Гинекология и акушерство

 

Сперму жеребца разбавляют в 4 (1:3) раза с концентрацией в дозе не менее 3 млрд. спермиев.

 

     .3. Разбавление спермы быков ЛФРМГЖ-средой для замораживания в полипропиленовых соломинках.

 

Сухие заготовки среды вносят в  стерильную колбу, добавляют необходимый  объем прокипяченной дистиллированной воды 70 - 80 °C, растворяют, охлаждают  до 30 - 32 °C и вносят спермосан, глицерин и желток.

 

При отсутствии сухих заготовок среды компоненты стерилизуют ультрафиолетовыми лучами в бактерицидной камере в течение 15 - 20 мин., отвешивают на аналитических весах и готовят среду, как указано выше.

 

Температуру среды перед разбавлением спермы (31 +/- 1 °C) поддерживают в бактерицидной камере, термостате или в специальной водяной бане.

 

Сперму разбавляют в зависимости  от подвижности и концентрации спермиев в эякуляте (Приложение 18 - табл. 1).

 

Разбавляют сперму быков при  температуре 31 +/- 1 °C в мензурке.

 

Для постепенного охлаждения разбавленную сперму помещают в стеклянный стакан с водой температурой 31 +/- 1 °C и переносят в водяную баню с температурой воды 22 °C на 20 мин.

 

Дальнейшая технологическая обработка  спермы (расфасовка, закупорка и  раскладка в штативы) проводится при комнатной температуре.

 

Расфасованную сперму помещают в холодильник  при температуре 4 °C и выдерживают 3 - 4 ч.

 

4. Разбавление спермы быков синтетическими  средами для замораживания в  облицованных гранулах.

 

В качестве разбавителя используют среды N 1 и 2. Процесс разбавления спермы осуществляют по таблице 2 (Приложение 18) с помощью устройства (рис. 12), позволяющего дозированно вводить среды в спермоприемник по закрытой системе без соприкосновения с окружающей средой.

 

Устройство состоит из эластичной полиэтиленовой емкости для разбавителя, соединенной эластичной трубкой с патрубками цилиндра-дозатора. Верхний конец дозатора герметически закрыт соразмерным его объему эластичным колпаком из полиэтиленовой пленки. Соединительная трубка по обе стороны от дозатора пережимается пружинными зажимами (рис. 13).

 

Емкость для разбавителя представляет собой пакет из полиэтиленовой пленки толщиной 120 - 150 микрон, к которому герметически подсоединен отрезок полиэтиленовой трубки диаметром 4 - 6 мм и длиной 20 - 25 мм. В качестве емкости может быть использован описанный выше одноразовый спермоприемник.

 

Дозатор изготовляют из мерного  цилиндра, в нижнюю часть которого вваривают два небольших стеклянных патрубка для соединения с трубками.

 

В качестве колпака используется пакет из полиэтиленовой пленки, который фиксируют резиновым кольцом на открытой цилиндрической части дозатора.

 

Перед работой емкость для разбавления  стерилизуют ультрафиолетовым облучением, а дозатор с колпаком и соединительными  трубками - путем автоклавирования при 0,5 атм. в течение 30 мин. При этом свободные концы трубок закрывают чехлами из пергаментной бумаги.

 

Для разбавления спермы используют два устройства, которые заполняют  средами N 1 и 2. Устройство со средой N 1 размещают в термостате при температуре 35 °C, устройство со средой N 2 используют в условиях комнатной температуры (18 - 22 °C).

 

Непосредственно после взятия сперму разбавляют средой N 1 в соотношении 1:1 и выдерживают при комнатной  температуре (18 - 22 °C) в течение 5 - 10 мин., до окончания оценки эякулята. Затем дополнительно ее разбавляют средой N 2, имеющей комнатную температуру, до требуемой концентрации спермиев в дозе.

 

    5. Разбавление спермы быков синтетической средой для замораживания в форме гранул на фторопластовых пластинах, охлажденных жидким азотом, или блоках твердой двуокиси углерода. Для разбавления применяют лактозо-желточную среду с глицерином. Разбавленную сперму охлаждают при 2 - 5 °C в течение 3 - 4 ч. После эквилибрации проверяют на подвижность спермиев, допуская к замораживанию сперму быков с оценкой не ниже 8 баллов, затем расфасовывают по 0,1 - 0,2 мл на охлажденную пластинку из полимерного материала (фторопласт), см. п. 10.5.

 

    6. Разбавление спермы жеребцов ЛХЦЖ-средой для замораживания в форме гранул или пластин. Сперму жеребцов разбавляют синтетической ЛХЦЖ-средой в соотношении 1:3, с подвижностью спермиев не ниже 6 баллов и концентрацией 150 млн./мл.

