Диагностика микоплазма – инфекции культуральным методом

Министерство образования Республики Беларусь

Учреждение образования

Международный государственный экологический  университет

имени А. Д. Сахарова

 

                                 Факультет экологической медицины

                                              Кафедра иммунологии

 

 

Диагностика микоплазма – инфекции

культуральным методом

 

                             Дипломная работа студентки V курса

Маркевич Айны Артуровны

 

                                                   ____________А.А. Маркевич

«Допустить к защите»                                                                                                                                                                                                                                                                                                          

Зав. кафедрой иммунологии

к.м.н.,  доцент                  

______________ М. М. Зафранская

«___» ___________2012 г. 

Научный руководитель                                                                                                                                                                                                                                                                                                          

к.б.н.

____________Е.Е. Тарасова 

 

              

 

ДИАГНОСТИКА МИКОПЛАЗМА – ИНФЕКЦИИ КУЛЬТУРАЛЬНЫМ

МЕТОДОМ

Реферат

 

Дипломная работа 44 с.: 18 рис., 3 табл., 27 источника.

 

МИКОПЛАЗМА, УРЕАПЛАЗМА, МИКОПЛАЗМЕННАЯ ИНФЕКЦИЯ, РЕЗИСТЕНТНОСТЬ, ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ, ДОКСИЦИКЛИН, ДЖОЗАМИЦИН, ОФЛОКСАЦИН, ЭРИТРОМИЦИН, ЦИПРОФЛОКСАЦИН, АЗИТРОМИЦИН, КЛАРИТРОМИЦИН, ПРИСТИНАМИЦИН.

Объектом данной работы являются Mycoplasma hominis и Ureaplasma    urealitycum выделенные из уретры, эндоцервикального канала и влагалища 100 пациентов г. Минска.

Цель работы – изучить возможности использования культурального экспресс-теста для диагностики микоплазмозов.

В работе проведен сравнительный анализ действия антибиотиков на моно- и смешанную микоплазменную инфекцию у пациентов с хроническими инфекциями мочеполовой системы. Было выявлено, что Ureaplasma    urealitycum более чувствительна к доксициклину, джозамицину, тетроциклину, кларитромицину и пристинамицину. В тоже время, смешанная инфекция чувствительна только к доксициклину, тетрациклину и пристинамицину.  

 Полученная информация может быть использована для выбора оптимального средства в начале лечения или для контроля эффективности терапии заболеваний, связанных с микоплазменными инфекциями. 

 

ДЫЯГНОСТЫКА МІКАПЛАЗМА – ІНФЕКЦЫІ КУЛЬТУРАЛЬНЫМ

МЕТАДАМ

Рэферат

 

Дыпломная работа 44 с.: 18 рыс., 3 табл., 27 крыніцы.

 

МІКАПЛАЗМА, УРЕАПЛАЗМА, МІКАПЛАЗМЕННАЯ ІНФЕКЦІЯ, РЭЗIСТЭНТНАСЦЬ, ЧУЛЛІВАСЦЬ, ДАКСІЦІКЛІН, ДЖОЗАМІЦІН, ОФЛАКСАЦІН, ЭРІТРАМІЦІН, ЦІПРОФЛОКСАЦІН, АЗІТРАМІЦІН, КЛАРІТРАМІЦІН, ПРІСЦІНАМІЦІН.

 

Аб’ектам дадзенай працы з'яўляюцца Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealitycum вылучаныя з урэтры, эндоцервикального канала і похвы 100 пацыентаў г. Мінска.

Мэта працы – вывучыць магчымасці выкарыстання культуральнага экспрэс-тэсту для дыягностыкі мікаплазмозаў.

У рабоце праведзена параўнальная адзнака  дзеяння антыбіотыкаў на мона- і змешаную мікаплазменую інфекцію ў пацыентаў з хранічнымі інфекцыямі мочапалавой сістымы. Было выяўлена, што Ureaplasma urealitycum больш адчувальная да даксіцыкліну, джозаміціну, тетраціикліну, кларітраміціну і прісцінаміціну. У той жа час, змешаная інфекцыя адчувальна толькі да даксіцыкліну, тэтрацыкліну і прісцінаміціну.

Атрыманая інфармацыя можа быць выкарыстана для выбару аптымальнынага сродку ў пачатку лячэння або для кантролю эфектыўнасці тэрапіі захворванняў, звязаных з миікаплазменнымі інфекцыямі.

