Ветеринарная микробиология и иммунология

После изучения морфологии и культуральных  свойств у выделенных бактерий исследуют ферментативную активность.

Биопроба. Трепонемы хорошо размножаются в организме кролика и накапливаются в тестикулах. Фильтрат материала от больных свиней вводят кроликам внутрибрюшинно в дозе 5-7 мл. Через 7-10 дней берут пунктат и микроскопируют. При обнаружении трепонем кроликов убивают и подвергают исследованию (микроскопия, выделение культур).

Серологическая и аллергическая диагностики не применяются.

 

Иммунитет

У переболевших дизентерией свиней иммунитет не формируется. Обнаруживают лишь сывороточные антитела к Tr. hyodysenteria и некоторую степень резистентности  к реинфекции.

Биопрепараты для специфической профилактики и терапии не разработаны.

 

6. Ознакомьтесь и опишите работу ветеринарной лаборатории, обслуживающей ваш участок. Примите участие в лабораторной диагностике инфекционного заболевания. Опишите подробно порядок этого исследования и его результаты.

 

Характеристика Киевской государственной  городской

лаборатории ветеринарной медицины.

 

Киевская городская лаборатория  ветеринарной медицины входит в состав Объединения ветеринарной медицины города Киева, как самостоятельная структурная единица.

Лаборатория состоит из четырех  отделов:

1. Диагностический отдел, в котором проводится диагностика инфекционных, паразитарных болезней, лабораторные исследования крови и мочи, микологические посевы соскобов с животных, проводятся рассечения и принятие патологического материала на исследование.
2. Отдел организации производства ветеринарно-санитарной экспертизы, биохимии и метрологии, в котором проводится прием образцов на исследование  в другие отделы и проведения ветеринарно-санитарной экспертизы.
3. Бактериологический отдел– в котором проводятся определения патологических микроорганизмов и их идентификация, количественное определение остаточных количеств антибиотиков, в сырье животного происхождения и пищевой продукции, выдача экспертных выводов относительно пригодности сырья животного и растительного происхождения для производства пищевой продукции, или последующей реализации уже готовой продукции и полуфабрикатов.
4. Отдел химико-токсикологии радиологии, в котором проводятся исследования пищевой продукции и сырья животного и растительного происхождения на содержимое токсикантів и радионуклидов.

 

Киевская городская государственная  лаборатория ветеринарной медицины (КМДЛВМ) аккредитована на техническую  компетентность и независимость  в проведении метрологических  работ  в полном объеме. В настоящее время действующая система сертификации «УКРСЕПРО» не признается за рубежом (за исключением некоторых стран СНГ). Внедрение в Украине на смену ей нового международного стандарта ДСТУ ISO/IEC 17025 с требованиями к испытательным лабораториям положило начало поэтапному подходу к подготовке лаборатории к аккредитации в Национальном агентстве.

В этой связи перед лабораторией появилось задание чрезвычайной ответственности: уже в текущем году выполнить значительный объем работ относительно перевода радиологического, химико-токсикологического, микологического, бактериологического отделов и отдела ветеринарно-санитарной экспертизы к функционированию в соответствии с немецкой системой DAP согласно требованиям DIHEN ISO/IEC 17025:2000. Подготовительные работы к аккредитации такого уровня очень затратные. Их выполнение должно вестись планомерно и поэтапно при четком соблюдении всех требований с учетом финансовых возможностей. На данный момент в системе DAP  уже аккредитованы отдел хіміко-токсикології и радиологии и отдел приема проб на исследование.

Основой системы качества проведения исследований отдела химико-токсикологии и радиологии КМДЛВМ является установка из качества разработанная согласно требованиям „Правил полномочия и аттестации в государственной метрологической системе”, которые утверждены приказом №71 от 29.03.2005 Держспоживстандарту Украины и зарегистрированные в Министерстве юстиции Украины за № 92/10672 от 13.04.2005 года  и ДСТУ Иso/iec 17025-2001 „Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий” и является обязательными документами для всех работников Киевской городской государственной лаборатории ветеринарной медицины.

Настоящие документы заключают  в себе организационно методические и административные процедуры и  методы из организации и проведения измерений (исследований) та ответственность должностных лиц за качество и достоверность результатов проведенных исследований.

Функционирование системы  качества обеспечивается:

• организационной структурой КМДЛВМ;
• материально-техническими      ресурсами      и      испытательным оборудованием, средствами измерительной техники (ЗВТ), помещениями;
• нормативной документацией, которая регламетує требования к качеству продукции и методов ее испытаний (измерений) и анализов;
• энергетическими    ресурсами,    необходимыми    для    проведения испытаний;
• персоналом, компетентным в вопросах организации и проведения измерений, анализов;
• системой повышения квалификации работников КМДЛВМ.

Ответственность за организацию и  проведение измерений (исследований), а также за обеспечение функционирования системы качества полагается на ответственного за метрологическое состояние в КМДЛВМ.

Ответственность за обеспечение  качества измерений (исследований) возложена  на персонал КМДЛВМ согласно своих  должностных инструкций.

КМДЛВМ предназначена  для осуществления ветеринарно-санитарного контроля продукции животного и растительного происхождения согласно Отрасли аттестации.

Объективность и своевременность  выполнения исследований (экспертизы) обеспечивает система контроля качества и система мероприятий из обеспечения  качества с учетом факторов, которые могут влиять на достоверность и результаты исследований.

Политику в отрасли  качества устанавливают как главное направление КМДЛВМ. Она определяет желаемые результаты и помогает использовать ресурсы лаборатории для достижения этих результатов.

Политику в отрасли качества формирует и реализует директор лаборатории и применяет как средство для улучшения деятельности лаборатории.

