Вирусологические отделы

Вирусологические отделы. Вирусологические отделы лабораторий  и

научно-исследовательских  ветеринарных станций призваны осуществлять

лабораторную диагностику  вирусных инфекций, контролировать

заболеваемость животных, вызываемую вирусами в межэпизоотический

период.

Вирусология зародилась в  конце XIX столетия после опубликования

работы (1892) Д. И. Ивановского  о мозаичной болезни табака, где

приводятся убедительные доказательства о том, что мозаичная  болезнь

табака вызывается мельчайшим микроорганизмом, невидимым в световые

микроскопы и проходящим через бактериальные фильтры.

Вскоре Д. И. Ивановский доказал, что болезнь заразна и передается от по-

раженного ею растения к здоровым. 0,

Ивановский делает новое открытие: в листьях, пораженных возбудителем

табачной мозаики, обнаруживает мелкие кристаллы. Через сорок лет

американский вирусолог  У. Стенли изучил эти кристаллы и доказал, что они

представляют собой скопление  вируса табачной мозаики.

Между тем все новые  и новые факты подтверждают, что  Д. И. Ивановский

открыл новый мир живых  существ — вирусы. Ф. Леффлер и П. Фрош (1898

— 1899), применив методику ультрафильтрации Д. И. Ивановского,

установили, что ящур также  вызывается вирусом. В 1911 г. П. Раус

доказывает, что саркома  кур — вирусное заболевание. Туорт (1915) и

Д'Эррель (1917) обнаруживают, что бактерии могут поражаться вирусами —

9бактериофагами. Последние, размножаясь в бактериях, лизируют и

вызывают их гибель.

Величайшая заслуга Д. И. Ивановского заключается не только в том,

что он открыл первый вирус  и первым понял, что встретился с  особой

категорией возбудителей, болезней, но также и в том, что  он первым

сформулировал основные признаки вирусов (мельчайшие размеры и

проходимость через бактериальные  фильтры, внутриклеточный паразитизм и

неспособность размножаться на искусственных питательных средах),

которые долгое время были основными критериями при определении

вирусной природы возбудителей болезни.

Д. И. Ивановский не только открыл новую форму существования жизни —

вирусы, но своими выдающимися  исследованиями заложил основы ряду

направлений, разработка которых  сыграла огромную роль в

формировании и развитии современной вирусологии. Им были заложены

основы цитопатологии вирусных инфекций. Впервые было установлено

важное значение латентного ви-русоносительства. 

В последние годы установлено, что вирусы, ранее считавшиеся

возбудителями только острых заболеваний, часто являются причиной

хронических инфекций (корь, краснуха, паротит, клещевой и японский

энцефалиты, бешенство, грипп  и др.). В настоящее время известно свыше 500

болезней, вызываемых зоопатогенными вирусами. Многие из них являются

возбудителями широко распространенных болезней приносящих огромный

ущерб человечеству; ущерб  от вирусных заболеваний намного  превышает

ущерб, наносимый бактериями, грибками и простейшими). К особо  опасным

вирусным болезням животных относят ящур, чуму рогатого скота, чуму

свиней, птиц и др. Вирусология  имеет не только большое практическое

значение для здравоохранения  и сельского хозяйства, но и представляет

огромный теоретический  интерес для биологии, генетики, биохимии и

других отраслей естествознания.

Устройство  вирусологической лаборатории

Вирусологическая лаборатория - учреждение, занимающееся изучением  вирусов и вирусных заболеваний  или производством вирусных препаратов (вакцин, диагностикумов, противовирусных иммунных сывороток и т.п.).

Размеры и штаты вирусологической лаборатории зависят от назначения и объема работы. Но в любом случае обязательным является обеспечение  безопасности персонала и возможности  проведения работы в стерильных условиях.

Вирусологическая лаборатория  состоит из собственно лаборатории  и подсобных помещений - для обработки  и стерилизации посуды, приготовления  питательных сред (для выращивания  клеточных культур, выявления бактерий и микоплазм), лиофилизации вирусов, инкубатора, вивария и др. Если вирусологическая лаборатория входит в состав более крупного учреждения (института, санитарно-эпидимиологической станции и т.п.), подсобные помещения могут быть общим для ряда лабораторий или всего учреждения.

Собственно вирусологическая лаборатория строится по типу бактериологической лаборатории с учетом специфики  работы - выращивания клеточных и  тканевых культур, ультрацентрифугирования, хранения вирусов при низких температурах и др. Она оборудуется для диагностической работы (выделения вирусов и серологических реакций), для изучения свойств вирусов, их структуры, проведения генетических исследований и т.п.