 

Diagnosis Mycoplasma infection Cultural method

 

Abstract

 

Graduate work 44 p.: 18 figure, 3 tables, 27 references

MICOPLASMA, UREAPLASMA, MICOPLASMA INFECTION, DOXYCYCLINE, JOSAMITSIN, OFLOXACIN, ERYTHROMYCIN, CIPROFLOXACIN, AZITHROMYCIN, CLARITHROMYCIN, PRISTINAMITSIN.

 

The object of this work are Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealitycum allocated of an urethra, endocervical the channel and a vagina of 100 patients of Minsk.

The aim – to study use possibility culture the express test for the diagnostics of mycoplasmoses.

In work the comparative estimation of the immune status of the action of antibiotics on the mono-and mixed mycoplasma infection in patients with chronic infections of the genitourinary system. It was found that Ureaplasma urealitycum more sensitive to doxycyclin, josamycin, tetrotsiklin, clarithromycin, and pristinamitsin. At the same time, a mixed infection is sensitive only to doxycyclin, tetracyclin, and pristinamitsin.

The information obtained can be used to select the best means at the beginning of treatment or to monitor the effectiveness of treatment of diseases associated with mycoplasma infections.

 

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ 6

ВВЕДЕНИЕ 7

1 Урогенитальный микоплазмоз (обзор литературы) 9

1.1 Характеристика микоплазм 9

1.2 Морфология микоплазм 12

1.3 Чувствительность микоплазм к физическим и химическим факторам 13

1.4 Биохимические свойства урогенитальных микоплазм 14

1.5 Культуральные свойства микоплазм 16

1.6 Антигенная структура микоплазм 17

1.7  Факторы патогенности микоплазм 17

1.8 Патогенез микоплазменной инфекции 19

2 Материалы и методы исследования 21

2.1 Материалы 21

2.2 Исследуемый материал 25

2.3 Инкубация 25

2.4 Учет и интерпретация результатов 26

2.5 Принцип метода 27

2.6 Статистическая обработка данных 28

3 Результаты и обсуждения 29

3.1 Выявления М. hominis и U.urealiticum 29

3.2 Определение чувствительности к антибиотикам 31

ЗАКЛЮЧЕНИЕ 40

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 42

 

 

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

М. – Micoplasma

U. – Ureaplasma

DOT – ДОКСИЦИКЛИН

JOS – ДЖОЗАМИЦИН

OFL – ОФЛОКСАЦИН 

ERY – ЭРИТРОМИЦИН 

TET – ТЕТРАЦИКЛИН 

CIP – ЦИПРОФЛОКСАЦИН 

AZI – АЗИТРОМИЦИН 

CLA – КЛАРИТРОМИЦИН 

PRI – ПРИСТИНАМИЦИН

S – чувствительный (Sensitive)

R – резистентный (Resistant)

 

                                     

 

ВВЕДЕНИЕ

Микоплазмы – представители  класса Mollicutes – являются самыми малыми из ныне известных прокариот, способных к самовоспроизведению. В самом названии таксона (molli – мягкий, cutes – кожа) отражена характерная черта этих микроорганизмов – отсутствие ригидной клеточной стенки [1, 2].

Функции клеточной стенки у микоплазм выполняет трехслойная  цитоплазматическая мембрана, для синтеза которой необходим холестерин и прочие липидные компоненты [2].

Отсутствие клеточной  стенки определяет непостоянство и  многообразие очертаний  их клеток, неустойчивость (быстрый лизис) при  осмотическом шоке, действии детергентов, этанола и специфичных антител в сочетании с комплементом. С отсутствием клеточной стенки связано и безразличие микоплазм к пенициллину, а также его аналогам, действие которых состоит в подавлении синтеза компонентов клеточной стенки бактерий [2, 3].

Учитывая тот факт, что  микоплазменная инфекция в настоящее  время занимает одно из ведущих мест среди заболеваний, передаваемых половым  путем, и большое количество осложнений, к которым приводят нелеченные состояния, все большее число исследователей приходит к выводу о том, что микоплазмоз  требует отдельной терапии.

Подбор лекарственных  препаратов при микоплазмозах определяется особенностями биологии возбудителя  и состоянием иммунитета макроорганизма. Лечение генитального микоплазмоза должно быть комплексным и включать как средства, воздействующие на возбудитель, так и средства, стимулирующие  неспецифическую сопротивляемость организма. Лечению подлежат все  пациенты, у которых выделены микоплазмы из половых органов (независимо от признаков  воспаления), а также их половые  партнеры. С учетом клинической формы, тяжести заболевания, наличия осложнений, сопутствующих заболеваний набор препаратов, длительность и количество курсов лечения должны быть строго индивидуальны [23].

