Получение вакцин методом генной инженерии

Краткая история  появления вакцин  
Под общим названием вакцин объединяют все препараты, получаемые как из самих патогенных микроорганизмов или их компонентов, так и продуктов их жизнедеятельности, которые применяются для создания активного иммунитета у животных и людей.  
Историю создания средств специфической профилактики можно разделить на три периода:

 
1. Бессознательные попытки на  заре научной медицины искусственно  заражать здоровых людей и  животных выделениями от 
больных с легкой формой заболевания.  
2. Создание большого количества вакцин из убитых бактерий.  
3. Создание и применение живых, убитых, субъединичных вакцин.  
Первый период ознаменовался гениальным открытием живых вакцин Э. Дженнером (1796) и Л. Пастером (1880). Хотя в основе этих открытий лежали опыт и наблюдения (Э. Дженнер), знание этиологии и сознательный эксперимент (Пастер), главным в этот почти столетний период было искусственное заражение с последующим переболеванием, то есть вызвать «легкую болезнь» с тем, чтобы человек не заболел ею в тяжелой смертельной форме. Вакцина Дженнер а против оспы, вакцины Пастера против холеры кур (1880), сибирской язвы (1880–1883), рожи свиней (1882–1883), бешенства (1-S81–1886) содержали живых возбудителей болезни, ослабленных различными методами: возбудитель холеры кур – длительным хранением культур в бульоне, воздействием на возбудителя сибирской язвы повышенной температурой (42,5 °С), пассажем возбудителя рожи через организм голубей и кроликов, пассированием вируса бешенства через организм кроликов.  
В 1884 году Л.С. Ценковский в России, используя принцип аттенуации (ослабления) по Пастеру, приготовил свои вакцины против сибирской язвы. В 1908 году Wall и Leclainche получили вакцину против эмкара из культур возбудителя, выращенных при 43–44° С, или культуры, выращенные в средах со специфической сывороткой. Затем подобные живые вакцины были получены против холеры людей (Хавкин В., в Индии, 1890–1896; Nikole, 1912). В 1897 году Р. Кох в практику профилактических прививок против чумы крупного рогатого скота предложил живой вирус из желчи убитых, больных или павших от чумы животных. Эти прививки давали отход до 30%. Вскоре Ненцкий, Забер и Выжникевич заменили их «симультанными» прививками, то есть одновременным введением с живым вирусом специфической сыворотки.  
На этом первый, самый ранний период разработки живых вакцин заканчивается, вместе с ним заканчивается и первый период развития иммунологии.  
Второй период характеризуется изготовлением вакцин из убитых бактерий и открытием большого количества возбудителей заболеваний. И смело можно сказать, что не было такого микроорганизма, который бы в убитом состоянии не использовался в качестве вакцины. Официальным началом этого периода следует считать 1898 год (Kolle Pieiffer), он дал богатые плоды для медицины и ветеринарии в создании так называемых корпускулярных вакцин. В то же время он принес науке много удивительных открытий и разочарований. Этот период не закончен и сейчас, так как из-за отсутствия эффективных профилактических препаратов мы пользуемся убитыми корпускулярными вакцинами при целом ряде инфекций, хотя имеются совершеннейшие методы аттенуации микроорганизмов.  
В разработке живых вакцин этот период сыграл печальную роль. Он задержал их развитие более чем на 20 лет. Но в то же время в этот период бытовало мнение о недостаточной эффективности убитых вакцин. Ученые не оставляли поисков все новых и новых живых вакцин, как наиболее эффективных и экономичных профилактических препаратов.  
В третий период (с 1930 года) в равной мере получили развитие живые, убитые и так называемые химические вакцины из очищенных антигенов, то есть третий период характеризуется развитием обоих направлений.  
Сторонники применения убитых вакцин, ссылаясь на факты осложнений при применении живых вакцин в ветеринарной практике, отвергали их и стремились усовершенствовать убитые вакцины. Способы улучшения убитых вакцин были связаны с применением различных физических и химических агентов для обезвреживания микробов, подбором штаммов с полноценными антигенами, введение «щадящих» режимов инактивации культур микробов, использованием очищенных, так называемых протективных, антигенов (химических вакцин). Уделялось немало работ вопросам «депонирования» убитых и химических вакцин, методам их аппликации, кратностям, интервалам, дозам введения, а также проблеме ревакцинаций. При этом были достигнуты большие успехи. Но все же проблема ликвидации инфекционных болезней успешно не решалась.  
Изготовление живых вакцин в 20–60-х годах текущего века не стояло на месте. Разработки получения живых вакцин проводились, no несколько более замедленными темпами, чем убитых вакцин. Лишь в последние 20–30 лет мы становимся свидетелями широкого производства живых вакцин и замены ими убитых вакцин, не всегда являющихся эффективными.  
Например, многолетний опыт использования убитых вакцин в нашей стране и за рубежом при профилактике сальмонеллезов показал их недостаточную иммуногенную эффективность, так как сальмонеллезные антигены в организме привитых животных не способны размножаться. Это ограничивает их циркуляцию в организме и проявление клеточного иммунитета. Последнее заставляет применять убитые вакцины многократно, вводить их большими дозами, что обуславливает высокую реактогенность убитых вакцин. Для профилактики инфекционных болезней более эффективными считают живые вакцины их аттенуированных штаммов. Последние получают при пассировании вирулентных культур микроорганизмов на искусственных питательных средах и через невосприимчивых животных, а также воздействием на них физических, химических и биологических факторов. Введение таких штаммов в организм обеспечивает их размножение не вызывая заболевания. 1 аоборот, они обеспечивают выработку более прочного, в том числе клеточного, иммунитета. В отличие от иммунитета, сформировавшегося под действием убитых вакцин, иммунитет от применения живых вакцин наступает более быстро, уже после однократного введения вакцины. Он более напряженный и продолжительный. Однако преимущества живых вакцин перед убитыми этим не исчерпываются.  
Согласно современным международным требованиям штаммы, применяемые для изготовления живых вакцин, должны иметь генетические маркеры, позволяющие отличить их от полевых штаммов. Они должны обладать постоянством (константность) своих биологических свойств, слабой остаточной вирулентностью и обеспечивать невосприимчивость к инфекции большинства животных при однократном применении вакцины.  
Значение живых вакцин оценивается еще и с экономических позиций. На Международном конгрессе микробиологов в 1966 году было высказано мнение, что применение живых вакцин обеспечивает сохранение экологического баланса, не допускающее появление новых патогенных микроорганизмов.  
Большинство выпускаемых у нас живых вакцин в настоящее время являются моноштаммными. Технология их изготовления не учитывает многообразия серовариантного состава бактерий.  
В технологическом процессе вакцинного производства важны все звенья: от подбора производственных штаммов и питательной среды до конечных этапов – стандартизации и расфасовки биопрепаратов.  
Технологическая схема изготовления инактивированных (I) и живых (II) вакцин на примере производства вакцин против сальмонеллеза представлена на рисунке 4.1 (по Ярцеву М.Я., 1996).  
Мы уже ознакомились с биотехнологией приготовления питательных сред, подбором производственных штаммов микроорганизмов и технологией культивирования их в промышленных условиях. Для производства вакцин важен метод глубинного культивирования микроорганизмов в реакторах, в которых должен предусматриваться автоматический контроль и регулирование следующих технологических параметров: температуры (t), давления (Р), расхода воздуха (G), уровня среды (Н), концентрации микроорганизмов (М), концентрации микроэлементов (Г), числа оборотов перемешивающего устройства (п), концентрации водородных ионов (рН), парциального давления кислорода (рО2) и углекислого газа (рСО2), концентрации углеводов (в частности глюкозы), окислительно-восстановительного потенциала (Eh). При этом нужно иметь в виду, что для каждого микроорганизма нужна индивидуальная питательная среда и свои параметры культивирования.  
Полученную после выращивания микробов культуру используют в зависимости от вида приготовляемой вакцины – инактивированной или живой.  
Биотехнология медицинская – технология получения продуктов, необходимых для профилактики и лечения заболеваний, из живых клеток различного происхождения. Термин «биотехнология» появился в 70-х гг. 20 в. и объединил ранее употреблявшиеся понятия «промышленная микробиология», «техническая биохимия» и др.  
Биотехнологические процессы с древних времен используются в практической деятельности человека, например в хлебопечении, приготовлении молочнокислых продуктов, пивоварении. В современных условиях Б. развивается очень интенсивно, Это обусловлено достижениями биохимии и цитологии (например, получение в кристаллическом виде и применение стабилизированных и иммобилизованных ферментов, нативных или частично разрушенных иммобилизованных клеток микро- и макроорганизмов), технологии ферментации (например, производство продуктов с использованием ферментации, переработка отходов различных производств путем биодеградации), биоэлектрохимии. Решающее значение для развития современной Б. приобрели генетическая и клеточная инженерия.  