 

Разбавленную сперму объемом не более 100 мл при высоте слоя 2,5 см в  колбе выдерживают в холодильнике 2 ч и замораживают на поверхности сухого льда или в алюминиевых пакетах в парах жидкого азота в соответствии с пунктом 10.6.

 

В зависимости от технического оснащения станций и пунктов  искусственного осеменения сельскохозяйственных животных в настоящее время применяют кратковременное хранение спермы быков, баранов, хряков и жеребцов-производителей при температуре, близкой к 0 °C (2 - 5 °C) или при температуре 16 - 20 °C.

 

1. При кратковременном хранении  сперму сохраняют: быков до 72 ч,  баранов до 24 ч при 2 - 5 °C и транспортируют в широкогорлых пищевых термосах.

     

      2. Сперму хряков-производителей сохраняют до 3 суток при температуре 16 - 20 °C, используя для хранения и транспортировки термосы-ящики, бытовые сумки-холодильники (рис. 14).

      Если сперму сохраняют при температуре 6 - 12 °C, ее разбавляют ГХЦСЖ- или ГХЦЖ-средами с желтком (30 - 40 мл на 1 л среды) и хранят в термосе со льдом.                             

 

       3. Сперму жеребцов-производителей сохраняют до 48 ч при температуре 2 - 5 °C. Перевозят ее в специальных термосах-ящиках или широкогорлых пищевых термосах.

 

.4. При упаковке ампул и флаконов  со спермой следят за правильным  размещением и укладкой их  в термосы; завертывают в вату  или специальные поролоновые  амортизаторы, которые вместе с ордером на сперму помещают в полиэтиленовые мешочки, и запаивают. Подготовленные мешочки со спермой кладут на лед термоса, а сверху на них помещают небольшое количество льда. Флаконы со спермой жеребца охлаждают постепенно, помещая в термос также лед в полиэтиленовых мешочках. Поверхность льда покрывают тонким слоем (1 - 1,5 см) ваты, на которую помещают флаконы со спермой, и закрывают крышкой.

 

5. Перевозить сперму производителей  в хозяйства можно всеми видами  транспорта через 30 - 60 мин. после ее разбавления. Если сперма доставляется в хозяйство почтой, термосы пломбируют, а снаружи прикрепляют ярлык с указанием места назначения и адреса отправителя.

 

6. При транспортировке термосы  со спермой фиксируют, ставя  их вплотную друг к другу либо заполняя пространство между ними амортизирующими прокладками из поролона или других материалов.

 

7. Для спермы хряков на период  транспортировки допускается кратковременное  (1 - 3 ч) постепенное снижение температуры  до 14 - 15 °C или повышение до 24 °C.

 

8. При температуре окружающего  воздуха -5 °C не требуется никаких  предосторожностей во время транспортировки  спермы быков и баранов-производителей; если температура ниже -5 °C, необходимо  укрыть термос поролоном или  ватным чехлом.

 

 Долговременное хранение в жидком азоте спермы быков и жеребцов-производителей.

 

Для хранения спермы быков в течение  многих месяцев или нескольких лет  без потери оплодотворяющей способности  применяют замораживание ее в  жидком азоте до -196 °C, при которой  процесс обмена веществ у спермиев практически прекращается. Метод длительного хранения требует следующих условий.

 

1. Строжайшего соблюдения установленной  технологии разбавления, охлаждения  и замораживания спермы.

 

2. Непрерывного поддержания низкой  температуры (не выше -196 °C) в течение всего срока хранения спермы. Не только повторное оттаивание и замораживание, но и небольшие колебания температуры во время хранения замороженной спермы ведут к ухудшению ее качества, а часто и к полной непригодности.

 

3. Для перевозки спермы в жидком азоте (-196 °C) применяют специальные стальные и алюминиевые двустенные сосуды с вакуумно-порошковой либо многослойно-вакуумной изоляцией. Емкость сосудов от 4 до 50 л жидкого азота (АТ-6, СДС-20, "Харьков-30" и "Харьков-34А") (рис. 15). Суточный расход жидкого азота в них колеблется от 1 до 3% в зависимости от размеров и качества изоляции.

 

.4. Длительное хранение в жидком  азоте замороженной спермы производителей  на станциях и филиалах осуществляется  в специальных хранилищах спермы  или в стационарных емкостях (типа ХБ-0,5, КВ-6202 и др.).

 

Хранится сперма в стационарных емкостях в специально закрывающихся  канистрах или пластмассовых  стаканах, которые должны быть погружены  в жидкий азот. Канистры или стаканы  имеют съемные перегородки, поэтому в них можно сделать до 4 отделений и хранить несколько эякулятов. Заполненные стаканы помещают один на другой в металлический футляр. На верхнем крае стакана имеется держатель, к которому прикрепляют этикетку с номером быка или номер футляра.

