Использование лабораторных животных в лабораторной диагностике особо опасных вирусных инфекций

Белым мышам и крысам дают овес, пшеницу, пшено, ячмень, льняное, конопляное, подсолнечное семя. Во избежание ожирения животных семена масличных культур вводят в рацион в небольших количествах. Суточная норма концентратов: 3-5 г для мышей и 12-15 г для крыс. В корм идут также пшеничный хлеб (кислый ржаной хлеб может вызвать поносы), сухари, каши (овсяная, перловая, пшенная), молодняку – манная каша на молоке. Кроме того, в рацион входят морковь, яблоки – антоновка (последние особенно необходимы при желудочно-кишечных заболеваниях) и зеленые корма (салат, шпинат, морковная ботва).

Ковалевский рекомендует вводить в рацион крысам вареную свеклу и картофельное пюре. Суточная норма хлеба и круп для мышей 3-3,5 г, для крыс – 15-20 г, сочных кормов-соответственно 0,5-1 и 2-3 г, зеленых кормов, вымытых кипяченой водой и нарубленных, - 2-3 и 4-6 г, молоко натуральное (пастеризованное или кипяченное в течение 4-5 минут) или ацидофильное – в количестве 4-5 г мышам и 6-8 г крысам (часть молока используется для приготовления каш).

Кроме того, ежедневно все животные должны получать поваренную соль: мыши – по 0,01 г, крысы – по 0,07 г (в кашу), свинки – 0,1 г, кролики – по 0,5 г (в виде раствора с концентратами) и костяную муку, примерно в таких же количествах. В каждую клетку для мышей и крыс кладут кусок 1-5 г) мела из расчета на 3-4 дня. Для обогащения кормов витаминами в осенне-зимний период дают рыбий жир, сухие облученные дрожжи, томатный сок, а свинкам, кроме того, сок черной смородины, настойку шиповника (витамин С) и т.п.

Суточная норма рыбьего жира: 0,5 г кроликам, 0,3 г свинкам, 0,2 г крысам и 0,1 г мышам (с концентратами или на хлебе). В качестве подстилки для кроликов применяют солому, торф; для мышей и крыс – мелкое сено.

Кормят и поят животных два раза, а кормящих самок – три раза в сутки, в точно установленное время. Кормушки лучше всего глиняные (из обожженной глины), достаточного веса во избежание перевертывания их животными и удобные для чистки (мойки). Кормушки ежедневно очищают и моют горячей водой. В каждой клетке должно быть по две кормушки: для концентратов и для пойла. Корма задают только свежие.

 

2.5 Заболевания лабораторных животных

Наиболее распространенными заразными заболеваниями лабораторных животных являются пастереллез, паратиф (сальмонеллез), туляремия, инфекционная пневмония, псевдотуберкулез и кокцидиоз.

Пастереллез. Заболевают кролики, морские свинки, мыши и крысы. Свинки болеют чаще в острой форме, а остальные виды — преимущественно в подострой или хронической форме.

Клиника при острой форме: слабость, повышение температуры, нервные явления, понос. Смерть обычно через 12-48 часов. В скрытие: кровоизлияния (часто точечные) во всех паренхиматозных органах и на слизистой оболочке гортани и трахеи.

При подострой и хронической форме: учащенное, затрудненное, свистящее дыхание, насморк, кашель, чихание. Болезнь затягивается до двух и более недель. Вскрытие: катаральный или гнойно-катаральный ринит, бронхопневмония (иногда крупозная), серозно-фибринозный плеврит.

Диагноз подтверждается бактериологическим исследованием.

Профилактика: выделение бактерионосителей и проведение санитарных мероприятий.

Паратиф поражает чаще всего крыс и мышей, но возможна передача инфекции морским свинкам и кроликам. Главные разносчики инфекции—животные-бактерионосители. Заболевание протекает в виде септицемии (острая форма) с клиникой поноса (фекальные массы желтовато-зеленоватого цвета), отказа от корма и общего угнетения. Смерть наступает обычно через 24-48 часов. При хроническом течении клинические признаки выражены неясно: апатия, уменьшение аппетита, взъерошенность шерсти, понос, у самок часто аборты.

Картина вскрытия при острой форме – у \величение селезенки и мезентериальных лимфатических узлов; слизистая кишечника воспалена, с наличием кровоизлияний и мелких просовидных узелков; при хронической форме изменения те же, содержимое кишечника слизистое, пенистое, желтоватого цвета. Диагноз устанавливают бактериологическим исследованием.

Профилактика: выявление бактерионосителей путем реакции агглютинации (титр 1:200 и выше считается положительной реакцией); карантин в течение 20 суток для вновь поступающих животных, соблюдение зоогигиенических и ветеринарно-санитарных правил.

Туляремия. Заболевают крысы, мыши, реже кролики и морские свинки. При вскрытии обнаруживается увеличение лимфатических желез и селезенки с образованием некротических узелков. Такие же изменения находят в печени и в легких, а также подкожные гнойники (особенно у кроликов). Для постановки диагноза необходимо бактериологическое исследование.