Основы медицинской Б. были заложены в 40-х гг. 20 в. разработкой промышленного производства пенициллина. Затем были найдены продуценты и налажено промышленное получение других антибиотиков. В ряде случаев выход антибиотиков удалось существенно повысить, создав высокопроизводительные мутантные штаммы продуцентов. Ряд антибиотиков в настоящее время производится полусинтетическим способом биоконверсии, в соответствии с которым грибы или микроорганизмы осуществляют лишь некоторые ключевые стадии модификации молекулы лекарственного вещества. Этот способ успешно применяют и в производстве препаратов стероидных гормонов – глюкокортикоидов и половых гормонов. Для производства интерферона, вирусных антигенов используются клетки человека, культивируемые в искусственной среде.  
Наибольшее влияние на развитие Б. оказывает генетическая инженерия, методы которой позволяют выделять индивидуальные гены и получать кодируемые ими продукты в больших количествах. На основе генно-инженерной технологии разработано и осуществляется производство инсулина и гормона роста человека, интерферонов и других биологически активных белков. Разрабатываются генно-инженерные технологии получения противовирусных вакцин, которые особенно ценны в тех случаях, когда выделять вирус для этих целей либо трудно, либо опасно. Так, вирус гепатита В вне организма не размножается, и его специфичный антиген ранее выделяли только из крови людей – носителей вируса. После того, как был получен ген, контролирующий синтез этого белка, были созданы микроорганизмы, активно продуцирующие антиген вируса гепатита В в процессе своей жизнедеятельности.  
Клонированные гены и другие участки ДНК человека, а также искусственно синтезированные участки генов, полученные с помощью биотехнологических подходов, уже нашли практическое применение при выявлении носительства патологических генов и диагностике некоторых наследственных болезней человека, в т.ч. и дородовой диагностике. Поставлена и активно разрабатывается на экспериментальных моделях проблема лечения наследственных болезней путем пересадки нормального гена в клетки больного человека.  
Важнейшей для медицинской Б. областью стала клеточная инженерия, в частности технология получения моноклональных антител, которые продуцируются в культуре или в организме животного гибридными лимфоидными клетками – гибридомами. Технология получения моноклональных антител оказала большое влияние на фундаментальные и прикладные исследования в области медицины и на медицинскую практику. На их основе разработаны и применяются новые системы иммунологического анализа – радиоиммунологический и иммуноферментативный анализ. Они позволяют определять в организме исчезающе малые концентрации специфических антигенов и антител. Большое значение моноклональные антитела приобрели для типирования тканевых антигенов (прежде всего антигенов класса HLA) при подборе наиболее подходящих доноров для трансплантации органов и тканей. Моноклональные антитела к специфическим опухолевым антигенам или определенным белкам, появляющимся при наличии опухолей, играют большую роль в ранней диагностике опухолей и их метастазов, позволяют контролировать эффективность терапии. Эти антитела, иммобилизованные на нерастворимом инертном носителе, могут быть весьма эффективны для избирательного удаления из кровотока ядовитых соединений, при интоксикациях. С помощью иммобилизованных моноклональных антител получают также такие препараты, как, например, интерферон, в промышленных масштабах.  
Коэффициент профилактической эффективности вакцины – показатель способности вакцины предохранять людей от клинически выраженного заболевания соответствующей инфекционной болезный: отношение разности чисел заболевших в контрольной группе и среди привитых к числу заболевших в контрольной группе, выраженное в процентах; определяется в условиях строго контролируемого эпидемиологического эксперимента.  
Вакцины (лат. vaccinus коровий) – препараты, получаемые из микроорганизмов или продуктов их жизнедеятельности; применяются для активной иммунизации людей и животных с профилактической и лечебной целями.  
Различают следующие виды вакцин:  
Вакцина адсорбированная (v. adsorptum) – В., антигены которой сорбированы на веществах, усиливающих и пролонгирующих антигенное раздражение.  
Вакцина антирабическая (v. antirabicum; анти- + лат. rabies бешенство) – В., изготовленная из штамма фиксированного вируса бешенства в суспензии тканей головного мозга животных или в культуре клеток и предназначенная для предупреждения заболевания у лиц, укушенных (ослюненных) животными, больными бешенством (подозреваемыми на заболевание).  
Вакцина ассоциированная (v. associatum; син.: В. комбинированная, В. комплексная, поливакцина) – препарат, состоящий из нескольких В. различного типа, предназначенный для одновременной иммунизации против нескольких инфекционных болезней.  
Вакцина живая (v. vivum) – B., содержащая жизнеспособные штаммы патогенного микроорганизма, ослабленные до степени, исключающей возникновение заболевания, но полностью сохранившие антигенные свойства, обусловливающие формирование специфического иммунитета у привитого.  
Вакцина поливалентная (v. polyvalens; греч. poly – много + лат. valens, valentis сильный) – В., изготовленная на основе нескольких серологических вариантов возбудителя одной инфекционной болезни.  
Вакцина убитая (v. inactivatum) – В., изготовленная из микроорганизмов инактивированных (убитых) воздействием физических или химических факторов.  
Вакцина фенолизированная (v. phenolatum) – убитая В., изготовленная из микроорганизмов, инактивированных фенолом.  
Вакцина формалинизированная (v. formalinatum; син. формолвакцина) – убитая В., изготовленная из микроорганизмов, инактивированных формалином.  
Вакцина химическая (v. chemicum) – В., состоящая из специфических антигенов, извлеченных из микроорганизмов, и очищенная от балластных веществ.  
Вакцина эмбриональная (v. embryonale) – В., изготовленная из вирусов или риккетсий, выращенных на эмбрионах птиц (кур, перепелок).  
Вакцина этеризованная (v. aetherisatum) – убитая В., изготовленная из микроорганизмов, инактивированных эфиром.  
Вакцины состоят из действующего начала – специфического антигена; консерванта для сохранения стерильности (в неживых В.); стабилизатора, или протектора, для повышения сроков сохраняемости антигена; неспецифического активатора (адъюванта), или полимерного носителя, для повышения иммуногенности антигена (в химических, молекулярных вакцинах). Специфические антигены, содержащиеся в В., в ответ на введение в организм вызывают развитие иммунологических реакций, обеспечивающих устойчивость организма к патогенным микроорганизмам. В качестве антигенов при конструировании В. используют: живые ослабленные (аттенуированные) микроорганизмы; неживые (инактивированные, убитые) цельные микробные клетки или вирусные частицы; извлеченные из микроорганизмов сложные антигенные структуры (протективные антигены); продукты жизнедеятельности микроорганизмов – вторичные метаболиты (например, токсины, молекулярные протективные антигены): антигены, полученные путем химического синтеза или биосинтеза с применением методов генетической инженерии.  
В соответствии с природой специфического антигена В. делят на живые, неживые и комбинированные (как живые, так и неживые микроорганизмы и их отдельные антигены). Живые В. получают из дивергентных (естественных) штаммов микроорганизмов, обладающих ослабленной вирулентностью для человека, но содержащих полноценный набор антигенов (например, вирус коровьей оспы), и из искусственных (аттенуированных) штаммов микроорганизмов. К живым В. можно отнести также векторные В., полученные генно-инженерным способом и представляющие собой вакцинный штамм, несущий ген чужеродного антигена (например, вирус оспенной вакцины со встроенным антигеном вируса гепатита В).  
Неживые В. подразделяют на молекулярные (химические) и корпускулярные. Молекулярные В. конструируют на основе специфических протективных антигенов, находящихся в молекулярном виде и полученных путем биосинтеза или химического синтеза. К этим В. можно отнести также анатоксины, которые представляют собой обезвреженные формалином молекулы токсинов, образуемых микробной клеткой (дифтерийный, столбнячный, ботулинический и др.). Корпускулярные В. получают из цельных микроорганизмов, инактивированных физическими (тепло, ультрафиолетовое и другие излучения) или химическими (фенол, спирт) методами (корпускулярные, вирусные и бактериальные вакцины), или из субклеточных над-молекулярных антигенных структур, извлеченных из микроорганизмов (субвирионные вакцины, сплит-вакцины, вакцины из сложных антигенных комплексов).  
Молекулярные антигены, или сложные протективные антигены бактерий и вирусов, используют для получения синтетических и полусинтетических вакцин, представляющих собой комплекс из специфического антигена, полимерного носителя и адъюванта. Из отдельных В. (моновакцин), предназначенных для иммунизации против одной инфекции, готовят сложные препараты, состоящие из нескольких моновакцин. Такие ассоциированные вакцины, или поливакцины, поливалентные вакцины обеспечивают иммунитет одновременно против нескольких инфекций. Примером может служить ассоциированная АКДС-вакцина, в состав которой входят адсорбированные дифтерийный и столбнячный анатоксины и коклюшный корпускулярный антиген. Существует также семейство полианатоксинов: ботулинический пентаанатоксин, противогангренозный тетраанатоксин, дифтерийно-столбнячный дианатоксин. Для профилактики полиомиелита применяют единый поливалентный препарат, состоящий из аттенуироваиных штаммов I, II, III серотипов (сероваров) вируса полиомиелита.  
