Гинекология и акушерство

 

8. После замораживания соломинки со спермой помещают в пластмассовые стаканы. Для перемещения соломинок используют специальный собиратель с деревянной рукояткой. Его металлическую часть охлаждают в жидком азоте до температуры -196 °C, затем просовывают через отверстие штатива и осторожно проводят вдоль него, в результате чего все соломинки ссыпаются на собиратель. После этого соломинки поворачивают и перекладывают в пластмассовые стаканы для хранения в стационарном хранилище.

 

9. При хранении и транспортировке  замороженную сперму хранят полностью погруженной в сосуд с жидким азотом (-196 °C). Для хранения спермы в стационарных хранилищах КВ 6202 применяют пластмассовые стаканы высотой 97 мм, внешним диаметром 65 мм, вмещающие до 500 соломинок .

 

Таким способом в одном хранилище помещают до 160 металлических футляров, или 320 тыс. соломинок.

 

10. Транспортируют сперму в пластмассовых  стаканах высотой 105 мм, внешним  диаметром 37 мм, вмещающих до 150 спермодоз.  В стаканы вмонтированы съемные  перегородки, позволяющие транспортировать сперму 4 быков. Вынимают транспортные стаканы из азота поднимателем из термоизоляционного материала. Вмонтированные поворачивающиеся крышки препятствуют потере спермодоз во время транспортировки.

 

 

 

 

 Замораживание спермы  быков-производителей в облицованных гранулах.

 

Для расфасовки спермы используют тонкостенную полимерную трубку диаметром 3,8 - 4 мм, с  толщиной стенки 120 микрон. Перед работой  трубку стерилизуют ультрафиолетовым облучением (лампа ПРК-2) в течение 25 мин.

 

Поступает трубка в готовых бабинах, которые вкладывают в автомат ПРЖ (рис. 20).

 

Для фиксации направления трубки во время расфасовки спермы используют направляющую рейку, один конец которой  крепят к автомату ПРЖ, а противоположный  подводят к кассете с трубкой  под углом 5 - 10° к горизонтальной плоскости.

 

Во время работы трубку протягивают  по желобу металлической рейки к  автомату ПРЖ, на свободный ее конец  надевают жесткое прижимное кольцо, после чего трубку муфты спермоприемника  соединяют с трубкой и выдавливают  в нее разбавленный эякулят. Герметичность соединения муфты с трубкой обеспечивается жестким прижимным полимерным кольцом.

 

1. С целью исключения обратного  попадания спермы из трубки  в спермоприемник заполненную  спермой трубку перекручивают  в месте соединения с муфтой и зажимают большим и указательным пальцами.

 

2. Заполненную спермой трубку  подводят к сварочному узлу  автомата ПРЖ, который автоматически  разделяет ее на спермодозы  объемом 0,25 - 0,33 мл с одновременной  герметизацией каждой дозы путем  термической сварки. При наличии специальной приставки к автомату на каждую дозу наносится маркировка.

 

Спермодозы собирают в приемный бункер автомата, откуда их переносят  в маркированные алюминиевые  тубы диаметром 40 мм, которые закрывают  поролоновыми пробками.

 

3. Заполненные тубы ввинчивают в обоймы устройства для эквилибрации и замораживания спермы (ЭКЗ)

 

Устройство помещают в холодильник (+2, +5 °C), где сперма выдерживается  в течение 4 - 6 ч при постоянном вращении обойм со скоростью 2 - 10 об./мин.

 

4. После выдержки заполненные тубами обоймы снимают с аппарата, крепят к ним стержни-держатели и переносят в сосуд, заполненный жидким азотом ("Харьков-31" или другие широкогорлые емкости). Обойму с тубами погружают в жидкий азот на максимальную глубину, чтобы он не попадал внутрь туб через верхний край.

5. Замораживание спермы длится 8 - 10 мин., после чего обойму с  тубами полностью погружают в  жидкий азот и оставляют до  проверки качества спермы.

 

6. Тубы с качественной спермой  закрывают поролоновыми пробками, отсоединяют от обоймы и переносят  в хранилище для дальнейшего  хранения, а обоймы используют  многократно для выдержки и  замораживания спермы.