Профилактика: приобретение животных из заведомо благополучных хозяйств, обязательный карантин при поступлении животных, периодические ветеринарные осмотры. Больных животных немедленно убивают. Дезинфекция.

Инфекционная пневмония чаще всего поражает морских свинок. Предрасполагающие факторы: скученность, простуда, сырость помещений, отсутствие вентиляции, недостаточность питания, авитаминоз (А и С), бациллоносительство.

Клиника: истечение из носовых отверстий, кашель, затрудненное дыхание, хрипы, лихорадка, апатия, истощение, у самок часто аборты. Патолого-анатомическая картина: очаговая гепатизация легких («мраморность»), в грудной полости значительное количество мутного, с примесью фибрина, экссудата, воспаление верхних дыхательных путей и плевры, увеличение селезенки. При постановке диагноза следует иметь в виду также пневмонии инвазионного и грибкового происхождения.

Лечение: подкожно – глюкоза (40%) с 4 мг аскорбиновой кислоты в дозе 0,5-1,5 г в течение 5-6 дней. Применение антибиотиков, если возможно, и сульфаниламидных препаратов.

Профилактика: общие зоогигиенические и ветеринарно-санитарные мероприятия, изоляция больных, дезинфекция.

Псевдотуберкулез. Чаще заболевают кролики и морские свинки. Возбудитель – палочка псевдотуберкулеза грызунов.

Клиника не характерна: угнетенное состояние, отказ от корма, постепенное исхудание, иногда опухание лимфатических узлов, поносы, параличи. Продолжительность заболевания от нескольких дней до 5-6 недель; смерть от истощения.

Вскрытие: поражение паренхиматозных органов, кишечника, иногда мышц, в виде мелких узелков, имеющих лучистую форму серо-белого цвета. Увеличение лимфатических узлов, преимущественно, брюшной полости. Диагноз ставят на основании патолого-анатомической картины и результатов бактериологического исследования. Меры борьбы: убой больных животных, карантинирование подозреваемых в заражении, дезинфекция.

Кокцидиоз. Чаще всего поражаются кролики. Различают кишечную, печеночную и смешанную формы. Заболевание протекает остро и хронически (последнее чаще у взрослых кроликов, острое – у молодняка). Заражение происходит через корм и воду, загрязненную фекалиями, содержащими зрелые ооцисты кокцидий.

Кролики – постоянные носители и выделители кокцидий, которые, выделяясь в виде ооцист с калом, через 2-3 дня созревают и становятся способными к заражению животных.

Клиника: при острой форме – истощение, вздутие живота, понос, кроликов – потеря аппетита, прогрессирующее исхудание, периодическое появление жидкого кала.

При вскрытии – катар слизистой кишечника или наличие в печени белых узелков величиной от булавочной головки до горошины.

Диагноз – на основании микроскопического обнаружения ооцист кокцидий.

Меры борьбы и профилактика: лечение, создание благоприятных условий содержания животных, сухость в клетках, полноценное кормление, ежедневная чистка клеток, инвентаря, периодическая их дезинфекция, биотермическое обезвреживание навоза.

Лабораторные животные могут поражаться спирохетозом (кролики), септикопиэмией, энтеротоксемией, листериозом, рядом глистных инвазий, грибками и накожными паразитами (чесотка, парша, стригущий лишай и др.).

 

3. Подготовка животных к заражению

Перед опытом животное клеймят, взвешивают, определяют, если нужно, его пол, возраст и измеряют температуру тела.

Клеймение кроликов и морских свинок производят при помощи готовых металлических бирок с номерами или наложением тавра татуировочными щипцами.

Металлические номерки имеют заостренные концы, которыми и прокалывают ушную раковину животных с внутренней стороны; на выпуклой стороне уха концы номерков загибаются. Номерки можно приготовить своими силами из нарезанных кусочков мягкой жести.

Номер надписывают жидкостью, состоящей из смеси 5 частей насыщенного раствора медного купороса и 1 части крепкой соляной кислоты. Пишут на металле заостренной палочкой и тотчас же надпись высушивают фильтровальной бумагой.

Перед клеймением татуировочными щипцами ухо внутренней стороны протирают спиртом, накалывают щипцами соответствующий номер, а затем место прокола втирают тушь или спиртовой раствор копоти. В крайних случаях, при острых опытах, можно метить животных путем выстригания шерсти на различных участках тела.

Мышей и крыс метят надрезом ушей или же окрашиванием различных частей тела животного насыщенным раствором пикриновой кислоты (долго сохраняется) или 0,5% спиртовыми растворами анилиновых красок. Этих лабораторных животных можно нумеровать непосредственно во время опыта, пользуясь для этой цели красками, дающими стойкое окрашивание, например насыщенным спиртовым раствором фуксина, насыщенным водным или спиртовым раствором пикриновой кислоты или насыщенным водным раствором перманганата калия. У подопытных животных окрашивают разные части тела. Одной краской, как правило, метят первые 9 номеров. Сочетание двух различных красок позволяет пометить до 100 животных.