Насчитывается около 30 вакцинных препаратов, применяемых с целью профилактики инфекционных болезней; примерно половина из них живые, остальные инактивированные. Среди живых В. выделяют бактерийные – сибиреязвенную, чумную, туляремийную, туберкулезную, против Ку-лихорадки; вирусные – оспенную, коревую, гриппозную, полиомиелитную, паротитную, против желтой лихорадки, краснухи. Из неживых В. применяют коклюшную, дизентерийную, брюшнотифозную, холерную, герпетическую, сыпнотифозную, против клещевого энцефалита, геморрагических лихорадок и другие, а также анатоксины – дифтерийный, столбнячный, ботулинический, газовой гангрены.  
Основным свойством В. является создание активного поствакцинального иммунитета, который по своему характеру и конечному эффекту соответствует постинфекционному иммунитету, иногда отличаясь от него лишь количественно. Вакцинальный процесс при введении живых В. сводится к размножению и генерализации аттенуированного штамма в организме привитого и вовлечению в процесс иммунной системы. Хотя по характеру поствакцинальных реакций при введении живых В. вакцинальный процесс и напоминает инфекционный, однако он отличается от него своим доброкачественным течением.  
Вакцины при введении в организм вызывают ответную иммунную реакцию, которая в зависимости от природы иммунитета и свойств антигена может носить выраженный гуморальный, клеточный или клеточно-гуморальный характер.  
Эффективность применения В. определяется иммунологической реактивностью, зависящей от генетических и фенотипических особенностей организма, от качества антигена, дозы, кратности и интервала между прививками. Поэтому для каждой В. разрабатывают схему вакцинации. Живые В. обычно используют однократно, неживые – чаще двукратно или трехкратно. Поствакцинальный иммунитет сохраняется после первичной вакцинации 6–12 мес. (для слабых вакцин) и до 5 и более лет (для сильных вакцин); поддерживается периодическими ревакцинациями. Активность (сила) вакцины определяется коэффициентом защиты (отношением числа заболеваний среди непривитых к числу заболевших среди привитых), который может варьировать от 2 до 500. К слабым вакцинам с коэффициентом защиты от 2 до 10 относятся гриппозная, дизентерийная, брюшнотифозная и др., к сильным с коэффициентом защиты от 50 до 500 – оспенная, туляремийная, против желтой лихорадки и др.  
В зависимости от способа применения В. делят на инъекционные, пероральные и ингаляционные. В соответствии с этим им придается соответствующая лекарственная форма: для инъекций применяют исходные жидкие или регидратированные из сухого состояния В.; пероральные В. – в виде таблеток, конфет (драже) или капсул; для ингаляций используют сухие (пылевые или регидратированные) вакцины. В. для инъекций вводят накожно (скарификация), подкожно, внутримышечно.  
Наиболее просты в изготовлении живые В., так как технология в основном сводится к выращиванию аттенуированного вакцинного штамма с соблюдением условий, обеспечивающих получение чистых культур штамма, исключение возможностей загрязнения другими микроорганизмами (микоплазы, онковирусы) с последующей стабилизацией и стандартизацией конечного препарата. Вакцинные штаммы бактерий выращивают на жидких питательных средах (гидролизаты казеина или другие белково-углеводные среды) в аппаратах – ферментаторах емкостью от 0,1 м³ до 1–2 м³. Полученная чистая культура вакцинного штамма подвергается лиофильному высушиванию с добавлением протекторов. Вирусные и риккетсиозные живые В. получают выращиванием вакцинного штамма в эмбрионах кур или перепелов, свободных от вирусов лейкоза, либо в культурах клеток, лишенных микоплазм. Используют или первично-трипсинизированные клетки животных или перевиваемые диплоидные клетки человека. Живые аттенуированные штаммы бактерий и вирусов, применяемые для приготовления живых В., получены, как правило, из природных штаммов путем их селекции или пассажей через биологические системы (организм животных, эмбрионы кур, культуры клеток, питательные среды).  
В связи с успехами генетики и генетической инженерии появились возможности целенаправленного конструирования вакцинных штаммов. Получены рекомбинантные штаммы вируса гриппа, а также штаммы вируса вакцины со встроенными генами протективных антигенов вируса гепатита В. Инактивированные корпускулярные бактериальные В. или цельновирионные инактивированные В. получают соответственно из культур бактерий и вирусов, выращенных на тех же средах накопления, что и в случаях получения живых вакцин, и затем подвергнутых инактивации нагреванием (гретые вакцины), формалином (формолвакцины), ультрафиолетовым излучением (УФ-вакцины), ионизирующим излучением (радиовакцины), спиртом (спиртовые вакцины). Инактивированные В. ввиду недостаточно высокой иммуногенности и повышенной реактогенности не нашли широкого применения.  
Производство молекулярных В. – более сложный технологический процесс, т. к. требует извлечения из выращенной микробной массы протективных антигенов или антигенных комплексов, очистки и концентрирования антигенов, введения в препараты адъювантов. Выделение и очистка антигенов с помощью традиционных методов (экстракции трихлоруксусной кислотой, кислотного или щелочного гидролиза, ферментативного гидролиза, высаливания нейтральными солями, осаждения спиртом или ацетоном) сочетаются с применением современных методов (скоростного ультрацентрифугирования, мембранной ультрафильтрации, хроматографического разделения, аффинной хроматографии, в т.ч. на моноклональных антителах). С помощью этих приемов удается получать антигены высокой степени очистки и концентрирования. К очищенным антигенам, стандартизированным по числу антигенных единиц, с целью повышения иммуногенности добавляют адъюванты, чаще всего сорбенты-гели (гидрат окиси алюминия и др.). Препараты, в которых антиген находится в сорбированном состоянии, называют сорбированными или адсорбированными (дифтерийный, столбнячный, ботулинический сорбированные анатоксины). Сорбент играет роль носителя и адъюванта. В качестве носителя в синтетических вакцинах предложены всевозможные полимеры.  
Интенсивно разрабатывается генно-инженерный способ получения протективных белковых антигенов бактерий и вирусов. В качестве продуцентов используют обычно эшерихии, дрожжи, псевдомонады со встроенными в них генами протективных антигенов. Получены рекомбинантные штаммы бактерий, продуцирующие антигены возбудителей гриппа, коклюша, кори, герпеса, гепатита В, бешенства, ящура, ВИЧ-инфекции и др. Получение протективных антигенов генно-инженерным способом целесообразно в том случае, когда выращивание микробов связано с большими трудностями или опасностями, или когда трудно извлекать антиген из микробной клетки. Принцип и технология получения В. на основе генно-инженерного способа сводятся к выращиванию рекомбинантного штамма, выделению и очистке протективного антигена, конструированию конечного препарата.  
Препараты В., предназначенные для иммунизации людей, проверяют на безвредность, реактогенность и иммуногенность. Безвредность включает проверку на лабораторных животных и других биологических системах токсичности, пирогенности, стерильности, аллергенности, тератогенности, мутагенности препарата В. Реактогенность, т.е. побочные местные и общие реакции на введение В., оценивают на животных и при прививках людей. Иммуногенность проверяют на лабораторных животных и выражают в иммунизирующих единицах, т.е. в дозах антигена, защищающих 50% иммунизированных животных, зараженных определенным числом инфицирующих доз патогенного микроба или токсина. В противоэпидемической практике эффект вакцинации оценивают по соотношению инфекционной заболеваемости в привитых и непривитых коллективах. Контроль В. осуществляют на производстве в отделах бактериологического контроля и в Государственном научно-исследовательском институте стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасовича по разработанной и утвержденной МЗ СССР нормативно-технической документации.  
Вакцинопрофилактика занимает значительное место в борьбе с инфекционными болезнями. Благодаря вакцинопрофилактике ликвидирована оспа, сведена к минимуму заболеваемость полиомиелитом, дифтерией, резко снижена заболеваемость корью, коклюшем, сибирской язвой, туляремией и другими инфекционными болезнями. Успехи вакцинопрофилактики зависят от качества вакцин и своевременного охвата прививками угрожаемых контингентов. Большие задачи стоят по совершенствованию В. против гриппа, бешенства, кишечных инфекций и других, а также по разработке В. против сифилиса, ВИЧ-инфекции, сапа, мелиоидоза, болезни легионеров и некоторых других. Современные иммунология и вакцинопрофилактика подвели теоретическую базу и наметили пути совершенствования В. в направлении создания очищенных поливалентных адъювантных синтетических В. и получения новых безвредных эффективных живых рекомбинантных вакцин.  
 
