Общий белок сыворотки крови. Методы определения, клинико-диагностическое значение, видовые особенности

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ  БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО  ОБРАЗОВАНИЯ

«ИЖЕВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ  СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ»

 

ФАКУЛЬТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

Кафедра химии 

 

 

 

 

Контрольная работа

по биохимии животных

Тема: «Общий белок сыворотки  крови. Методы определения, клинико-диагностическое  значение, видовые особенности»

 

 

                                                                               Выполнила: Курочкина В. С.

                                                                               студентка 3 курса ФЗО

 Специальность: «Ветеринария»

                                              Шифр: 11029

                                                                  Проверил: к. б. н., доцент

                                               Берестов Д. С.

 

 

 

 

Ижевск 2013 г.

СОДЕРЖАНИЕ

 

Введение………………………………………………………………..3    

1. Общий белок сыворотки крови…………………………………….
2. Методы определения, клинико-диагностическое значение, видовые особенности…………………………………………………………… 

 Заключение…………………………………………………………….....20

Список используемой литературы ……………………………………...21

Приложение………………………………………………………………..22

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ВВЕДЕНИЕ

В живых клетках происходит синтез множества органических молекул, среди которых главную роль играют полимерные макромолекулы – белки, нуклеиновые кислоты, полисахариды. Особая роль в жизнедеятельности живых организмов принадлежит белкам. От родителей детям передается генетическая информация о специфической структуре и функциях всех белков данного организма. Синтезированные белки выполняют транспортную, защитную, структурную функции, участвуют в передаче сигналов от одной клетке к другим и таким же образом реализуют наследственную информацию. 

Белки - высокомолекулярные органические азотсодержащие соединения, состоящие более чем из 20 видов альфа-аминокислот. Условной границей между крупными полипептидами и белками служит молекулярная масса 8000-10000. Плазменные белки синтезируются преимущественно в печени, клетках плазмы, лимфатических узлах, селезенке и костном мозге.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1. ОБЩИЙ БЕЛОК СЫВОРОТКИ КРОВИ

Белки сыворотки крови  – достаточно большая группа белков, которые различаются между собой  структурой, физико-химическими свойствами и функциями. Общее количество их определяют с помощью рефрактометра  или биуретовым методом, а отдельные компоненты – электрофорезом. В зависимости от метода распределения можно получить от 5 до 100 фракций белков. Электрофорезом на бумаге в сыворотке крови определяют 4-5 фракций: альбумины, альфа (иногда альфа-1 и альфа-2), бета — и гамма-глобулины, а электрофорезом в агаровом, крахмальном и полиакриламидном гелях – значительно больше (до 30).

Количество общего белка  и соотношения между отдельными фракциями в сыворотке крови  животных разных видов колеблется в  определенных пределах.

У молодняка содержание общего белка ниже, чем у взрослых: у  телят возрастом 1-10 дней – 56-70 г/л, новорожденных  поросят – 45-50, ягнят – 46-54 г/л см. приложение (таб. 1).

Плазма крови животных представляет собой жидкость с плотностью 1,02 – 1,06. Повышение плотности крови  наблюдается при обезвоживание организма. На долю сухого остатка плазмы приходится менее 10%, а остальное вода. Основную массу сухого остатка составляют белки, общая концентрация которых в плазме составляет 60-80 г/л. Сумма концентрации альбуминов и глобулинов составляет концентрацию общего белка плазмы крови.

Общий белок - это органический полимер, состоящий из аминокислот. Различные белки участвуют во всех биохимических реакциях нашего организма в качестве катализаторов, транспортируют различные вещества и лекарственные препараты, участвуют в иммунной защите и т.д.

Суммарная концентрация белков, находящихся в сыворотке крови, определяется понятием «общий белок».

Общий белок — важнейший компонент белкового обмена в организме, так же это  суммарная концентрация альбумина и глобулинов, находящихся в сыворотке крови.

