-8 нед. Использование современных высокоселективных сред позволяет получать культуры в течение 1-2 нед, однако идентификация требует дополнительного времени.

Кроме мокроты материалом как для мазка, так и для посева является аспират желудочного содержимого, взятый натощак рано утром. Однако частота находок составляет 4-5%. В мокроте у этих же больных выявление микобактерии в 6-10 раз чаще.

Современные бактериологические методы выявления микобактерии туберкулеза в исследуемом материале, к сожалению, характеризуются невысокой чувствительностью.

3. Биологический метод

До появления молекулярно-генетических методов биологический метод считался наиболее чувствительным. Однако, в случаях, когда в исследуемом материале содержатся микобактерии, высоко устойчивые к препаратам изоникотиновой кислоты, не всегда удается получить развитие генерализованного туберкулеза, так как такие микобактерии иногда оказываются невирулентными или маловирулентными для морских свинок.

Современные культуральные и молекулярно-генетические методы считаются достаточно информативными, поэтому биологические пробы с заражением морских свинок являются неперспективными.

2. Молекулярно-генетические методы

Применение молекулярно-генетических методов для определения микобактерии в клинических образцах позволяет в короткие сроки осуществлять диагностику туберкулеза. Быстрота определения имеет особое значение в случаях идентификации штаммов микобактерии, отличающихся замедленным ростом. Молекулярно-генетические методы имеют неоспоримое превосходство над культуральными в случаях, когда в образце содержатся нежизнеспособные и/или некультивируемые микобактерии.

Перспективным для применения оказался метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющий проводить идентификацию микобактерии туберкулеза в клинических образцах в течение 48 ч.

Метод ПЦР основан на ферментативной амплификации специфических участков генома микобактерии туберкулеза и дальнейшей детекции и идентификации полученных ампликонов. Аналитическая чувствительность метода составляет от 1 пкг до 5 фг микобактериальной ДНК в образце, что эквивалентно выявлению единичных (1-10) клеток.

Чувствительность метода составляет от 80 до 97%. С помощью метода прямой амплификации рРНК микобактерии туберкулеза выявляют в 96,3% клинических и в 97,7% культуральных образцов. При исследовании 3 образцов от пациента чувствительность метода может достигать 100%.

3. Цитогистологические методы

Главная задача цитогистологических методов в лабораторной диагностике туберкулеза - это обнаружение специфических туберкулезных изменений (элементов гранулемы). В зависимости от локализации специфического процесса по возможности производится пункция пораженного органа или ткани с последующим цитогистологическим исследованием полученного материала. В основном, проводится исследование мокроты и бронхоскопического материала, пунктатов лимфатических узлов, соскобов стенки свища при туберкулезных поражениях различной локализации

4. Иммунологические методы:

1. Туберкулинодиагностика

4.1.1. Проба Манту

Туберкулинодиагностика используется при первичной диагностике туберкулеза и оценке активности процесса, представляет собой определение реакции организма на внутрикожное введение туберкулина. Основным методом диагностики туберкулеза у детей является массовая туберкулинодиагностика, что обеспечивает выявление преимущественно ограниченных форм туберкулеза. Среди всех, впервые взятых на учет, ежегодно не менее 77% больных детей выявляется с помощью туберкулиновых проб. Применение туберкулиновых проб у взрослых в качестве скрининга нецелесообразно, т.к. до 80% взрослого населения инфицировано микобактериями туберкулеза.

Туберкулин - препарат, приготовленный из культуры микобактерий туберкулеза (протеиновая фракция) и обладающий их антигенными свойствами. В инфицированном организме при нормальной (или повышенной) иммунологической реактивности в ответ на введение антигенов микобактерий туберкулеза развивается реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)5.

 

Виды туберкулина

 

Aльттуберкулин Коха (AТК), или старый туберкулин Коха, представляет  собой автоклавированный фильтрат 6-9 недельной культуры M.tuberculosis.

На смену AТК пришли очищенные стандартные препараты туберкулина Зейберта - РРD-3 (Purified Protein Derivative - очищенный белковый дериват) и М. А. Линниковой - РРD-Л. Названные препараты освобождены от белковых составляющих питательной среды, что увеличивает специфичность реакции организма на туберкулин. На практике применяют стандартные растворы РРD-Л, содержащие 2 ТЕ (для массовых обследований).

 

Метод туберкулинодиагностики

 

Принятым методом проведения туберкулинодиагностики для массового обследования населения и в практике противотуберкулезных учреждений в России является внутрикожная проба Манту.

 

Порядок проведения пробы Манту:

-обрабатывают кожу средней трети внутренней поверхности предплечья ватным тампоном с 70% спиртом,

-в туберкулиновый (1 мл) шприц набирают 0,2 мл стандартного раствора РРD-Л,

-через инъекционную иглу в вертикальном положении из шприца выпускают пузырьки воздуха с 0,1 мл РРD-Л,

-вводят в кожу иглу срезом вверх, при этом положение шприца должно быть максимально параллельным поверхности предплечья,

-место инъекции повторно спиртом не обрабатывают (РРD-Л содержит антисептик).

Учет реакции - наличие папулы и гиперемии: измерение диаметра папулы (наибольшего в случае появления клеточного инфильтрата в форме неправильном окружности) проводят прозрачной линейкой через 48-72 ч.

Результат внутрикожной туберкулиновой пробы оценивается как отрицательный (анергическая реакция - папула отсутствует, возможна гиперемия в месте инъекции), либо как положительный, который в свою очередь оценивается как нормергическая ( папула диаметром от 5 мм до 17 мм у детей и до 21 мм у взрослых) или гиперергическая реакция (папула диаметром более 17 мм у детей и 21 мм у взрослых; везикуло-некротическне изменения и/или регионарный лимфангит и лимфаденит независимо от размеров папулы).

Отрицательная реакция (туберкулиновая анергия), как правило, свидетельствует об отсутствии иммунитета к микобактериям туберкулеза, она наблюдается у людей, не контактировавших с М. tuberculosis, и у больных с тяжелой прогрессирующей формой туберкулеза, иммунитет которых не сформировался или подавлен в условиях ослабленного, истощенного организма на фоне злокачественных новообразований, приема иммунодепрессантов, инфекционных и других заболеваний и состояний, приводящих к иммунодефициту. Вирусные гепатиты, корь, коклюш, скарлатина, малярия, саркоидоз, микседема, белковое голодание, прием цитостатиков и глюкокортикондов вызывают у больных туберкулезом снижение или полное отсутствие реактивности к туберкулину. В ряде случаев в результате успешно проводимой терапии туберкулеза и сопутствующего заболевания или отмены иммунодепрессантов реактивность у таких больных восстанавливается.