Список использованной литературы  
1. Библиогр.: Биотехнология, под ред. А.А. Баева, М., 1984;  
2. Биотехнология. Принципы и применение, под ред. И. Хиггинса и др., пер. с англ, М., 1988.  
3. Бургасов П.Н. Состояние и перспективы дальнейшего снижения инфекционной заболеваемости в СССР, М., 1987;  
4. Воробьев А.А. и Лебединский В.А. Массовые способы иммунизации, М., 1977;  
5. Гапочко К.Г. и др. Вакцины, поствакцинальные реакции и функциональное состояние организма привитых, Уфа, 1986;  
6. Жданов В.М., Дзагуров С.Г. и Салтыков Р.А. Вакцины, БМЭ, 3-е изд., т. 3, с. 574, М., 1976;  
7. Мертвецов Н.П., Беклемишев А.Б. и Савич И.М. Современные подходы к конструированию молекулярных вакцин, Новосибирск, 1987;  
8. Петров Р.В. и Хаитов Р.М. Искусственные антигены и вакцины, М., 1988

1

Гриппозная вакцина

Главная / О красоте / Медицинский словарь

Общеизвестно большое социально-экономическое  значение гриппа, который, периодически распространяясь по странам и континентам земного шара, в сравнительно сжатые сроки поражает миллионы людей, нанося не только вред здоровью населения, но и существенный экономический ущерб. Неудивительно, что поиск эффективных вакцин для специфической профилактики гриппа и разработка рациональной системы их применения являются одной из наиболее актуальных задач медицинской науки и практики здравоохранения. Если к тому же учесть способность вируса гриппа изменять свою антигенную структуру, вероятнее всего под влиянием формирующегося после очередных эпидемий иммунитета населения или, как говорят вирусологи, осуществлять антигенный дрейф путем смены одного, а то и двух поверхностных антигенов (гемагглютинина и нейраминидазы), то становится понятным, почему в нашей стране применяется несколько живых и убитых гриппозных вакцин. Наличие ряда вакцинных препаратов создает условия для более гибкой тактики иммунопрофилактики гриппа в преддверии ожидаемых эпидемий.  
 
Живые гриппозные вакцины издавна широко применяются в нашей стране. В настоящее время используются две живые вакцины, технология производства и способы применения которых различаются.  
 
Живая гриппозная аллантоисная вакцина служит для иммунопрофилактики взрослых в возрасте старше 16 лет и готовится из аттенуированных штаммов вируса типа А или В. Степень аттенуации, достигаемой путем пассажей вируса на куриных эмбрионах, полноценность его антигенной структуры, биологическая активность, безвредность, а также реактогенность и иммуногенность для человека регламентированы специальной инструкцией по подготовке вакцинных штаммов. Только при условии соответствия перечисленных свойств аттенуированного штамма требованиям этой инструкции он используется для производства вакцины.  
 
Из специальных хозяйств получают партию куриных эмбрионов 10-11-дневного возраста, обжигают поверхность яиц спиртом, обрабатывают йодом и заражают 1000 заранее оттитрованных эмбриональных инфекционных доз вакцинного штамма. Такую дозу в объеме 0,1 мл вводят шприцем в аллантоисную полость, затем яйца инкубируют в течение 48-72 ч при 33-35°С, с помощью овоскопии отбирают жизнеспособные эмбрионы, охлаждают при 4°С в течение 18-24 ч, после чего, соблюдая условия стерильности, отсасывают вируссодержащую аллантоисную жидкость. Затем ее стабилизируют путем добавления равного объема 10% раствора пептона, вводят в качестве консерванта антибиотики (неомицин и микостатин - соответственно 500 и 200 ед. на 1 мл) и разливают в ампулы. После лиофилизации высушенную вакцину контролируют на:  
 
-стерильность (недопустимо наличие посторонних микроорганизмов);  
 
- биологическую активность;  
 
- безвредность ;  
 
- специфичность;  
 
- физические свойства (таблетка должна иметь вид пористой массы с желтоватым оттенком, легко и полностью растворяться, а остаточная влажность не должна быть выше 3%);  
 
- реактогенность и иммуногенность для людей.  
 
Таким образом, эта вакцина не подвергается специальным процедурам очистки и концентрации, что во многом определяется способом ее применения.  
   
Перед использованием таблетку растворяют в указанном в инструкции объеме дистиллированной или кипяченой воды, охлажденной до комнатной температуры. Применяется вакцина троекратно с интервалом 2- 3 недели интраназальным путем с помощью специального распылителя; введение ее с помощью иных приспособлений (пипеток и т. п.) зачастую снижает эффективность прививок.  
 
Разовая прививочная доза содержится в 0,5 мл растворенного препарата. Так как препарат выпускается в виде двух моновакцин типа А и В, то при необходимости одновременной иммунизации против гриппа А и В прививаемому вводят по 0,25 мл вакцины каждого типа, не превышая ранее указанной величины объема разовой прививочной дозы.  
 
Срок годности вакцины при условии соблюдения режимов ее правильной транспортировки и хранения в сухом темном месте при 2-4° равен 1 году.  
 
Живая гриппозная тканевая вакцина в отличие от ранее описанной живой аллантоисной вакцины служит для иммунопрофилактики гриппа как взрослых, так и детей в возрасте старше 1 года. Эта вакцина применяется энтерально - через рот, что несколько упрощает проведение массовых прививок.  
 
Принципы технологии получения этой вакцины следующие. С соблюдением условий стерильности получают почки 19-дневных куриных эмбрионов; измельченную с помощью вакуума почечную ткань взвешивают в специальной среде № 199, содержащей 2% сыворотки крови крупного рогатого скота, в случае инокуляции вирусом типа В и заражают аттенуированным вакцинным штаммом вируса типа А или В, свойства которого отвечают ранее перечисленным требованиям специальной инструкции. Затем сосуды с суспензией зараженных клеток помещают в роллерную установку, где они вращаются со скоростью 4-6 об/мин. После инкубирования вируссодержащую жидкость собирают, стабилизируют добавлением сорбита и желатина до концентрации соответственно 5 и 2,5%, разливают во флаконы и лиофилизируют. После этого препарат контролируют на:  
 
- стерильность;  
 
- физические свойства;  
 
- безвредность;  
 
- полноценность антигенной структуры;  
 
- биологическую активность;  
 
- реактогенность и иммуногенность для людей.  
 