Для достижения цели политики в отрасли  качества используются такие ресурсы:

• организационные, что обеспечивают проведение измерений на высоком уровне за счет четкого распределения обязанностей и контроля за качеством работ, которые выполняются;
• материальные ресурсы, то есть помещение, ЗВТ, вспомогательное оборудование;
• трудовые ресурсы, которые включают квалифицированный персонал;
• наличие необходимой нормативной, методической, правовой, организационной и техніко-експлуатаційної документации.

Состав и квалификация персонала изложены в "Паспорте КМДЛВМ " (форма 2).

Работники КМДЛВМ имеют должностные  инструкции, которые устанавливают их функции, права, обязанности и ответственность.

Должностные инструкции разрабатываются  уполномоченным сотрудником  и утверждаются директором  КМДЛВМ и утверждаются начальником объединения ветеринарной медицины в м Киеве.

Должностные инструкции пересматриваются при изменении функциональных обязанностей должностного лица.

Аттестация специалистов, которые проводят метрологические  работы, проводится согласно действующего законодательства один раз в пять лет.

Повышение квалификации специалистов лаборатории осуществляется путем:

• путем учебы на курсах повышения квалификации для работников;
• путем  проведения  семинарских  занятий;
• внутренней учебы.

Подробная информация относительно средств измерительной техники, испытательного и другого лабораторного оборудования приведенная в Паспорте КМДЛВМ (форма 6,8,9).

В  КМДЛВМ обеспечены условия  для правильной эксплуатации и хранения лабораторного оборудования.

Введение в эксплуатацию средств измерительной техники и другого оборудования осуществляется ответственным за метрологическое состояние КМДЛВМ.

Средства измерительной техники и испытательное оборудование проходят периодическую поверку и метрологическую аттестацию в соответствии с действующими сроками.

Средства измерительной  техники отвечают требованиям нормативной документации на методики выполнения измерений, заявленных в отрасли аттестации.

 

Лабораторная  диагностика бешенства согласно ГОСТ26075-84 .

 

На сегодняшний день в ветеринарии  применяется единственный информативный  и достаточно точный метод диагностики  бешенства у животных. Это посмертное исследование срезов аммоновых рогов головного мозга и обнаружение в них специфических включений - телец Бабеша-Негри. Тельца Бабеша-Негри также присутствуют в цитоплазме нейронов, гиппокампе, клетках Пуркинье коры мозжечка, стволе мозга, гипоталамусе и спинномозговых ганглиях. Данные тельца присутствуют в головном мозге только при бешенстве, наличие их при других заболеваниях, в том числе и при заболеваниях центральной нервной системы, не зафиксировано.

  Состоят тельца Бабеша-Негри из тонковолокнистого матрикса и вирусного рибонуклеопротеида, размер телец - около 10 нанометров.

  Негри находил эти тельца только в нервной системе у больных животных и всегда у человека. Тельца не обнаружены в слюне и испражнениях. Природа телец до сих пор вызывает споры. Именно поэтому лабораторно исследуется труп павшего или усыпленного животного, подозрительного в заболевании бешенством.

 

Кроме исследований головного  мозга в ветеринарных лабораториях проводится получение вытяжки из мозга и искусственное заражение  лабораторных мышей бешенством. Процесс длительный и применяется для подтверждения диагноза.

Метод отбора проб

Для проведения исследований на бешенство  в лабораторию направляют свежие трупы мелких животных целиком, от крупных  животных – головной мозг.

Для постановки биопробы допускается использовать пробы мозга, консервированные в 30-50%-ном растворе глицерина.

Отобранный для исследования патологический материал упаковывают во влагонепроницаемую тару и в металлических контейнерах  доставляют в лабораторию.

Патологический материал сопровождают документом, содержащим следующие данные:

• наименование и адрес отправителя;
• вид животного;
• анамнестические и клинико-эпизоотологические данные.

Метод иммунофлуоресценции

Сущность метода заключается в  соединении меченых антител со специфическим антигеном и наблюдении светящихся комплексов «антитело-антиген» в полях зрения люминесцентного микроскопа.

Аппаратура, материалы, реактивы и  растворы:

• Микроскоп люминесцентный;
• Термостат с температурой нагрева 37°С;
• Холодильник;
• Стекла предметные по ГОСТ 9284-75.
• Пробирки бактериологические по ГОСТ 25336-82.
• Чашки Петри по  ГОСТ  25336-82.
• Пипетки мерные по ГОСТ 20292-74.
• Набор инструментов для вскрытия черепной полости и извлечения головного мозга животных.
• Пинцеты по ГОСТ 21241-77.
• Горелка газовая или спиртовая.
• Ацетон по ГОСТ 2603-79.
• Диагностический иммуноглобулин флуоресцирующий антирабический (ДАФИ).
• Масло нефлуоресцирующее иммерсионное по ГОСТ 13739-78.
• Вода дистилированная по ГОСТ 6709-72.
• Раствор фосфатный буферный, рН 7,4.

 

Подготовка к исследованию

Из каждого отдела головного  мозга (аммонова рога, мозжечка, коры больших  полушарий и продолгаватого мозга) готовят по два препарата- мазка-отпечатка.

Не допускаются для исследования пробы, концервированые глицерином, фиксированые этиловым спиртом, формалином и другими средствами, вызывающими денатурацию и разрушение антигенов или создающими дополнительный («свой») фон свечения.

Препараты высушивают на воздухе и фиксируют в охлажденом ацетоне ghb +4 или -12°С в течении 4-12 часов. Затем препараты извлекают из ацетона, высушивают на воздухе 10-15 мин и помещают их во влажную камеру (чашки Петри с увлажненным дном).