В организме  общий белок выполняет следующие  функции:

• участвует в свертывании крови;
• поддерживает постоянство рН крови;
• (перенос жиров, билирубина, стероидных гормонов в ткани и органы) транспортная функция;
• участвует в иммунных реакциях и многие другие функции;
• являются резервом аминокислот;
• выполняют регулирующую функцию в организме, так как входят в состав гормонов, ферментов.

При обезвоживание организма повышается концентрация общего белка плазмы крови. Снижение концентрации общего белка плазмы крови может быть следствием самых разнообразных причин – низкое содержание белка в рационе, болезни почек, печени, при которых теряется белок с мочой, нарушение процесса всасывания питательных веществ в пищеварительном тракте.

Физиологическая функция  белков плазмы состоит в поддержании  коллоидно-осмотического давления, буферной емкости плазмы, в некоторых  случаях - депонировании (хранении) молекул  липидов, продуктов метаболизма, гормонов, лекарственных веществ и микроэлементов. Некоторые белки плазмы выполняют  ферментативную функцию, иммуноглобулины  осуществляют гуморальный иммунитет. Компоненты комплемента и С-реактивный белок важны для осуществления неспецифической резистентности, особенно в случае бактериальных инфекций. Баланс между факторами и ингибиторами свертывания обеспечивают жидкое состояние крови в норме и быстрое свертывание в случае травмы.

 

Классификация:

- Простые (протеины) (содержат только аминокислоты)

- Сложные (протеиды) (аминокислоты и неаминокислотные компоненты (гем, производные витаминов, липиды или углеводы)

- Фибриллярные (составляющие многие плотные ткани)

- Глобулярные (альбумины (4-5%), глобулины (2-3%), фибриноген (0.2-0.4%)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ, КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ, ВИДОВЫЕ ОСОБЕННОСТИ

Методы определения  общего белка в сыворотке крови:

1. Азотметрические;

2. Определение удельного  веса сыворотки;

3. Весовые (гравиметрические), когда белки крови осаждают, высушивают  до постоянного веса и взвешивают на аналитических весах;

4. Рефрактометрические;

5. Колориметрические;

6. Нефлометрические;

7. Поляриметрические;

8. Спектрофометрические;

1. Рефрактометр ИРФ - 454 Б2М

предназначен для определения белка в сыворотке крови, спинно-мозговой жидкости, контроля концентрации лекарств, измерения плотности мочи.

2. Cobas integra - Total Protein Gen.2

Принцип теста: двухвалентная  медь реагирует в щелочном растворе с белковыми пептидными связями  с образованием характерного пурпурного цветного биуретового комплекса.

3. Определение белковых  фракций сыворотки крови методом  электрофореза на ацетатцеллюлозной пленке.

Буферный раствор предназначен для электрофоретического разделения белков сыворотки крови на мембранах  из ацетатцеллюлозы с последующим денситометрическим определением белковых фракций.

Принципы  метода

Принцип электрофоретического разделения белков основан на различной  скорости движения молекул белков сыворотки крови в постоянном электрическом поле определенной напряженности. Разделенные белковые фракции окрашиваются красителем. Интенсивность окраски белковых фракций пропорциональна их количеству.

Анализируемые образцы

Сыворотка крови, свободная  от гемолиза, липемии и не желтушная. Белковые фракции сыворотки крови стабильны в плотно закрытой пробирке при 18-25 в течение 8 часов, при 2-8 - в течение 3 дней, при 20 - в течение 1 месяца.

Проведение  анализа

1. Проведение электрофореза

1.1. сухие мембраны осторожно  положить на поверхность буфера  для электрофореза, избегая быстрого  их погружения, и выдержать до  полного смачивания. Смоченные мембраны  аккуратно промокнуть между листами  плотной фильтровальной бумаги, не допуская их высыхания. Перед  нанесением образцов желательно  провести фазу префореза. Для этого мембрану следует поместить в камеру для электрофореза и включить ток в выбранном режиме на 10 минут. Фазу префореза можно заменить длительным замачиванием мембраны в растворе буфера (несколько часов).

1.2. с помощью аппликатора  нанести анализируемые образцы  сыворотки крови на расстоянии 2-3 см от катодного края мембраны. Мембрану поместить в электрофоретическую  камеру и подключить ток.