Если результаты контроля соответствуют перечисленным требованиям, вакцина может использоваться, в частности, для профилактических прививок, которые проводят за 2 месяца до ожидаемого увеличения заболеваемости троекратно с интервалами в 2-3 недель.  
 
Перед употреблением вакцину, выпускаемую во флаконах по 30 мл, растворяют указанным в инструкции количеством дистиллированной или охлажденной до комнатной температуры кипяченой воды до первоначального (до сушки) объема. Разовая прививочная доза дивакцины против типа А и В в зависимости от возраста прививаемых колеблется в пределах 0,5-2 мл. Вводится дивакцина через рот с помощью пипетки или шприца без иглы.  
 
Срок годности правильно транспортировавшейся и хранившейся в сухом затемненном месте при 2-4°С вакцины 1 год.  
 
Убитые гриппозные вакцины издавна применяются для иммунопрофилактики гриппа во многих странах мира. В последнее время и в нашей стране широко используются два вида убитых корпускулярных (из целых вибрионов) вакцин, отличающихся по технологии очистки и концентрации.  
 
Гриппозная хроматографическая инактивированная вакцина. В производстве этой вакцины для получения больших объемов вируссодержащего материала 10-12-дневных куриных эмбрионов, получаемых из специальных хозяйств, в аллантоисную полость помещают 0,3 мл взвеси полноценного по биологическим свойствам неаттенуированного штамма вируса гриппа с избранной антигенной структурой и инкубируют 48 ч при 34-37°С (вирус типа А) или 72 ч при 32-35°С (вирус типа В). Затем после охлаждения при 4°С в течение 1 суток яйца с жизнеспособными эмбрионами вскрывают, вируссодержащую аллантоисную жидкость отсасывают, собирают во флаконы или бутыли и после взятия пробы на стерильность добавляют мертиолат в соотношении 1:10 000. Вируссодержащую жидкость с консервантом можно длительно хранить при 4°С.  
 
Предварительная очистка и концентрация препарата в зависимости от содержания вируса осуществляется с помощью 1-7% суспензии формалинизированных куриных эмбрионов. При этом используется способность вирусов гриппа, обладающих особым антигеном - гемагглютинином, при 2-4°С за 16-18 ч практически полностью адсорбироваться на эритроцитах. Затем отделяют несколько раз вирусы от эритроцитов путем элюции - отмывания вирусов физиологическим раствором в термостате при встряхивании. В конечном итоге получают осадок освобожденных от вирусов эритроцитов и практически чистую взвесь вирусных частиц в физиологическом растворе.  
 
Окончательная очистка этой взвеси с параллельным увеличением концентрации вирусных частиц достигается путем ее фильтрации через хроматографические колонки специально подготовленными гранулами микропористого натриево-борсиликатного стекла. Способность этого стекла к избирательной фильтрации обусловлена тем, что при подогреве до 450-600°С оно расслаивается на двуокись кремния и борнокислого натрия, выделяющегося в виде мельчайших диффузно расположенных капель, размеры которых возрастают по мере увеличения времени и температуры нагревания. После охлаждения борнокислый натрий растворяют, протравливая стеклокислотой, и на месте капель остаются поры желаемого размера. Один грамм такого стекла содержит до 2000 км поровых канальцев. В полученном фильтрате вирусы инактивируют ультрафиолетовыми лучами в специальной установке и практически готовую вакцину после добавления 0,2% альбумина (наполнитель) разливают в ампулы или флаконы.  
 
После этого вакцину контролируют на:  
 
- стерильность, в том числе на полноту инактивации вируса гриппа;  
 
- физические свойства;  
 
- безвредность;  
 
- содержание белка;  
 
- специфическую активность;  
 
- реактогенность и иммуногенность для людей.  
 
По итогам контрольных исследований решается вопрос о возможности передачи данной серии вакцины в практику.  
 
Выпускается вакцина в виде двух монопрепаратов типа А или В в ампулах по 0,5 мл и флаконах по 20-100 мл. Срок годности правильно транспортирующейся (самолетом или с нарочным) и хранящейся в сухом, затемненном месте при 2-4°С вакцины 1 год.  
 
Применяется эта вакцина для прививок взрослым в возрасте от 18 лет. Вакцину при прививках населению вводят однократно шприцем или безыгольным инъектором внутрикожно в объеме 0,2 мл (до 320 ME) или подкожно в объеме 0,5 мл (до 800 ME) при вакцинации доноров. В процессе контролируемых эпидемиологических опытов установлено, что приведенные прививочные дозы обеспечивают формирование поствакцинального иммунитета, достаточного для защиты от гриппа более 70% привитых во время эпидемий, вызванных вирусам, антигенная структура которого тождественна структуре вакцинного штамма.  
 
Гриппозная градиентная инактивированная вакцина. При изготовлении этой вакцины все этапы технологического процесса, связанные с получением больших объемов вируссодержащего материала, принципиально не отличаются от таковых при производстве хроматографической вакцины. Действительно, в той же последовательности осуществляется подготовка и проверка свойств посевного штамма неаттенуированного вируса гриппа, заражение его заданными дозами крупной партии куриных эмбрионов и, наконец, сбор вируссодержащей аллантоисной жидкости. Правда, в последнюю сразу же добавляют не мертиолат, а формалин и сульфат магния, которые выполняют одновременно функцию консерванта и агента, обеспечивающего инактивацию вируса.  
 
Однако дальнейший процесс очистки и концентрации производится совершенно иначе. Так, вначале осуществляется предварительная очистка (осветление) вируссодержащей жидкости путем ее "мягкого" центрифугирования со скоростью 8000-12 000 об/мин при температуре 4-6°С. И лишь после этого производится окончательная очистка и концентрация осветленной аллантоисной жидкости путем проточного центрифугирования в градиенте плотности сахарозы со скоростью 33 000-35 000 об/мин и последующего изоплотностного центрифугирования в течение 1-2 ч при 75 000 g. Затем градиент плотности сахарозы вытесняется стерильным фосфатным буферным раствором, фракции градиента собирают в стерильные флаконы, после чего отбирают те из них, которые содержат 35-46% сахарозы и обладают гемагглютинирующей активностью не менее 16 000 гемагглютинирующих единиц (ГАЕ).  
 
Отобранные фракции объединяют, разводят тем же буферным раствором до 16 000-64 000 ГАЕ и выдерживают при температуре 4-6°С 5-7 суток, в течение которых происходит полная инактивация вируса гриппа под действием ранее добавленного формалина. После контроля полноты инактивации полуфабрикат разводят фосфатным буферным раствором до 20 000- 40 000 ГАЕ и стерилизуют путем фильтрования в специальной установке под давлением. Профильтрованный материал (по сути дела готовую вакцину) разливают во флаконы, а при необходимости в ампулы и контролируют, подобно тому как контролируют хроматографическую гриппозную инактивированную вакцину, что уже было описано ранее. Если результаты контроля вакцины положительны, она выпускается для практического применения.  
 
Срок годности вакцины при правильной транспортировке и хранении в сухом затемненном месте при 2- 8°С 1 год.  
 
Вакцину вводят внутрикожно в объеме 0,1 мл.  
 
Основными противопоказаниями к введению инактивированных гриппозных вакцин являются повышенная температура тела, острые инфекционные и системные заболевания, аллергозы, в том числе идиосинкразия к яйцам кур.  
 
Существуют разные мнения о имеете живых и убитых вакцин в системе иммунопрофилактики гриппа. С учетом простоты патогенетически обоснованного метода иммунизации, а также ряда технологических и экономических особенностей производства потенциальные возможности живых гриппозных вакцин чрезвычайно высоки. Эффективность массовых прививок этими вакцинами несомненно существенно возрастет после усовершенствования техники иммунизации с гарантированной аппликацией прививочной дозы и технологии получения вакцинных штаммов, которая должна обеспечить возможность своевременного производства и применения препаратов, изготовленных на основе аттенуированных штаммов вируса с антигенной структурой, тождественной структуре эпидемических штаммов вирусов гриппа, иными словами, штаммов, вызывающих развитие эпидемий гриппа. Не исключено, что именно возможность оперативного получения убитых гриппозных вакцин из не требующих аттенуации эпидемических штаммов вируса гриппа, а также методика их введения, гарантирующая аппликацию строго установленной оптимальной прививочной дозы, а следовательно и формирование напряженного поствакцинального иммунитета, определили широкое применение этих вакцин, эффективность которых не вызывает сомнений.

