Основные принципы систематики и классификации микроорганизмов

По направленности действия иммунные сыворотки подразде­ляют на антибактериальные, антитоксические, антивирусные. По достижении необходимого уровня антител у животного берут кровь обычно в объеме 1 % массы животного или осуществляют тотальное обескровливание. Полученную кровь сепарируют для получения сыворотки, которую стерилизуют фильтрованием и консервируют 0,25.-0,5% фенола, 0,01...0,03% тиомерсала или другими веществами.

Контроль сывороточных препаратов. Включает в себя проверку на стерильность, безвредность и спе­цифическую активность.

Стерильность препаратов проверяют посевом на питательные среды (МПА, МПБ, МППБ, агар Сабуро или Чапека).

Безвредность каждой серии обычно контролируют введением сыворотки морским свинкам. Специфическую активность сыво­ротки проверяют в зависимости от направленности ее действия.

Определение превентивных (защитных) свойств на естественно-восприимчивых или лабораторных животных заключается в том, что животным вводят подкожно, внутримышечно или внутрибрюшинно сыворотку, а через 20...24ч иммунизированным и контрольным животным вводят подтитрованную дозу гомологичного вирулентного микроорганизма. Иммунизированные жи­вотные должны остаться здоровыми при гибели или характерном переболевании контрольных.

Активность антитоксических и ряда противовирусных сыво­роток определяют в реакциях нейтрализации. Количество анти­тел в сыворотках устанавливают при помощи различных сероло­гических реакций (РСК, РА, РИГА, РДП и т.д.).

Диагностические антитела. Принцип получения диагности­ческих иммунных сывороток такой же, как и лечебно-профилак­тических. Диагностические сыворотки должны характеризовать­ся не только высокой активностью в серологических реакциях, но и специфичностью. С помощью диагностических сывороток обнаруживают микробные антигены в тканевых материалах и идентифицируют выделенные микроорганизмы. В зависимости от целевого назначения можно говорить о видовых сыворотках (предназначенных для идентификации микроорганизмов на уровне вида), групповых (идентификация на уровне серологичес­кой группы), серовариантных (на уровне серовара). Иммунные сыворотки готовят для использования в различных серологических реакциях (РА, РП, РДП, РСК, РИГА, РН). При получении антител, меченных флуорохромом и ферментами, из иммунных сывороток предварительно выделяют и очищают иммуноглобу­ли новую фракцию. В целом диагностические сыворотки (антительные диагностику мы) контролируют на стерильность, активность и специфичность.

4. Ознакомьтесь и опишите работу ветеринарной лаборатории,

обслуживающей ваш участок. Примите участие в лабораторной

диагностике инфекционного заболевания. Опишите подробно

порядок этого исследования и его результаты.

В ветеринарной лаборатории действует 14 отделов: бактериологический, серологический, вирусологический, паразитологический, патоморфологический, химико-токсикологический, биохимический, радиологический, противобруцеллезная экспедиция, отдел по оценке эпизоотического состояния, отдел по диагностике и экспертизе, лептоспирозный, ихтиопатологический, отдел стандартизации и метрологии.

Все исследования проводятся по определенным ГОСТам или методическим указаниям.

Специалисты отделов лаборатории осуществляют диагностику инфекционных и паразитарных болезней животных, птиц, пушных зверей, рыб и пчел, выявляют нарушения обмена веществ в их организме, помогая тем самым специалистам хозяйств, фермерам, перерабатывающим предприятиям успешно осуществлять лечебно-профилактические мероприятия. В том числе, лаборатория проводит исследования кормов, что особенно актуально весной.

Ежегодно проводится вакцинация животных от самых распространенных и опасных болезней согласно разработанным планам.

Перед тем как войти в отдел или другое производственное помещение лаборатории, работник обязан надеть специальную одежду (халат, медицинский колпак ли белую косынку), а при входе в бактериологический н вирусологический отделы, кроме того, специальную обувь.

Верхнюю одежду и обувь оставляют в специально отведенном месте.

Работникам лаборатории не разрешается:

выходить за пределы лаборатории в спецодежде и спецобуви;

надевать верхнюю одежду на халат;

вносить в производственные помещения лаборатории посторонние вещи;

курить, принимать пищу в производственных помещениях и хранить в них продукты питания.

За каждым сотрудником бактериологического, вирусологического, серологического и других отделов закрепляют определенное рабочее место.

Все сотрудники обязаны всегда содержать свои рабочие места в строгом

порядке и чистоте.

При работе с патологическим материалом, патогенными культурами бактерий и вирусов, а также с ядовитыми веществами следует избегать касаться руками лица и пользоваться носовым платком.

Работать с патологическим материалом необходимо в резиновых перчатках пользоваться при этом инструментами (пинцетами, корнцангами, ножницами и др.). Прикасаться к исследуемому материалу непосредственно руками запрещается.

По окончании работы с патологическим и другим исследуемым материалом (зараженным или подозреваемым в заражении) рабочее место, аппаратуру, инструменты, пробирки, стекла, резиновые перчатки и другие предметы обязательно обрабатывают соответствующим дезинфицирующим раствором. Остатки (неизрасходованного) инфицированного материала (культуры) термически обеззараживают.