2. Обработка электрофореграммы

2.1. краситель Пунцовый  С.

После отключения тока мембрану осторожно перенести в раствор  красителя на 3-5 минут, затем дважды на 3 минуты в 5-7% раствор уксусной кислоты (до отбеливания фона).

1.2. электрофореграмму обработать с помощью сканера и компьютерной программы.

4. Тимоловая проба

Принцип метода

Сывороточные бета-глобулины, гамма-глобулины и липопротеины осаждаются при рН 7.55 тимоловым реактивом. В зависимости от количества и взаимного отношения белковых фракций при реакции возникает помутнение, интенсивность которого измеряют турбидиметрически.

Клинико-диагностическое  значение:

Тимоловая проба более  пригодна для функционального исследования печени, чем коллоидно-устойчивые пробы. Считают что она положительна в 90-100 % случаев болезни Боткина (уже в преджелтушной ее стадии и при безжелтушной форме) и при токсическом гепатите. Реакция положительна при послегепатитном и постнекротическом, особенно желтушном циррозе (в отличие от других форм циррозов), при коллагеновых заболеваниях, малярии и вирусных инфекциях. При механической желтухе она (в 75% случаев) отрицательна, что имеет дифференциально-диагностическое значение.

При механической желтухе  проба становится положительной  лишь в случае, если процесс осложняется  паренхиматозным гепатитом. Для  дифференциации механической желтухи  от паренхиматозной большое значение имеет применение тимоловой пробы  с пробой Бурштейна (на бета- и пре-беталипопротеиды).

При паренхиматозной желтухе  обе пробы положительны, при механической желтухе тимоловая проба отрицательна, проба Бурштейна - резко положительна.

Для определения общего белка  в сыворотке крови у животного  берут венозную кровь в специальную  пробирку с активатором свертываемости см. приложение (таб. 2). Перед сдачей крови животное выдерживают на голодной диете 8 часов. Кровь сдают до приема лекарственных препаратов, которые могут повлиять на результат исследования. Качественный состав белков плазмы крови очень разнообразен. Общий белок делят на отдельные фракции методом электрофореза, основанного на разделении белковых смесей по признаку различной величины массы и конкретного заряда одного белка. При электрофоретическом разделении в зависимости от носителя количество белковых фракций общего белка неодинаково. Меньшее число фракций получают при электрофорезе на бумаге 5 фракций, тогда как при электрофорезе на агаровом геле, полиакриламидном геле число белковых фракций может быть значительно больше до 20 фракций. К основным фракциям относят альбумины и глобулины. 

Альбумины синтезируются в печени и являются простыми белками, содержащими до 6—аминокислотных остатков. Они хорошо растворимы в воде. Нормируемое значение 56.5 – 66.8 (На альбумин в сыворотке крови приходится приблизительно 60% общего белка. Альбумины синтезируются в печени (примерно 15г/сут), время их полураспада составляет примерно 17 дней. Онкотическое давление плазмы на 65-80 % обусловлено альбумином. Альбумины выполняют важную функцию транспортировки многих биологически активных веществ, в частности гормонов. Они способны связываться с ХС, билирубином. Значительная часть кальция в крови также связана с альбумином. Альбумины способны соединяться с различными ЛС.

Функция альбуминов:

• поддержание коллоидно-осмотического давления плазмы:
• постоянство концентрации водородных ионов;
• транспорт различных веществ ( билирубин, жирные кислоты, минеральные соединения и лекарственные препараты).

Альбумины плазмы крови могут  рассматриваться и как определенный резерв аминокислот для синтеза  жизненно необходимых специфических  белков в условиях дефицита белков в рационе. Альбумины удерживают воду в кровяном русле. При нефритах в мочу из плазмы крови проникают  в первую очередь альбумины, как  самые низкомолекулярные белки (молекулярная масса альбуминов  составляет около 60 000 – 66 000). В норме на долю альбуминов приходится 35-55% от общего количества белков плазмы крови.