12.  
    Разновидности вакцин и новые технологии их получения.

 
 
 
В определённые сезоны года, в определённых нестандартных ситуациях, состояние  нашей иммунной системы не справляется  со всеми поставленными задачами. Это связано со многими причинами: распространяющимися массовыми  эпидемиями, переездом в другие климатические  зоны, изменением санитарных условий  существования;- поэтому нужен способ, помогающий бороться организму с  опасными инфекционными агентами. Одним  из таких средств и является вакцинопрофилактика - мощное оружие против легкораспространяющихся  болезней, для повышения временной  избирательной резистентности организма. Например, в случае с корью или  ветрянкой, сибирскрй язвой или  бешенством, бруцеллёзом и др., источником инфекции которых являются как люди, так и животные. Люди работающие в сферах обеспечения и нераспространения  болезней передающихся от животных к  человеку должны быть обязательно провакцинированы. Если же заболевание передается от человека к человеку, то наличие  иммунитета даже у части работников группы риска способствует предотврашению распространения заболевания. Цель вакцинации работников группы риска  и ветеринарных врачей – создание специфической невосприимчивости  к инфекции, обусловленной наличием высокого уровня антител и популяций  иммуннокомпетентных клеток, которые  при повторном контакте с антигеном  быстро реагируют. Иммунизация как  первичный контакт с антигеном  должна оставаться безвредной. Тем  более, что вакцинация в зрелом возрасте не приносит особого вреда здоровью и уже сформировавшейся иммунной системе. 
 
Примером могут служить рекомендации министерства Здравоохранения Великобритании по вакцинации определенных груп риска  
 
1. Персонал медицинских учреждений

•  
  Врачи
•  
  Стоматологи
•  
  Стоматологи-гигиенисты
•  
  Медицинские сестры
•  
  Акушерки
•  
  Студенты
•  
  Практиканты
•  
  Персонал наркологических и психиатрических лечебных заведений

 
2. Технический персонал 

•  
  Работники моргов
•  
  Лаборанты, работающие с пробами крови
•  
  Лаборанты-патологоанатомы
•  
  Обслуживающий персонал

 
3. Другие категории граждан 

•  
  Лица, отбывающие на долгий срок в страны Африки, Дальнего и Ближнего Востока
•  
  Больные гемофилией
•  
  Больные, страдающие хронической почечной недостаточностью
•  
  Лица, ведущие беспорядочную половую жизнь
•  
  Мужчины-гомосексуалисты
•  
  Проститутки
•  
  Наркоманы
•  
  Лица, имеющие тесный контакт с больными и носителями вируса
•  
  Дети матерей-носителей вируса
•  
  Лица, отбывающие длительные сроки заключения

 
Категории лиц, перечисленные выше, могут находиться в непосредственном контакте с инфицированной кровью или  биологическими жидкостями и относятся  к группе риска. Вакцинации подлежат лица, относящиеся к категориям 1,2,3. Такой порядок рекомендован Министерством  здравоохранения Великобритании. Для  лиц категории 4 вопрос о вакцинации решается в соответствии со степенью риска инфекции. Работодателям в  Великобритании предложено принять  меры по предупреждению инфицирования  персонала в соответствии с Правилами  Контроля Веществ, Опасных для Здоровья (КВОДЗ). Правилами КВОДЗ на учреждение и его персонал возлагается обязанность  предупреждения прямой или опосредованной опасности подвергнуться воздействию  вредных веществ на рабочем месте  для всех сотрудников. В соответствии с правилами КВОДЗ веществами, опасными для здоровья, могут считаться  любые вещества, оказывающие пагубное влияние на здоровье человека. Правилами  КВОДЗ на работодателей также  возложена обязанность информировать  работников о возможной опасности  для здоровья при контакте с вредными веществами, организовывать соответствующий  инструктаж и обучение персонала. 
 
В последние десятилетия в средствах массовой информации, как в России, так и за рубежом, увеличилось количество публикаций, в которых высказывается сомнение безопасности вакцинации потому, что авторы вакцин никогда не утверждали, что их биопрепараты совершенно и полностью безвредны и безопасны. Это может быть связано с целым рядом причин. Прежде чем наступать на инфекцию, следует спросить у населения: хотят ли люди идти по этому пути? Известны ли им все «за» и «против»? Можно отметить недостаточную информированность населения или отсутствие вообще какой-либо информации о применяемых в настоящее время вакцинных препаратах, их безопасности, эффективности, о возможных побочных реакциях на введение вакцины. Следующей серьезной причиной можно назвать низкий авторитет врачей, участвующих в процессе вакцинации, а также незнание родителями своих прав и обязанностей. Однако ответ на вопрос о необходимости вакцинопрофилактики детей и групп риска, населения пенсионного возраста, во время массовых вирусных инфекций, в современных условиях может быть только однозначно утвердительным. 
 
Среди вакцин, применяемых восновном с целью активной иммунизации и профилактики инфекционных болезней, известно несколько групп этих лекарственных биопрепаратов: антибактериальные и противовирусные.  
 
- живые вакцины; 
 
- убитые (инактивированные) вакцины;  
 
- химические; 
 
- рекомбинантные;  
 
- анатоксины;  
 
- вакцины с искусственными адьювантами; 
 
- ассоциированные (комплексные) вакцинные препараты.  
 
1. Живые вакцины - аттенуированные (ослабленные) штаммы вирусов или бактерий. Аттенуированные - ослабленные по своей вирулентности (инфекционной агрессивности) вакцины, искусственно генетически-модифицированные человеком или «подаренные» природой, изменившей их свойства в естественных условиях. Живые вакцины изготавливают на основе аттенуированных штаммов со стойко закрепленной авирулентностью. Они создают, как правило, временный напряженный иммунитет, сходный с постинфекционным. Примером этого может служить осповакцина. Другая более распространенная проблема состоит в том, что в вакцинах используются живые вирусы. Живые вирусы используют в вакцинах потому, что они ослаблены последовательным прохождением через среды. Эти ослабленные вирусы, вводятся в организм с целью подтолкнуть организм к напряжённой иммунной атаке. 
 
С этим связаны две проблемы. 
 
Первая состоит в том, что, как мы знаем, во многих случаях вирусы ускользают от воздействия несформированной детской иммунной системы и остаются в организме человека на протяжении всей его жизни. Вскрытия показывают, что у 20% исследуемых в мозге содержатся живые вирусы кори, у 45% эти вирусы содержатся в других органах. Подобные находки были сделаны у детей, страдающих аутизмом. При этом обнаруженный вирус кори был генетически идентичен вирусу, используемому в вакцинах. 
 
Другая проблема связана с тем, что большинство обнаруженных вирусов оказались мутировавшими. В различных органах одного и того же человека были обнаружены вирусы с различными изменениями. Эти факты были тайной, которую не предавали огласке. Эти ослабленные вирусы подвергаются мутации, которая связана с наличием свободных радикалов в тканях и органах, превращаясь в опасные болезнетворные микроорганизмы. Недавние исследования подтвердили это страшное открытие. Действительно, большой процент страдающих болезнью Альцгеймера имеют в головном мозге живые вирусы, в отличие от здоровых людей. 
 
Введённые в организм в первые дни жизни, живые вирусы не могут быть удалены. Поскольку эти вирусы длительно остаются в организме, они будут подвергаться воздействию свободных радикалов, количество которых будет увеличиваться в случаях болезни и с возрастом. Именно свободные радикалы заставляют вирусы мутировать. Вирусы могут присутствовать в мозге или других органах тела, медленно и незаметно повреждая головной или спинной мозг, или вызывая внезапную опасную болезнь, причины которой трудно установить. Следует избегать вакцин, содержащих живые вирусы! 
 
Значительное количество исследований убедительно показало, что вакцины, содержащие живые вирусы, несут в себе особый риск, который состоит в том, что у значительного количества детей вирусы остаются в организме, и в том, что свободные радикалы могут заставить латентные вирусы генетически изменяться, превращаясь в болезнетворные агенты. Поскольку мозг ребёнка быстро развивается в период с третьего триместра беременности до двух лет, он подвергается серьёзному риску из-за безумной вакцинальной политики. 
 
