Кампилобакторы. Лабораторная диагностика кампилобактериоза

      Большая роль в распространении  патогена отводится овцематкам - бактерионосителям, выделяющими микроб при окотах, абортах, с каловыми массами. В этом процессе значение имеют также и бараны, которые выделяют патоген с фекалиями. Кроме крупного рогатого скота и овец в эпизоотическом процессе участвуют свиньи, птица, дикие животные. В последние годы обозначилась также проблема термофильных кампилобактеров, из которых в патологии животных патогенная роль отводится c.jejuni. Обозначенный вид возбудителя вызывает поражение органов пищеварения: кишечника, печени, аборты у овец, свиней. Заболевание относят к зоонозам. При этом животные составляют основной резерв инфекции, инфицированность свиней достигает 63%, в птицеводстве - 100%. Активное носительство кампилобактера отмечено у чаек (20-70%), ворон (90%), голубей (20-40%), гусей (10-6О%), грачей (45-83%). Зараженные животные, птица создают риск для проявления инфекции у людей.

    Поисковые исследования последнего времени свидетельствуют  о широком вовлечении в эпизоотический процесс норок. По данным Г.Г.Власовой, исследовавшей 1003 образца материала от норок, установлена их значительная контаминация С. jejuni, составляющая 59%. Вибрион содержался в эмбриональной ткани (75,4%),в желчи (65,3%), в кишечнике (40,2%), в фекалиях (53,4%). Результаты исследований позволяют утверждать, что норки через фекалии способны интенсивно контаминировать вибрионом окружающую среду, служить резервуаром микроба для синантропных птиц, грызунов, бродячих животных. Норки, как и другие виды животных и птиц, представляют также эпидемиологическое значение для развития инфекционного процесса у людей. Кампилобактериоз животных и птиц не имеют сезонности. Клиническое проявление заболевания обуславливается физиологическим состоянием животного (беременность), а также условиями кормления и содержания.

    Экономический ушерб при кампилобактериозе значителен. В скотоводстве он складывается за счет абортов, перегулов у коров, снижения молочной продуктивности, затрат на проведение противоэпизоотических мероприятий, в овцеводстве - за счет абортов, бесплодия, падежа животных, затрат на мероприятия, в птицеводстве - за счет снижения яйценоскости, снижения живой массы, падежа птицы и затрат на мероприятия. Кроме этого животноводство несет убытки от заболеваемости и падежа молодняка. Сложилось мнение, что кампилобактериоз - заболевание взрослого поголовья животных, что инфекционный процесс поражает только органы репродуктивной сферы. Представленная информация показывает, что патология может распространяться на различные виды и возрастные группы животных. Поэтому возникает необходимость в лабораторных обследованиях поголовья с целью выявления животных - бактерионосителей и определения ареала эпизоотического процесса.

    В неблагополучных по кампилобактериозу  пунктах показатели превалентности варьируют. На станциях искусственного осеменения в эпизоотический процесс может вовлекаться от 1 до 57% быков. При этом степень участия в этом процессе зависит от возраста животных. Она обычно бывает выше у быков свыше четырехлетнего возраста и может достигать 23,5%. В стадах коров у 53%, в стадах телок до 75% обнаруживают катарально узелковые вагиниты. В популяциях коров, где кампилобактериоз устанавливается впервые, абортирует 10-30-60% животных. После аборта от 5 до 30% коров перегуливает по 8-10 раз. При этом повторные аборты у коров бывают редко. Последствия выкидыша осложняются задержанием последа, эндометритом. Подавляющее число абортов наблюдается в зимне-весеннее время, что связывается с условиями качества кормления и ухода.

    Последствия кампилобактериоза тяжелым бременем отражаются на экономическом положении хозяйства. Установлено, что в неблагополучных хозяйствах недополучают по 15-20 телят на 100 маток, каждая корова за период дней бесплодия снижает надой на 500 и более литров молока. По дaнным Г.Е.Гашкова (1969), обобщившим ущерб по 20 неблагополучным пунктам, оказалось, что хозяйства за 5 лет недополучили 14,2 тыс. телят, 4,6 тыс. тонн мяса и 5,5 т молока. Экономический ущерб составил более 5,7 млн. руб.

