Ветеринарная микробиология и иммунология

Диагностический антирабистический  флуоресцирующий иммуноглобулин (ДАФИ) в рабочем разведении наносят  равномерно на всю поверхность препарата при помощи пипетки (примерно 0,1 см³  на один препарат) закрывают камеру с препаратами, помещают в термостат и выдерживают 30 мин при 37°С. Затем предметные стекла с препаратом троекратно промывают, погружая их каждый раз на 10 мин в сосуд, наполненый фосфатным буфером рН 7,4 промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.

На окрашенные препараты наносят  иммерсионное нефлуоресцирующее масло.

Проведение исследования

Подготовленные препараты просматривают  под люминесцентным микроскопом с иммерсионной системой.

Обработка результатов

При положительных результатах  исследования в препаратах, содержащих антиген вируса бешенства, обнаруживают разной величины и формы ярко-светящиеся желто-зеленым цветом гранулы в нейронах и вне клеток. Размер их колеблется от едва заметных в виде песчинок образований до 15-20мм.

 

Метод биологической  пробы

 

Сущность метода заключается  в выделении вируса от больных  убитых или павших животных путем  инокулирования патологического материала  белым мышам и последующей его идентификации.

Биопробу проводят, если выявление рабического антигена методом иммунофлуоресценции (или  РП и определение телец Бабеша-Негри) в первичном материале окажется отрицательным, (как получилось в  нашем случае).

 

Аппаратура, материалы и растворы

• Центрифуга с частотой вращения 2000 об/мин.
• Пробирки центрифужные.
• Ступки.
• Шприцы с иглами.
• Посуда для содержания мышей.
• Антибиотики.
• Раствор нейтральный физиологический.

Подготовка  к исследованию

Материал для заражения мышей  готовят из равных частей нервной ткани аммонова рога, мозжечка, коры полушарий, продолговатого мозга.

Ткань измельчают ножницами и растирают  в ступке (или гомогенизаторе), постепенно прибавляя нейтральный физиологический  раствор до получения 10%-ной суспензии.

Суспензию центрифугируют с частотой вращения 2000 об/мин в течение 5-10 минут. Надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку и хранят в холодильнике при температуре 0-4°С до ее использования.  При подозрении на бактериальную нестерильность в суспензию добавляют 500МЕ пенициллина и 500 МЕ стрептомицина на 1 см³ суспензии и затем выдерживают ее при комнатной температуре 30 мин.

Проведение исследования

Для биопробы берут белых лабораторных мышей массой 16-20 г или сосунков в возрасте 20-25 сут массой 6-8г.

Мышей заражают подготовленной суспензией интрацеребрально в дозе 0,015-0,03см³ в зависимости от массы мышей или подкожно в верхнюю губу в дозе 0,1-0,2 см³ .

На одну биопробу заражают 6-10 мышей.

Зараженых мышей помещают в клетки или банки, на которые наклеивают этикетку с указанием даты заражения, количества мышей, способа заражения и номера экспертизы. Горловину банки накрывают сеткой, препятствующейпроникновению насекомых.

Зараженных мышей осматривают  ежедневно в течение 30 сут Количество здоровых, больных и погибших мышей регистрируют в журнале.

Обработка результатов.

При оценке результатов учитывают  проявление клинических признаков  у зараженных мышей: взъерошеность  шерсти, тремор, нарушение координации  движений, паралич, прострация.

Гибель зараженных мышей в срок до 48 ч не учитывают в оценке результатов. От мышей, павших после указаного срока, головной мозг можно исследовать опять же методом иммунофлуоресценции и другими(метод подавления иммунофлуоресценции, реакции преципитации, метод выявления телец бабеша-негри).

Итак, биологическую пробу на бешенство  считают положительной, если в препаратах из мозга зараженных мышей обнаруживают тельца Бабеша-Негри или выявляют антиген методами имунофлуорресценции  или в реакции преципитации.

Отрицательный диагноз на бешенство  может быть дан только по истечении 30-суточной постановки биопробы при отсутствии специфической гибели мышей.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список использованной литературы

 

1. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н. А. Радчук, Г.В. Дунаев, Н.М. Колычев – М.: Агропромиздат, 1991.

 

2. Микробиология / Н.Р. Асанов – М.: Агропромиздат, 1989.

 

3. Ветеринарная микробиология / П.А. Емельяненко – М.: Колос, 1982.

 

4. Ветеринарная иммунология / У.Д. Герберт – М.: Колос, 1974.

 

5. Инфекционные болезни животных / Д.Ф. Осидзе – М.: Агропромиздат, 1987.

 

 

6. Справочник по микозам и микотоксикозам сельскохозяйственных животных. – Киев: Урожай, 1982.

 

7. Микробиология с вирусологией и иммунологией / К.Д. Пяткин – М.: Мир, 1972.