Это было показано недавним переходом от использования живой полиовакцины к убитой. Все случаи заболевания полиомиелитом в развитых странах, вызывались самой вакциной. Это было хорошо известно с самого начала. Наконец, жизненно важно, чтобы каждый ребёнок до того момента, как ему будут сделаны прививки, получал полноценное питание, витамины и макро-микроэлементы. Среди детей, которых кормят грудью, поствакцинальных осложнений намного меньше. Только вот к этой категории никак не относятся дети, получающие вакцины в однодневном возрасте. Уверен, что каждый разумный человек увидит, сколько существует противоречий не обеспечивающих условия вакцинации грудных детей. 
 
Все вакцины без исключения подавляют иммунитет, то есть они ослабляют иммунную деятельность новорожденного, так как для выработки специфического иммунитета необходимо минимум 5-7 дней. Химические вещества, содержащиеся в вакцинах, ослабляют иммунную систему; содержащиеся в вакцинах вирусы, чужеродные ДНК и РНК из животных тканей ослабляют иммунитет. Toraldo и др. обнаружили, что хемотаксис и метаболизм полиморфноядерных нейтрофилов были значительно снижены после вакцинации, и в течение нескольких месяцев не возвращалась к норме. Другими показателями ослабления иммунной системы являются: снижение жизнеспособности лимфоцитов, гиперсегментация нейтрофилов, пониженное содержание белых кровяных телец. Все вакцины в определённой степени разрушают иммунитет, и это неравноценный обмен, на который мы ставим здоровье наших детей. Медицинская теория утверждает, что мы получаем иммунитет к одной болезни ценой небольшого снижения сопротивляемости. Но я повторяю, что мы обмениваем ослабление всей иммунной системы (которая является единственной защитой против всех известных болезней, вызываемых миллионами болезнетворных организмов), на временный иммунитет к одной, как правило, безобидной детской болезни. Таким образом, мы идем на совершенно невыгодную сделку. По словам Mullins, "мы меняем свинку и корь на рак и СПИД". 
 
Такой обмен не стоит того, чем мы рискуем. А рискуем мы получить гораздо больше болезней, чем мы "предотвращаем", согласившись на прививки. Далее вы увидите сами, что в действительности мы ничего не предотвращаем. Хорошим примером может служить ежегодный ритуал прививок против гриппа. Одна прививка может содержать только две или три разновидности вируса гриппа, отсюда и названия: азиатский, японский, индийский грипп или свиной грипп. Но в действительности существуют тысячи, а может быть и миллионы вирусов, вызывающих грипп. Делать прививку от одного или двух из них не имеет смысла - многие заболевают гриппом и после прививки. Мы не знаем, какая разновидность гриппа поразит нас в том или иному году и в том или ином месте. Поэтому лучший способ не заболеть гриппом - это рационально питаться и получать все необходимые организму витамины и минералы. Только при помощи правильного питания можно создать и поддерживать сильную иммунную систему, в то время как вакцины разрушают естественный иммунитет. Учёными была выявлена и доказана связь между вакцинами и СПИДом, а также другими иммунодефицитными расстройствами. 
 
2. Инактивированные вакцины - такие препараты, где инфекционное начало может быть убито химическими веществами, изменением температурного режима, либо криорадиационной стерилизацией с программированным замораживанием. Существуют и более современные методы инактивации инфекционных агентов. К инактивированным относятся корпускулярные (цельновирионные) вакцины, которые готовят из микроорганизмов, обладающих максимально выраженной иммуногенностью, инактивированные (убитые) путем физического (прогревание, УФ-лучи) или химического воздействия (формалин, фенол, спирт и др).  
 
3. Химические вакцины получают путем выделения из бактериальных клеток компонентов, соответствующих протективным антигенам. По сравнению с убитыми и живыми биопрепаратами, химические вакцины менее реактогенны.  
 
4. Анатоксины представляют собой бактериальные экзотоксины, обезвреженные путем длительной обработки (в течение 30 дней) 0,3 % раствором формалина при повышенной температуре (37°С). При этом анатоксин утрачивает токсичность, но сохраняет способность индуцировать синтез антитоксических антител.  
 
5. Рекомбинантные вакцины - это генноинженерные модифицированные вакцины. Для создания таких препаратов выделяют гены, контролирующие нужные антигенные детерминанты, переносят их в геном других микроорганизмов и клонируют их, добиваясь экспрессии этих генов в новых условиях. Затем вся эта смесь вводится в организм здоровому ребёнку.  
 
6. Вакцины с искусственными адьювантами в настоящее время представлены вакциной против гриппа с полиоксидонием.  
 
Новые технологии получения вакцин:  
 
а. Векторные вакцины. Сущность получения таких препаратов заключается во встраивании гена, кодирующего определенное биологическое соединение в вектор, после чего клоны, несущие вектор, размножаются в определенных клетках (например, дрожжах). За рубежом таким образом получены рекомбинантные вакцины против кори, гепатита А и В, японского энцефалита и др.  
 
б. Вакцины на основе трансгенных растений получают методом генной инженерии, позволяющей "внедрить" чужеродные гены почти во все технические сельскохозяйственные культуры, обеспечивая получение стабильных генетических трансформаций. С начала 1990-х годов проводятся исследования возможностей использования трансгенных растений для создания рекомбинантных антигенов. В первой модели был использован табак, затем был получен трансгенный картофель, соя, бобы, бананы. В ДНК может быть встроено до 150 чужеродных генов. По данной технологии предполагается получать оральные вакцины, то есть при употреблении в пищу таких растений, предпологается, что будет происходить иммунизация организма теми антигенами, которые трансформировали растения. 
 
в. Антиидиотипические вакцины. Это препараты, которые получают на основе моноклональных антител к идиотипам молекул специфических иммуноглобулинов. Поскольку эти вещества повторяют пространственную конфигурацию эпитопов исходного антигена, их можно использовать взамен антигена.  
 
г. Вакцины в биодеградируемых микросферах. Суть конструкции этих препаратов состоит в том, что антиген заключают в микросферу из защитных полимеров, которые в организме гидролизуются с образованием молочной и гликолевой кислот, являющихся продуктами обмена веществ. При этом можно изменять скорость распада микросфер от нескольких дней до нескольких месяцев. Разработанный по этому принципу препарат столбнячного анатоксина в настоящее время проходит клинические испытания.  
 
д. Липосомальные вакцины. Липосомы представляют собой двухслойные микропузырьки из фосфолипидов для транспортировки антигенов к антигенпрезентирующим клеткам. Применение таких вакцин позволяет добиваться снижения токсичности и удлинения срока циркуляции препарата. Установлено также, что липосомы могут быть хорошими адьювантами. Липосомальные вакцины используют в ветеринарной практике. В Швейцарии по этой технологии создана вакцина против гепатита А. Проходят испытания вакцины для парентеральной иммунизации против гриппа, кори, гепатита А, В, дифтерии, столбняка.  
 
ж. Синтетические пептидные вакцины. Изготавливают вакцины на основе синтетических пептидов, аналогичных эпитопам антигена. Использование пептидов создает возможность изготовления антигенов, трудно воспроизводимых в достаточном количестве, например паразитарных, или собственных антигенов, которые трудно распознаются, например опухолевоспецифические.  
 
Наиболее перспективными но небезопасными в настоящее время считаются вакцины, получаемые с помощью методов генной инженерии, к которым относятся векторные вакцины и препараты на основе трансгенных растений.  
 