Помещение вирусологической лаборатории должно быть светлым  и достаточно просторным, легко мыться и обрабатываться дезинфицирующими растворами, с этой целью стены  красят масляной краской или облицовывают плиткой. Пол не должен иметь щелей. Окна лаборатории ориентируют на север или северо-запад. При ориентировке на юг окна завешивают белыми шторами. Помещение оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией примерно с 10-кратным  обменом воздуха; оно должно быть обеспечено холодной и горячей водой, а также светильным газом. Желательно, чтобы в лаборатории имелась  централизованная система сжатого  воздуха (давление до 1,0-1,2 атм) и вакуума (до700-760 мм рт. ст. остаточного давления). Должны быть также предусмотрены душевые комнаты для сотрудников. При работе с особо опасными вирусами необходимо обезвреживание (путем кипячения) сточных вод.

В вирусологической лаборатории  обязательно наличие отдельного помещения для стерильной работы, состоящего из двух отделений, разделенных  стеклянной перегородкой. Внутреннее помещение - бокс - должно быть небольшим (6-8 мІ), с низким потолком. Дверь должна открываться в предбоксник, служащий для одевания дополнительной одежды, отделенный второй перегородкой от остального помещения. Для стерилизации бокса и предбоксника используют бактерицидные лампы из увиолевого стекла с преобладающей длиной волны 254 нм. Для этой цели можно использовать лампы БУВ, которые устанавливают из расчета 2-2,5 вт на 1 мі помещения; средний срок службы лампы 1500 часов. Обязательно обеспечение боксов стерильным воздухом за счет приточной вентиляции при 4-5-кратном обмене; для стерилизации воздуха могут быть использованы фильтры ЛАИК из ткани Петрянова - тип ФПП.

В боксе должны находиться лишь необходимые для работы инструменты  и посуда, стерилизатор для инструментов, широкогорлые банки с дезинфицирующим раствором, бак с крышкой для зараженного материала. При работе с возбудителями особо опасных инфекций в боксе устанавливают дополнительно настольный бокс, в котором стерилизуют путем фильтрации как поступающий, так и оттекающий воздух. Основные правила работы с особо опасными возбудителями регламентируются специальной инструкцией.

Для дезинфекции в вирусологической лаборатории используют чаще всего  лизол 1-5%, хлорамин 1-5%, формалин 2,5-5%.

Помимо обычной бактериологической посуды, в вирусологической лаборатории  должны быть: гомогенизатор для измельчения  тканей, магнитные мешалки, микроскопы (световые для исследования в обычном  и ультрафиолетовом свете, а также  электронные), центрифуги различной  мощности (на 3-5 тыс. об. /мин, а также с охлаждением на 12-15 тыс. и 60 тыс. об. /мин), имеющие набор роторов. Необходимы термостаты, одновременно работающие при различной температуре (от 25 до 40?С), в том числе с подачей углекислого газа, или термостатные комнаты. Вирусологическая лаборатория оборудуется рефрижераторами или холодильными камерами с температурой +4, - 20 и - 40?С. Для хранения культур клеток необходимы сосуды Дьюара с жидким азотом или холодильники с температурой ниже - 90?С.

Лаборатории, изучающие биохимию вирусов оборудуют по типу химических. Работа с радиоактивными изотопами производится в специально оборудованном помещении.

В отделениях по приготовлению  сред, помимо обычной химической посуды необходимо иметь установки для  обработки воды, которая дважды дистиллируется в стеклянных аппаратах или деионизируется на колонках с ионообменными смолами. Для стерилизации растворов, которые нельзя автоклавировать, используют асбестобумажные стерилизующие пластины Зейтца, вмонтированные в фильтры типа Сальникова (Ф-140, ФС-3, ФС-7 и т.п.); фильтрация осуществляется при давлении 0,5 атм.

Рабочий стол вирусолога, по возможности располагают на расстоянии 1 м от окна и покрывают линолеумом или стеклом. На столе помещают газовую  горелку. Обязательным оборудованием  рабочего места является банка для  пипеток с дезинфицирующим раствором (3% раствор карболовой кислоты), закрывающийся  фарфоровый или стеклянный сосуд  для ваты, набор штативов для пробирок, эмалированные кюветы, пинцеты, ножницы  и скальпель, чистые предметные стекла с лунками и без них, а также  покровные стекла. Микроскопы хранят в футляре или под стеклянным колпаком. В вирусологической лаборатории  также должна быть умывальная раковина, над которой на полке помещают бутыль с раствором для дезинфекции  рук.