    Значительные  убытки от заболевания исследователи  наблюдали и в других отраслях животноводства. На свинофермах, например, абортирует до 65-68,6% свиноматок от числа опоросившихся. В отарах овец, по данным некоторых авторов, аборты овцематок могут достигать 75%. При этом у значительной части овцематок отмечены осложнения с летальным исходом, достигающим 28,2%. Не является исключением также птицеводство. В этой отрасли в неблагополучных подразделениях падеж молодняка птицы в возрасте до 1 месяца колеблется в пределах 2,7-15%, 20-17% цыплят-бройлеров снижают привес, куры на 15-35% уменьшают яйцекладку. Приведенные немногочисленные примеры убедительно свидетельствуют о значительном экономическом ущербе, который может случится в результате заноса возбудителей кампилобактериоза в популяции восприимчивых животных и птиц. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Кампилобактериоз  отдельных видов животных 

    Крупный рогатый скот. Патология характеризуется комплексным поражением органов размножения, в процесс вовлекаются слизистые оболочки влагалища, матки, яйцеводов и яичники. Плодоношение нередко на 4-7 мес. стельности прерывается абортом. Динамика развития воспалительного процесса продолжается 4-5 мес. В этот период на ранней стадии развития возможна гибель плода, которая просматривается и о ней можно говорить по течке, наступающей в отдаленные сроки. Информация о возрасте абортированных плодов представляется различной. По учтенным данным они могут быть обнаружены на 38, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 дни после зачатия. Максимальное количество абортов однако происходит в первый месяц, а затем с 5 по 8 мес. стельности. Течение инфекционного процесса после аборта сопровождается удлинением фазы полового покоя. Нарушается ритм полового цикла. На зачатие требуется от 3 до 6 и более осеменений. Отдельные коровы перегуливают 4-6 мес.

     У инфицированных коров и телок развивается катаральный, катарально-узелковый вагинит. После аборта заметна острая гиперемия слизистой оболочки влагалища, кровянисто-слизистые выделения. Вибриозный выкидыш, как правило, сопровождается задержанием последа, эндометритом.

Абортированные  плоды, плацента не имеют характерных  признаков. У плодов до трех месячного возраста наблюдают гиперемию, кровоизлияния, отечность. Такие же показатели остаются и в последующем, но локализуются в ограниченных участках. Для плодов старших возрастов свойственно накопление жидкости в полостях организма.

    У быков, больных кампилобактериозом отмечают гиперемию слизистой оболочки препуция и полового члена, обильное выделение слизи в течение 2-3 дней после заражения. В дальнейшем перечисленные признаки исчезают, процесс протекает бессимптомно в виде бактерионосительства.

    Овцы. У овец показателем на кампилобактериоз является аборт, мертворождаемость. Наступлению аборта предшествует угнетение, снижение или прекращение позыва к приему корма. В последующем становится заметным беспокойство, отечность срамных губ. После аборта повышается температура тела до 41,2-41,4°С. Изгнание плода нередко сопровождается задержкой последа, выделениями коричневатой жидкости. Инкубационный период при экспериментальном заражении длится 7-25 дней. Аборты происходят в разные сроки суягности, что зависит от времени алиментарного заражения. Абортированные плоды обычно содержат повышенное количество жидкости в грудной и брюшной полостях, в желудке - коричневатая слизь с примесью крови, паренхиматозные органы с кровоизлияниями.

    Свиньи. Кампилобактериоз свиней мало изученное заболевание. Проявление инфекции также сопровождается абортами, мертворождаемостью. При этом в отдельных популяциях свиней аборты могут достигать 65,8-68,6% к числу опоросившихся свиноматок. Полагают, что инфицирование свиней гложет происходить через сперму хряка, алиментарно. Видимо в эпизоотическом процессе определенную роль играют крысы, выделенные кампилобактеры от которых имели сходство с возбудителем, изолированным от больных свиноматок. Аборты наступают без предшественников в последний месяц супоросности. После аборта у свиноматок развивается катаральный вагинит.

    Птицы. Кампилобактериоз сопровождается гибелью цыплят, снижением привеса живой массы у бройлеров и яйценоскости кур. Возбудителем болезни является кампилобактер йеюни. У больных птиц, кроме общих симптомов, диагностируются признаки гепатоэнтерита. На вскрытии трупов обнаруживают катаральное воспаление слизистой оболочки кишечника, некротические фокусы в печени, истощение. 
 

Диагностика кампилобактериоза 

    Диагноз как и при других инфекционных заболеваниях животных, устанавливают на основании клинических, эпизоотологических, патологоанатомических и лабораторных методов исследования. При клинико-эпизоотологическом анализе обращают внимание на аборты, наступающие в разные сроки беременности, рождение слабого, нежизнеспособного молодняка, мертворождаемость, бесплодие.