 

5. Сперма производителей с учетом их породности, классности и оценки по качеству потомства хранится в спермобанке и по мере необходимости направляется в хозяйства.

 

Сперму производителей, не получивших положительной племенной оценки по качеству потомства, списывают комиссионно согласно указанию Министерства сельского хозяйства РФ(по акту).

 

6. Транспортировать замороженную  сперму можно в тех же сосудах,  которые предназначены для последующего  ее хранения на пунктах искусственного  осеменения животных.

Чтобы при транспортировке или доливке сосуда азотом расфасованная сперма не выплывала из стакана, в нем вмонтирована поворачиваемая крышка. После поднятия стакана из горловины сосуда пинцетом поворачивают крышку в сторону и извлекают расфасованную сперму. Перекладывают сперму погруженной в жидкий азот.

 

7. Для правильной организации  обслуживания пунктов необходимо  выполнять следующие условия:

 

• правильный подбор оборудования для пунктов, сосудов Дьюара с одинаковым сроком доливки азота;

 

• в транспортном резервуаре, следующем по маршруту, должно хватить жидкого азота на сосуд, стоящий на последнем пункте, а также не должно оставаться значительного количества азота при возвращении резервуара на станцию;

 

• должны приниматься организационные меры к экономии жидкого азота;

 

• за каждым автомобилем-азотовозом, работающим по доливке сосудов на пунктах, закрепляется определенное число пунктов (сосудов).

 

В настоящее время  рекомендуются следующие методы низкотемпературного замораживания  спермы производителей.

 

Способ замораживания спермы быков-производителей в полипропиленовых соломинках.

 

1. Разбавленную сперму расфасовывают  в стерильные полипропиленовые  соломинки емкостью 0,25 мл.

 

На каждой соломинке маркировочной  машиной делают надписи, указывающие  наименование предприятия, кличку и  инвентарный номер быка, а также дату взятия спермы.

2. Для автоматического наполнения  соломинок спермой и их закупорки используют машину . В цилиндр (мензурку) наливают разбавленную сперму, а специальное устройство наполняют стерильными шариками для закупорки. Соломинки закупоривают с обоих концов: один шарик служит в качестве пробки-поршня, другой - герметизирующей пробкой.

 

В случае выхода из строя машины наполнение соломинок спермой проводят вакуумным  способом. Для этого используют соломинки  с пробкой-поршнем.

.3. Для наполнения соломинок  спермой применяют специальную  вакуумную камеру . Нужное число соломинок связывают в пачку и подвешивают к штативу вакуумной камеры, а на поддон ставят стакан со спермой. После откачивания воздуха и создания небольшого вакуума (0,92 атм.) выключают насос, поворачивая ручку, поднимают поддон со спермой, чтобы открытые концы соломинок погрузились в сперму на 4 - 5 мм. Медленно впускают воздух и поднимают поддон согласно скорости уменьшения объема спермы в стакане.

 

4. После наполнения соломинок между пробками-поршнями и спермой остается воздушный пузырек длиной 8 - 10 мм. Чтобы воспрепятствовать попаданию жидкого азота внутрь соломинок во время замораживания и хранения, пузырек удаляют в середину соломинок путем энергичного встряхивания.

 

5. На штативы соломинки устанавливают  вручную посредством счетных  реек, имеющих 125 пазов, соответствующих  расстояниям между зубцами штативов. На счетную рейку накладывают  штатив и легким движением  ладони быстро заполняют счетную  рейку. После этого штатив снимают с рейки, а соломинки остаются между зубцами штатива.

 

6. Для постепенного охлаждения  спермы в температурном интервале  от 22 до 4 °C со скоростью 0,3 - 0,5 °C в 1 мин. штативы с соломинками  помещают в пластмассовые коробки,  а в рамку на торце крышки вставляют этикетку с кличкой или номером быка.

 

Коробки ставят в специальный холодильник  для охлаждения и выдержки спермы в течение 3 - 4 ч. В холодильнике поддерживается постоянная температура 4 °C. Перед замораживанием сперму после выдержки обязательно оценивают на подвижность спермиев. Сперму с оценкой ниже 8 баллов к замораживанию не допускают.

7. Замораживают сперму в стационарном  хранилище КВ 6202 (рис. 18) в газообразном  азоте, на медном щите толщиной 1,5 - 2 мм при температуре -120 - -130 °C. Одновременно замораживают до 750 спермодоз. Цикл замораживания продолжается 5 мин.

 

Изменение температуры спермы и  испаряющегося газообразного азота  контролируют самопишущим потенциометром КСП-4 с подключенными медноконстантными  термопарами.