Методы выделения чистых культур и определение (идентификация) вида бактерий

 

Для выявления сахаролитических ферментов исследуемую культуру засеивают в среду Гисса, которая содержит 5 моноуглеводов: глюкозу, лактозу, маннит, мальтозу, сахарозу. Сахара и спирты, используемые для

сред Гисса, должны быть химически чистыми.

Результат: Цвет среды изменился, значит есть фермент, под действием которого расщепляется углевод - рН среды меняется, а индикатор изменяет свой цвет.

                                                           7

Углевод	Сахаролитическая	активность
	Кислота	газ
Лактоза	+	-
Глюкоза	+	-
Манит	+/-	-
Сахароза	+/-	-

 

Изучение протеолитических свойств микробов.

Некоторые микроорганизмы продуцируют  и выделяют во внешнюю среду протеолитические ферменты - протеазы, которые расщепляют белки до промежуточных продуктов (пептоны, альбумозы, полипептиды, аминокислоты) или до продуктов конечного распада белка (индол, сероводород, аммиак и др.)

Для выявления протеолитических ферментов исследуемую культуру засеивают в питательную среду, содержащий тот или иной белок (МПЖ, молоко, свернутую кровяную сыворотку).

Протеолитическая активность микробов на желатине определяется по разжижению столбика желатина под действием фермента желатиназы разжижение желатина может быть послойное, воронкообразное, в виде чулка.

В молоке микробы, выделяющие протеолитические ферменты, через несколько  дней вызывают свертывание и пептонизацию молока. Пептонизация сопровождается отделением молочной сыворотки, растворением сгустка казеина под действием фермента казеиназы и выпадением осадка.

Для идентификации видов  существенное значение имеет выявление  способности микробов гидролизовать белок до продуктов глубокого распада: индола, сероводорода, аммиака.

Индол (орто-бензопирил) образуется при расщеплении ферментом триптофаназой сложной гетероциклической аминокислоты триптофана.

Источниками образования  сероводорода могут быть различные  соединения среды: органические (цистеин, цистин, метионин) и неорганические (сульфиты, сульфаты, тиосульфата). Для определения образования сероводорода делают посев в пробирку с МПБ, в которую под пробку над средой помещают кусочек стерильной фильтровальной бумаги, пропитанной раствором уксуснокислого свинца. Если исследуемая культура при разложении белка выделяет сероводород, то образуется сульфид свинца, в результате чего появляется темно-бурое окрашивание фильтровальной бумажки.

Присутствие аммиака определяют по изменению цвета красной лакмусовой

бумажки (синеет), а также  при помощи реактива Несслера.

Результат: Сделав посев  в МПБ, дополнительно поместив под  пробирку кусочек стерильной фильтровальной бумаги, пропитанной раствором 

                                                              8

уксуснокислого свинца, наблюдается  выделение сероводорода, а вследствие этого наблюдается потемнение бумажки, т.е. сероводород является продуктом  жизнедеятельности этих микроорганизмов.

4. Определение  видов бактерий

Выполнив посев и изучив морфологические, культуральные и биохимические свойства данного вида микроорганизмов, проанализировав их, я сделал вывод, что наиболее подходят под описание кокки рода Staphilococcus, вида Saprophyticus.

Характеристика вида

Кокки, располагаются группами в форме виноградной грозди, грамположительные, каталазоположительные, факультативные анаэробы, хорошо размножаются на простых питательных средах и быстро размножаются на средах с большой концентрацией NaCI (ЖСА), образуя на плотных питательных средах семества с белым, желтым или золотистым пигментом. Обладают хорошо выраженными протеолитическими свойствами: разжижают желатин, свертывают и пептонизируют молоко, вызывают гемолиз, выделяют аммиак, сероводород.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                                                         

 

                                                      9

                          Список используемой литературы.

 

1. П.П.Степаненко "руководство к лабораторным работам по    микробиологии». Москва 2005 г.

2. П.П.Степаненко «Микробиология и иммунология с/х животных".  Учебник для студентов вузов, 2003 г.

3. «Определитель бактерий»  Бержи.

4. П.П. Степаненко, Р.П. Корнильева «Микробиология вирусология. Методы выделения чистых культур и идентификации вида бактерий» Москва 2002 г.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                                                       10