 

 

 

 

При замораживании спермы быков в гранулах на фторопластовой пластине, охлажденной жидким азотом, необходимо иметь следующее оборудование :

 

• прямоугольную или цилиндрической формы теплоизолированную емкость размером примерно 30 x 40 x 30 см или широкогорлый цилиндрической формы сосуд Дьюара;

 

• фторопластовые пластины размерами 20 x 20 x 2 см, 25 x 12,5 x 1,2 или 25 x 25 x 2 см с лунками на 0,2 мл для концентрированных гранул, требующих дополнительного разбавления, или на 0,5 мл для гранул, не требующих дополнительного разбавления на пунктах;

 

• держатель пластины;

 

• контейнеры для сбора гранул и предупреждения потери их в емкости с жидким азотом;

 

• лопатки для съема гранул с пластины;

 

• колбы химические, пластмассовые или стеклянные, контейнеры емкостью 100 - 200 мл для хранения гранул в сосудах с жидким азотом;

 

• воронки для ссыпания гранул в колбы или контейнеры;

 

• корнцанги и пинцеты;

 

• кольцевидный пинцет для фиксации и переноса колб или контейнеров;

 

• фильтры из белой гигроскопической ваты для очистки жидкого азота;

 

• пластмассовые баллончики-капельницы или шприцы на 25 - 30 мл, или делительные воронки, или пипетки для расфасовки спермы в лунки пластин.

 

1. Пластину с лунками опускают  в жидкий азот и охлаждают  в течение нескольких минут,  до прекращения кипения азота.  Охлажденную пластину держателем  поднимают к верхнему краю сосуда, после испарения с нее жидкого азота поверхность пластины протирают сухим стерильным ватным тампоном, а затем посредством градуированных пипеток, шприца или разливочной машины разливают сперму в лунки. Пластина в это время имеет температуру -160 - -170 °C. При замораживании температуру пластины можно контролировать термопарой. Через несколько секунд после того, как в последней лунке сперма затвердеет, пластину опускают ближе к жидкому азоту и сперму замораживают на расстоянии 5 - 10 см от его поверхности в течение 1 - 2 мин. После этого пластину с гранулами погружают на 1 мин. в жидкий азот, где происходит дальнейшее охлаждение гранул до -196 °C и отделение их от пластины. Затем пластину поднимают из жидкого азота до верхнего уровня сосуда, сгребают гранулы в охлажденный контейнер и переносят в сосуды Дьюара на хранение.

 

2. Сперму, замороженную в гранулах, хранят в хранилищах в закрывающихся  канистрах сосудов Дьюара, заполненных  жидким азотом.

 

 

Сперму жеребцов-производителей замораживают в алюминиевых пакетах  в холодных парах азота или  в виде гранул на блоке твердой  двуокиси углерода.

 

1. При замораживании в алюминиевых  пакетах сперму разливают по 25 мл в охлажденные пакеты, закрывают,  дважды закатывая и крепко  зажимая конец губы. Толщина пакета  со спермой 4 - 5 мм.

2. При заполнении пакета спермой  и его упаковке строго следят за тем, чтобы в пакете не остался воздух, иначе при оттаивании неизбежны разрывы. Алюминиевые тубы должны быть маркированы с указанием клички жеребца, породы и даты взятия спермы.

.3. Пакеты со спермой помещают  в держатели, которые вместе  с поплавком переносят на поверхность жидкого азота.

 

Для замораживания спермы используют широкогорлые сосуды Дьюара, стационарные хранилища или контейнеры, позволяющие автоматически держать сперму на заданном расстоянии (10 - 12 мм) над жидким азотом. Приспособление состоит из пенопластового поплавка, съемного держателя (металлическое сито), в который помещают емкости со спермой, металлического кольца (испарителя), предназначенного для увеличения интенсивности испарения азота. Пакеты со спермой выдерживают в парах жидкого азота 5 - 7 мин., после чего переносят в жидкий азот.

4. При замораживании в виде  гранул сперму наносят каплями  по 0,2 мл в лунки на поверхность  сухого льда. Через 5 мин. после  замораживания гранулы собирают  и упаковывают в алюминиевые  тубы или пластмассовые стаканы (125 - 130 гранул = 25 мл в дозе) и помещают на хранение в сосуд с жидким азотом.

 

Способы предупреждения температурного шока.

Влияние температуры. Спермии лучше  сохраняются при температуре  от 0 до 15 °С. Более низкая и особенно высокая температура пагубны для них. Температура среды влияет на спермиев двояко: усиливает или ослабляет их движение, удлиняет или укорачивает переживаемость.

Движение и переживаемость спермиев—два взаимосвязанных явления. Если спермиев поместить в среду с температурой 5 'С, они делаются малоподвижными или не двигаются. При подогревании спермы до 10 °С их движения становятся интенсивнее, и дальше, по мере повышения температуры, активность еще более возрастает и достигает максимума при температуре 38—41 "С. Таким образом, интенсивность движения спермиев прямо пропорциональна температуре среды, в которой они находятся.