Ниже в качестве примера приводится одна из схем нумерации. Метки пикриновой кислоты соответствуют единицам, метки фуксином обозначают десятки. Окрашенные таким образом животные в зависимости от места расположения пятна и его окраски будут иметь следующие условные номера:

левая передняя лапа - №1, левый бок - №2, левая задняя лапа - №3, голова - №4, спина - №5, область крестца - №6, правая передняя лапа - №7, правый бок - №8, правая задняя лапа - №9. Нанесение фуксина на те же места (вместо пикриновой кислоты) будет означать соответственно: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90.

При комбинации двух красок может быть получен любой двузначный номер, например: лапа левая передняя (фуксин) + лапа левая передняя (пикриновая кислота) - №11, лапа правая задняя (фуксин) + лапа левая задняя (пикриновая кислота) - №93.

У птиц металлические номера (браслеты) надевают на одну из ножек.

Взвешивание животных производят, смотря по их величине, или в ящике на обычных столовых весах (Беранже), или на весах для взвешивания новорожденных детей (по Метелкину). Мелких животных, например, мышей, взвешивают на ручных (аптекарских) весах с роговыми чашками.

 

3.1 Определение пола

Общие признаки: самцы крупнее самок по величине и грубее по конституции; передняя часть туловища самцов развита сильнее задней.

Для определения пола у кроликов захватывают их левой рукой за кожу в области шеи вместе с ушами, а другой рукой, оттянув хвост, натягивают свободными пальцами кожу у полового отверстия: у самок обнаруживается щель, сужающаяся к спине, а у самцов открывается круглое отверстие с выступающим из него половым членом. Таким же образом определяют пол у морских свинок. У самцов мышей и крыс расстояние между заднепроходным отверстием и половым значительно длиннее, чем у самок; кроме того, у последних хорошо заметны грудные соски.

Определение возраста у лабораторных животных при отсутствии соответствующих записей довольно трудно. У старых животных редкий, без глянца шерстный покров, длинные когти, тусклый взгляд и темный напет на зубах. Приблизительное определение возраста у нормально упитанных, здоровых животных возможно по их живому весу.

Измерение температуры тела у лабораторных животных производится обычным максимальным термометром перед постановкой опыта, а иногда и во время нахождения животного под опытом. Колебания нормальной температуры тела у животных зависят от многих причин: глубины введения термометра в прямую кишку, времени года, суток, пищевого режима и т. д. Нормальной глубиной для введения термометра принято считать 3,5 см. (удобно надевать на определенной высоте термометра резиновое колечко). Установлено, что на глубине 3 см температура тела у морских свинок равна 37,6°, на глубине 4 см 38,3°, а при 7,5 см 39,4°. Для установления нормы рекомендуют предварительное измерение температуры у животных до постановки опыта. Измерение температуры тела у животного следует производить постоянно в одни и те же часы, одним термометром, вводя его на одну и ту же глубину.

Термометр перед введением в прямую кишку дезинфицируется спиртом, вытирается досуха, а затем смазывается (вводимый его конец) вазелином.

Морских свинок для измерения температуры помещают в горизонтальное положение на ладонь согнутой в локтевом сгибе левой руки, нажимая большим пальцем на паховую область. Пальцем другой руки производят поглаживание (несколько раз) по шерсти от шеи до симфиза. Спустя несколько секунд морская свинка остается лежать совершенно неподвижно. Термометр вводят в прямую кишку сначала почти вертикально, а затем параллельно линией оси тела животного. Замечают время и следят за столбиком ртути.

Кроликов помещают на колени, охватывают левой рукой с упором головы животного в локтевой сгиб и той же рукой захватывают и поднимают хвост; правой рукой вводят термометр. Или же кролика завертывают в кусок какого-либо плотного материала («пеленают»), подтягивая конечности под живот.

 

4.Подготовка материала  и инструментов для заражения

Материалом для заражения лабораторных животных в повседневной практике диагностических лабораторий обычно служат эмульсии, приготовленные из различных органов и тканей присланного для исследования материала. Кроме того, материалом для заражения могут быть различные истечения, мокрота, кровь, отделения ран, язв и т. п., полученные от больных. Эмульсии из органов (тканей) обычно готовятся на физиологическом растворе, примерно в соотношении 1:10. Для этой цели берутся небольшие кусочки из наиболее пораженных участков и растираются с физиологическим раствором в стерильной ступке до получения равномерной взвеси. Последняя вводится непосредственно животным или же предварительно фильтруется в простерилизованную посуду через марлю (вату). При наличии трудно растираемого материала добавляют прокаленный песок, и после получения эмульсии фильтруют ее через марлю.