Виварий должен быть отделен  от помещения собственно вирусологической лаборатории. В нем необходимо иметь  комнаты для карантина поступающих  животных, для их заражения и отдельно для вскрытия. Работа с мелкими  лабораторными животными производится за защитным стеклом. Обеззараживание  клеток для содержания животных лучше  производить паром. Необходимо также  иметь крематорий для сжигания трупов животных и мусора.

Устройство областной  вирусологической лаборатории, в которую  хозяйство направляет материал для  исследований, отвечает основным правилам и нормам.

Правила взятия и пересылки материала  для вирусологического исследования

Для вирусологических исследований желательно направлять пробы от животных в трех стадиях болезни:

· от свежих трупов (кровь, кость, лимфоузел и пораженные органы);

· от убитых в агонии животных (кровь, кость, лимфоузлы и пораженные органы);

· от выздоравливающих животных (кровь).

Пробы необходимо брать асептически, не допуская их загрязнения, в стерильные флаконы (обычно из-под антибиотиков). Каждую пробу необходимо брать в отдельный флакон. Масса каждой пробы должна быть достаточной для исследования - не менее 5-10 мл, или грамм. Все флаконы должны герметически закрываться пробками (обычно резиновыми), продезинфицированы снаружи, высушены и маркированы. Надписи необходимо делать простым карандашом с указанием вида и номера животного, названия органа и даты взятия материала. Дополнительные данные, относящиеся к анамнезу, заболеваемости, размеру очага или вспышки, симптоматике, применявшимся вакцинам, препаратам и т.п., отражают в специальной карте или сопроводительном письме. Лучшие условия для сохранения проб материалов - замораживание.

Для пересылки образцы  должны быть помещены в термосы со льдом или изотермические ящики, приспособленные для пересылки. Если образцы можно доставить  в лабораторию в течение суток  после отбора, то их не замораживают и не консервируют. Образцы, которые  не могут быть доставлена в лабораторию в течение суток или в замороженном виде, необходимо консервировать глицерином. Он должен полностью покрывать кусочки взятых органов. Даже консервированные образцы желательно хранить в холодильнике.

Успешная и точная диагностика  зависит от быстроты доставки материалов в лабораторию.

При вспышках заболеваний  со значительной массовостью или  смертностью из близко расположенных  к лаборатории районов кроме  образцов материала желательно присылать  больных животных или свежие трупы. Их также необходимо доставлять с  предосторожностями (упаковывать в  ящики или коробки) во избежание  разноса инфекции. Образцы материалов от трупов должны быть отобраны в возможно короткие сроки после смерти животного, чтобы сохранить возможности  для выделения возбудителя, вызывающего  заболевание. В тропическом и  субтропическом климате при повышенных температуре и относительной  влажности воздуха время от гибели до отбора проб не должно быть более 12 ч.

Взятие проб крови  от переболевших животных.

Пробы крови берут из яремной  вены у крупного и мелкого рогатого скота, лошадей, из хвостовой артерии  у свиней и из подкрыльцовой вены у птиц. Кровь можно брать из ушной вены.

Перед взятием крови необходимо очистить и продезинфицировать кожу в месте укола или разреза. Каждую иглу или лезвие можно использовать только для одного взятия пробы.

Отбор проб костей.

От мелкого животного  можно отрезать небольшой кусочек  ребра или трубчатой кости, предварительно освободив их от мышечной и хрящевой тканей от крупных животных можно  наскоблить ножом или скальпелем ткань красного мозга из любой  трубчатой кости, лопатки, позвонков, грудных концов ребер. Для этого нужно обнажить суставную поверхность, срезать хрящ и концом ножа или скальпеля, вращая их, наскрести и поместить во флакон необходимое количество (5-10 г) костно-мозговой ткани.

Целую кость, освобожденную  от мышц, посылают в герметически заклеенном пластиковом мешке.

Стерилизация  лабораторной посуды

Стерилизация - обеспложивание; уничтожение в каком-либо материале  патогенных и непатогенных микроорганизмов  в вегетативной и споровой формах.

Подготовка посуды для  стерилизации. Лабораторная посуда должна быть чисто вымытой и простерилизованной. Для мытья используют растворы мыла или химические моющие средства. Новую посуду предварительно кипятят в 1-2% -м растворе соляной кислоты, во избежание последующего выщелачивания стекла. Вымытую в проточной воде посуду ополаскивают дистиллированной водой и высушивают.

Бактериологические пробирки. Конические, матровые колбы закрывают ватно-марлевыми пробками, состоящими из плотно скрученных валиков ваты, покрытых слоем марли. Для бактериологических пробирок также разработаны металлические пробки в виде наружных колпачков. Следует учитывать, что стерилизация ватных пробок при высокой температуре приводит к выделению из ваты веществ, ингибирующих рост некоторых чувствительных бактерий, например бруцелл.