Действующим фактором модифицированных вакцин являются изменённые генетические признаки микроорганизмов, обеспечивающие перенесение ребенком «болезни» в слабой форме с последующим приобретением непродолжительного специфического противоинфекционного иммунитета. Вакцинные варианты живых микроорганизмов - это микробы утратившие исходную патогенность, присущую активным штаммам, циркулирующим в природе. Оставаясь жизнеспособными, они вызывают образование специфической непродолжительной резистентности организма близко к той схеме, как это происходит при естественно-инфекционном процессе. Существенная оговорка и отличие состоит в том, что перенесение инфекционного заболевания естественным путем, которое может протекать в открытой или в скрытой (стертой) форме (дифтерия, полиомиелит, паротит и др.), обеспечивает, как правило, пожизненную невосприимчивость к этим болезням, чего ни в коем случае не обеспечивает переболевание искуственным путем. Штаммы микроорганизмов и вирусов постоянно изменяются в природе и они через 10-15 лет не будут соответствовать тем, против которых нас прививают. Повторное заболевание ранее перенесеной болезни, отмечаеся у лиц с ослабленным иммунитетом и лиц находящихся в тяжелых нестандартных экологических, стрессовых условиях. При вакцинации живыми вакцинами искусственно приобретенный иммунитет неустойчив и непродолжителен, для этого необходимо дополнительное неоднократное повторение вакцинации, так как в течение жизни титр защитных антител на ту или иную инфекцию постоянно снижается.  
 
Следует иметь в виду, что против дифтерии, столбняка и некоторых других бактериальных инфекций как таковых вакцин не существует, в том понимании, которое общеизвестно и общепринято. То, что среди медицинских специалистов именуется «противодифтерийной вакциной», как и против столбняка, на самом деле является анатоксином. А это значит, что антитоксический иммунитет, вырабатываемый на введение анатоксина, часто никак не влияет на циркуляцию, приживание и размножение в организме патогенного начала. Например, вакцинация дифтерийным анатоксином слабо влияет как на развитие дифтерийной палочки, так и инфекционного процесса. В этом-то и состоит основная трудность «ликвидации дифтерии». Дифтерийный возбудитель будет продолжать циркулировать среди населения, даже если предположить, что привит этим анатоксином «весь мир». Кроме того, возбудитель способен паразитировать, и исключительно в организме вакцинированного человека. Возбудитель может оставаться в организме, имеющем выраженную невосприимчивость, многие годы и иметь иммунитет к дифтерии - будь она природная, постинфекционная или послепрививочная. Источником, разносчиком и передающим началом дифтерии может быть только человек, живущий в антисанитарных условиях, с отсутствием навыков элементарной личной и общественной гигиены. Дифтерия передается контактно-бытовым путем - через ложки, чашки, игрушки, туалеты общего пользования и тд. Нереально ликвидировать дифтерию с помощью анатоксина, как это привыкли провозглашать эпидемиологи и чиновники министерства здравоохранения, что расходится с мнением специалистов и данными обзоров международной практики. Дифтерийный анатоксин обеспечивает формирование антитоксического иммунитета, который, разумеется, уступает специфической невосприимчивости, образующейся естественным путём - после перенесения болезни. Кроме того, анатоксины не предотвращают появления бактерионосительства. В настоящее время дифтерия успешно лечится антибиотиками. 
 
Ничуть не меньшая путаница отмечается и в вопросе «ликвидации» столбняка, будто бы «контролируемого вакциной» - столбнячным анатоксином. Счетается, что столбняк – достаточно редкое и специфичное заболевание. Изначально, в международной практике речь шла о недопустимости столбняка среди новорожденных. Задача вполне конкретная и реалистичная, поскольку предотвращению попадания тетануса (возбудителя столбняка) в ткани новорожденного может произойти при оказание первой помощи в родовспомогательных учреждениях как предполагается, в асептических и нестерильных условиях. «Создается впечатление, что младенец сразу попадает в антисанитарные условия, или мы живем в стране третьего мира?». Палочка столбняка относится к инфекциям с очень низким уровнем заболевания. Самое главное, на мой взгляд, что в первые дни у ребенка еще долго сохраняются материнские антитела! Общеизвестно и другое немаловажное обстоятельство: нельзя «управлять» с помощью анатоксина жизнью возбудителя столбняка в естественных условиях, поскольку он является кишечным паразитом животных, может паразитировать даже в кишечнике человека, а также чрезвычайно долго - десятки лет - находиться в почве в виде спор, высокоустойчивых к внешним воздействиям. 
 
Нельзя недоучитывать ещё одно обстоятельство - отрицательное влияние анатоксинов друг на друга в составе комплексных вакцин типа АКДС. Эта проблема стоит на повестке дня много лет, поскольку доказана антигенная конкуренция дифтерийного и столбнячного анатоксинов при совместном их введении. Введение коклюшного анатоксина «как в одном шприце, так и в раздельных инъекциях препятствует выработке иммунитета в ходе вакцинации». Во многих странах ни на производстве вакцин, ни при их контроле, ни в процессе вакцинирования установленные факты даже не упоминаются. Это и есть одно из свидетельств проведения как в развивающихся так и в развитых страх широкомасштабных экспериментов на детях! 
 
7. Рекомбинантные генно-инженерные вакцины – абсолютно новая продукция в профилактике инфекционных болезней. Примером такой вакцины является вакцина против гепатита В. Как и все новое, тем более генно-инженерное лекарственное средство, предназначенно для введения в первые часы - первые дни жизни младенца. Вакцина требует проведения продолжительных наблюдений. Я восклицаю! Где же вы антиглабалисты выкашивающие поля с генетически измененной кукурузой и соей? С самого рождения детям вводят мутирующие препараты неизвестного до конца действия. Разве это не опыты? Разве нормальный человек в здравом уме согласится подвергать соего малыша таким испытаниям с неизвестным концом? Мы настолько ещё не осведомлены?! А гавное то, что передача вируса гепатита В может состояться только через кровь и половым путем. Ну зачем младенцу делать вакцину когда заболеть гепатитом В он уж точно не сможет до момента своего полового созревания!? 
 
Как предписывает указание по применению вакцины: «Наблюдения становятся более точными и ценными, если они проводятся в период массовых компаний вакцинаций. В таких компаниях в течение короткого времени прививается большое количество детей. Появление в этот период группы определенных патологических синдромов свидетельствует, как правило, об их причинной связи с вакцинацией». В таких экспериментах и проведении «наблюдений за патологическими синдромами у детей» приходится сожалеть лишь об одном, что в подобных экспериментах не участвуют дети и внуки тех, кто эту вакцину сконструировал, сознательно распространяет и без капли сомнения насаждает. Кроме вакины «Энджерикс против гепатита В», такой же «безопасной и эффективной» заявлена противогепатитная южнокорейская вакцина, активно навязываемая все той же французской фирмой и закупленная для осуществления массовых вакцинаций. 
 
Этапы приготовления подобных вакцин:

1.  
   клонирование генов вируса, в данном случае гепатита В, обеспечивающего синтез антигена;
2.  
   введение генов в вектор-клетки-продуценты (здесь таковыми являются клетки дрожжей).
3.  
   использование клеток-продуцентов для наработки «вакцинной массы».

 
8. Комплексно-ассоциированные вакцины. Самая известная, первая вакцина - АКДС и её прочие модификации. Вторая - против кори, паротита и краснухи. Третья - против коклюша, дифтерии, столбняка и полиомиелита (сюда входит исключительно инактивированная полиовакцина). Одна из разновидностей этой вакцины не содержит коклюшную фракцию. Четвертая - совсем новая поликомпонентная - ГЕКСАВАК - 6-валентная вакцина для первичной вакцинации детей против основных детских инфекций: коклюша, дифтерии, столбняка, полиомиелита (инактивированная), гепатита В и гемофильной инфекции (Heamophilis influenza). В её состав входит коклюшная вакцина нового поколения, отличающаяся от производимой ранее. Сейчас она поставляется очень активно в разных вариантах зарубежными «благодетелями». Эта шестикомпонентная вакцина недавно рекомендована к применению в странах ЕЭС. Производителем делается заявление по поводу того, что вновь разработанная (вновь разработанная!) вакцина пока еще дорогая, и, видимо, вам здорово «повезет», если вакцинацию начнут именно с вашего ребёнка. 
 
Процесс изучения эффективности и безопасности вакцин, как и любого другого лекарственного средства, отличается большой сложностью и продолжительностью. Порой необходимо 5-10 лет только доклинических исследований и испытаний. Затем проводятся клинико-эпидемиологические испытания на взрослых. Судя по многочисленным публикациям врачей-экспериментаторов, последний этап проще всего проводить на детях - наблюдая за «патологическими синдромами», поскольку это определяет соответствующую характеристику вакцин. Генно-инженерные вакцины - это профилактические средства со многими неизвестными.