    Основное  значение в постановке диагноза на кампилобактериоз принадлежит лабораторным анализам. Пат. материал при кампилобактериозе  крупного рогатого скота могут являться: у быков - сперма, препуциальная слизь, смывы; у коров - выделения из половых органов, плод, плацента, молоко, лимфатические узлы тазовой полости, фекалии, желчь; у телят - кровь в период диареи, а также фекалии, желчь, желудок, кишечник; у овец - беременная матка, плод, желчь, фекалии, лимфатические узлы кишечника; у свиней - плод, желчь, органы пищеварения, фекалии; у птиц - печень, слепые отростки кишечника. В отдельных случаях инфицирование животных и птиц может происходить при употреблении воды при фекальном ее загрязнении. Поэтому возникает необходимость в представлении проб воды. При наличии показаний на кампилобактериоз в лабораторию направляют кровь исследуемых животных.

      Материал для лабораторного исследования  направляете в свежем виде, лучше  в термосе на льду. Следует  при этом учитывать, что С.jejuni плoxo сохраняется в процессе транспортировки. В связи с этим рекомендуется посевы образцов фекалий делать непосредственно в хозяйстве или материал помешать в среду сохранения. Роль такой среды выполняет тиогликолевый бульон (рН 8,5) или щелочная пептонная вода, содержащая 0,05% тиогликолата натрия и 0,025% цистеина. Материал с консервантом необходимо держать при 4°С.

    Доставленный  в лабораторию патологический материал подвергается различным методам  исследования. Процесс обработки  образца начинается с приема и  регистрации. Затем исследования выполняются по определенному плану, включающему микроскопию нативных мазков, бактериологическое и биохимическое исследования, постановку биопробы, серологические исследования и идентификацию возбудителя.

Микроскопическое  исследование.

      Готовят мазки, которые после фиксации, окрашивают по Граму или фуксином Циля в течение 1-2 мин. Раствор фуксина предварительно 1:5 разбавляют дистиллированной водой. В окрашенных препаратах в положительных случаях обнаруживают грамотрицательные микробные клетки, имеющие форму удлиненных спирилл, мелких кокков, летящих чаек, запятой. При окраске по методу Романовского-Гамзы в терминальных участках микробной клетки выявляется зернистость. Мазки можно исследовать с помощью метода иммунофлуоресценции (РИФ). При положительной реакции обнаруживают светящиеся комплексы АГ+АТ.

Культуры  возбудителя, кроме этого, исследуют  в висячей или раздавленной капле  на подвижность.

Бактериологическое  исследование.

    Локализация кампилобактеров в органах и  тканях организма животных имеет  различия. Существуют также некоторые особенности изоляции возбудителя из объектов, подлежащих исследованию. Из абортированных плодов для посева на питательную среду берут содержимое желудка в объеме 0,5 мл. Кроме этого, в том же объеме взвеси, взятой из легких, печени, селезенки, амниотической жидкости, головного мозга, делают посев в пробирки. Для получения культуры возбудителя  используют:

    а) полужидкий 0,15-0,2%-ный мясо-печеночный пептонный агар (ПЖА),

    б)сафранино-железо-новобиоциновую среду (СЖН),

    в)2-3%-ный  мясо-печеночный пептонный агар (ЖПА),

    г)среду  Китта-Тароцци,

    д)агар Мартена и др.

    При этом в питательные среды добавляют 5-10% дифибринированной крови крупного рогатого скота, овец, кроликов или  сыворотку крови лошади, аминопептид-2 (5-10%), экстракт сухих дрожжей (5 г на 1 л среды), тиогликолят натрия (0,5 на 1 л среды).

    При получении культур микроба из спермы, слизи, исходный материал предварительно подвергают центрифугированию или  фильтрации.

    Посевы делают на ПЖА или СЖН, лучше в работе использовать одновременно обе среды. Пробирки или чашки Петри с посевами помечают в эксикатор или микроанаэростат, культивируют в присутствии 10-15% углекислого газа при температуре 37°С в течение 6-10 дн. Осмотр пробирок и чашек Петри с исследуемым материалом проводится через каждые три дня.

    Рост  культуры на ПЖА отмечается над поверхностью среды в виде серовато-голубоватого диска толщиной 1-4 мм. На плотной среде появляются мелкоросинчатые колонии, видимые через лупу. На СЕН рост кампилобактеров не сопровождается изменением цвета среды (розовый). В присутствии развития посторонней микрофлоры среда приобретает ярко-желтую окраску. В этих случаях проводят очистку культуры от посторонней микрофлоры. Процедуру выполняют различными методами:

      а) заражают беременных свинок, которые абортируют. Из абортированных плодов делают посевы. Если аборт не наступает, то их через 10-12 дн. убивают, из эмбрионов и полости матки делают посевы;