С повышением температуры среды  срок жизни спермиев укорачивается. При температуре 46,5 °С белки спермиев переходят в состояние, близкое  к необратимой денатурации.

Низкие температуры менее вредны для спермиев. При постепенном  охлаждении можно довести сперму до состояния замораживания, а затем, после подогревания, восстановить ее активность и даже способность к  оплодотворению. Быстрое охлаждение спермы, скачкообразные переходы от высоких температур к низким вызывают у спермиев температурный шок — реакцию спермиев на быстрое охлаждение. Она выражается потерей способности спермиев оживать при подогревании и разбавлении спермы специальными разбавителями, появлением уродливых форм спермиев. Если сперму быстро охладить хотя бы только до 15—17 °С, у спермиев может произойти температурный шок. Шоковые явления у спермиев могут наступать при температуре 25 "С. В механизме шока важную роль играют осмотические и диффузионные процессы. Чем медленнее протекают эти процессы, тем меньше проявляется температурный шок Медленное охлаждение — основной способ предупреждения температурного шока спермиев.

Особенно легко возникает температурный  шок при охлаждении только что  полученной спермы ниже 18 'С, поэтому в помещениях для получения и исследования спермы температура не дол­жна быть ниже 18 'С. В сперме, имеющей нейтральную или щелочную реакцию, спермии сильнее реагируют на температуру, чем в сперме слабокислой реакции.

Низкие температуры отрицательно влияют на живые существа потому, что при замерзании разрушается цитоплазма их клеток (во вр кристаллизации). Для объяснения отсутствия отрицательного влияния низких температур на спермиев предложена гипотеза о стекловидной форме замерзания цитоплазмы (витрификация). Согласно этой гипотезе, цитоплазма при охлаждении может затвердевать стекловидно (без кристаллов). При стекловидной форме в отличие от кристаллизации цитоплазма затвердевает без выделения воды, без резкого смещения молекул, вследствие чего не нарушается ее обычная структура.

При постепенном охлаждении спермы до минус 6—10 °С в ней интенсивно происходит кристаллизация, что вызывает быструю гибель спермиев. Для перевода жидкостей в стекловидное затвердевание  необходимо при приближении к 0 °С быстро их охладить, чтобы «проскочить» критическую фазу. Для «расстекловывания» цитоплазмы сперму нужно быстро нагревать, чтобы произошло расплавление тоже без фазы кристаллизации.

Возможность температурного шока следует  учитывать, особенно при работе со спермой быка и барана, у которых вследствие малого объема эякулята сперма охлаждается очень быстро. Температурный шок легко наступает при проведении искусственного осеменения в холодную погоду, при использовании холодных инструментов, при несоблюдении правил хранения и перевозки спермы. Реакцию спермиев на температуру следует расценивать как их приспособление в процессе эволюции. Известно, что в придатке тестикула спермии находятся в состоянии естественного анабиоза при температуре более низкой, чем температура тела; вследствие этого они могут долго сохранять свою жизнеспособность. Только после смешения спермиев с секретом придаточных половых желез они получают способность к активному движению. Попав же в половой аппарат самки, спермии (в условиях температуры тела) начинают двигаться с максимальной интенсивностью. Это обусловливает наиболее быстрое их продвижение по половым путям к яйцепроводам и встречу с яйцевой клеткой.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4.Подготовка  самок к осеменению. Методы осеменения: естественный  искусственный ,их производственная и ветеринарно-санитарная оценка. Время и кратность осеменения животных в период охоты.

 

Правильная организация подготовки животных к осеменению должна обеспечивать своевременное оплодотворение всего  маточного поголовья и включает следующий комплекс ветеринарно-зоогигиенических мероприятий:

 

·         Обеспечение  маточного поголовья достаточным  количеством производителей, проверенных  по качеству потомства и состоянию  здоровья, или спермой лучших в  племенном отношении производителей. Каждый производитель должен быть закреплен за определенной группой самок.

 

·         Все самки  сельскохозяйственных животных должны иметь перед случкой или осеменением  заводскую упитанность. Телки случного возраста и коровы в сухостойный период при пониженной упитанности должны получать ежедневно одну–две кормовые единицы полноценных, хорошо усвояемых кормов. Отбивку ягнят и подготовку маточных отар к осеменению производят за 45–60 дней до случной компании. Ранний отъем поросят от свиноматок (через 4–8 недель после опороса) обеспечивает наивысшую оплодотворяемость по первому осеменению.