Руки дезинфицируют одним из рекомендуемых для этой цели растворов, потом тщательно моют теплой водой с мылом.

Помещения лаборатории ежедневно убирают влажным способом, пыль с поверхности столов и других предметов удаляют тряпкой, увлажненной дезинфицирующим раствором.

Нельзя допускать появления в лаборатории мух, других насекомых и

грызунов. На форточки окон натягивают марлевые или металлические сетка.

Хозяйственно-ремонтные работы в отделах разрешается выполнять рабочим только в присутствии сотрудника лаборатории,

При работе с центрифугой не следует допускать:

а) большего числа оборотов, чем то, на которое она рассчитана;

б) резкого (внезапного) ее торможения;

в) неравномерной нагрузки;

г) попытки притрагиваться к ней с момента включения и до полной остановки вращения.

Туляремия. Острая инфекционная болезнь. У сельскохозяйственных животных обычно протекает в септической форме. Характеризуется увеличением лимфатических узлов, симптомами поражения нервной системы, у крупного рогатого скота может проявляться маститами, у лошадей — абортами. Из сельскохо­зяйственных животных к возбудителю туляремии наиболее чув­ствительны поросята, ягнята, из диких животных — грызуны. Восприимчив человек.

Возбудитель туляремии — бактерия Francisella tularensis (принадлежит к роду Francisella). Подразделяют на два биовара: F. tularensis sb. tularensis и F. tularensis sb. palaearctica. Для вида F. novtcida характерна незначительная вирулентность.

Лабораторная диагностика туляремии основана на результатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование включает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале методом световой микроскопии, выделение чистой культуры методом биопробы и посевом на питательные среды; идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментатив­ным, серологическим свойствам.

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики в лабораторию направляют мочу, фекалии, абортированный плод; для посмертной — печень, почки, селезенку, увеличенные лимфатические узлы; трупы мелких животных, грызунов —целиком. При необходимости материал консервируют глицерином.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки-отпе­чатки окрашивают по Граму и Романовскому — Гимзе. F. tularensis — мелкая [(0,3...0,7) х (0,2...0,4) мкмj грамотрицательная палочковидная бактерия, преимущественно в форме кокко-бактерии. Красители воспринимает плохо, без жгутиков, спор не образует, но формирует капсулу (рис. 101). Из-за мелких размеров возбудителя его микроскопическое обнаружение затруднительно.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбудитель туляремии — строгий аэроб, не растет на общепринятых средах, температурный оптимум 36...37 "С, рН 6,7...7,4. Исследуемый ма­териал высевают на среду Френсиса, кровяную среду Емельяновой или желточную Мак—Коя (см. тему 7).

Среда Френсиса: к МПА (рН 7,3) добавляют 0,1 % цистина. 1 % глюкозы, кипятят несколько минут, охлаждают до 500С, добавляют 10% дефибринированной стерильной крови кролика. Среда Емельяновой: в рыбно-дрожжевой агар вносят 0,1 % цистина, 1 % глюкозы, агар охлаждают до 45 "С и добавляют 10 % стерильной дефибринированной крови.

Посевы культивируют 24...48 ч. Возбудитель формирует мелкие, круглые, выпуклые, с ров­ными краями, гладкой блестя­щей поверхностью, беловатые колонии. Из подозрительных колоний готовят мазки, окрашивают, микроскопируют. В препаратах из культуры в отличие от препаратов из нативного материала клетки возбудителя в основном не кокковидной, а палочковидной формы.

У культур с типичными для F. tularensis культурально-морфологическим и  признаками исследуют ферментативные свойства

Биопроба. Выделить культуру F. tularensis посевом на питательные среды удается не всегда. Более эффективен метод заражения белых мышей или морских свинок тканевой суспензией подкожно или внутрибрюшинно по 0,5 мл. Практикуют проведение 2...3 «слепых» пассажей на чувствительных лабораторных животных. Зараженные животные погибают на 3...5-е сутки, иногда позднее (8... 12-е сутки). У павших животных обнаруживают в паренхима­тозных органах некротические очажки. Из органов путем посева на питательные среды выделяют культуру возбудителя.

По данным бактериологических исследований возбудителя туляремии - бактерия Francisella tularensis не была выявлена.

Список использованной литературы:

1. Практикум по ветеринарной микробиологии / Т.С. Костенко и др. – М.: Колос, 2001

2.      Ветеринарная микробиология и иммунология / Н. А. Радчук, Г.В. Дунаев, Н.М. Колычев – М.: Агропромиздат, 1991.

3.      Ветеринарная микробиология / П.А. Емельяненко – М.: Колос, 1982.

4.      Ветеринарная иммунология / У.Д. Герберт – М.: Колос, 1974.

5.      Инфекционные болезни животных / Д.Ф. Осидзе – М.: Агропромиздат, 1987.

6.      Структура и функции антител. – М.: Мир, 1983.