При лечении микоплазмозов  учитывается то, что микоплазмы к  некоторым препаратам абсолютно  нечувствительны: это бензилпенициллин, ампициллин, цефалоспорины, сульфаниламиды. U. urealyticum устойчива к линкозаминам (линкомицину). Около 10% штаммов M. hominis и U. urealyticum устойчивы к тетерациклинам [23].

Проблемой может явиться  то, что при правильном подборе  антибиотиков микоплазмозы человека можно  подавить, но антибиотикотерапия, приводящая к клиническому благополучию, вовсе  не обязательно связана с удалением  возбудителя из организма, а часто  лишь способствует переходу острой формы  заболевания в латентную. Персистирующие микоплазмы могут снова активироваться под влиянием факторов, ослабляющих  иммунный статус организма. Поэтому  антибиотикотерапия почти всегда оказывается  неэффективной для пациентов  со стойким иммунодефицитом. Кроме  того, вероятно, что под селективным  давлением антибиотиков размножаются штаммы микоплазм, устойчивые (резистентные) к этим антибиотикам [23, 24].

Поэтому задачей данной работы является выявление микоплазменной инфекции у пациентов с хроническими заболеваниями мочеполовой системы и проведение антибиотикограммы у пациентов с положительным результатом.

 

1 Урогенитальный микоплазмоз (обзор литературы)

1.1 Характеристика  микоплазм

Микоплазмы относят к III отделу (Tenericutes) царства Рrоkаrуоtае. Отдел Tenericutes представлен одним классом Mollicutes. Класс Mollicutes объединяет микоплазмы, ахолеплазмы, спироплазмы, уреаплазмы, анаэроплазмы. Абсолютная патогенность генитальных микоплазм не доказана до настоящего времени. Однако известно, что различные воспалительные заболевания урогенитального тракта могут возникнуть при активации размножения микоплазм или уреаплазм, при ослаблении или изменении иммунного и гормонального статусов [1, 27].

Заболевания человека, вызываемые микоплазмами и уреаплазмами, объединяют в группу микоплазмозов человека. Человек является естественным хозяином по крайней мере четырнадцати видов микоплазм. Возбудители этой группы инфекций – микоплазмы – являются самыми мелкими свободноживущими организмами.

Mollicutes – свободно живущие прокариоты без клеточной стенки, которую они не способны образовывать из-за отсутствия собственных ферментов, участвующих в синтезе ее компонентов (мурамовой и a-Е-диаминопимелиновой кислоты) [1,2,3]. Функции клеточной стенки у микоплазм выполняет трехслойная цитоплазматическая мембрана, для синтеза которой необходим холестерин и прочие липидные компоненты (рисунок 1.1).

 

Рисунок 1.1 – Ureaplasma urealiticum – электронная микроскопия

 

Отсутствие клеточной  стенки определяет непостоянство и  многообразие очертаний  их клеток, неустойчивость (быстрый лизис) при  осмотическом шоке, действии детергентов, этанола и специфичных антител в сочетании с комплементом. С отсутствием клеточной стенки связано и безразличие микоплазм к пенициллину, а также его аналогам, действие которых состоит в подавлении синтеза компонентов клеточной стенки бактерий [2]. Большинство видов микоплазм - факультативные анаэробы, которые представлены мелкими клетками (0,1 – 0,45мкм), характеризующимися выраженным полиморфизмом.  Они могут образовывать кокковидные, ветвящиеся и более крупные многоядерные формы, способные образовывать псевдомицелий.

Геном у микоплазм кольцевидный, реплицируется полуконсервативным путем. Обычно микоплазмы размножаются бинарным делением, подобно большинству  бактерий, особенно после образования  мелких кокковидных образований (элементарные тельца) в нитевидных структурах. Также способны к почкованию и сегментации.

Среди микоплазм выделяют подвижные и неподвижные виды. Микоплазмы грамотрицательны (лучше окрашиваются по Романовскому-Гимзе), нуждаются в стеролах и нативном белке. На плотных средах образуют характерные мелкие колонии с приподнятым центром (“яичница глазунья”) (Рисунок 1.2), имеющие тенденцию врастать в среду. Морфология колоний достаточно специфична – на поверхности располагаются крупные, часто вакуолизированные клетки, в глубине – мелкие оптически плотные организмы [4].

Рисунок 1.2 – Mycoplasma hominis колония на плотной среде

 

Микоплазмы широко распространены в природе. Миниатюрность микоплазм определяет ограниченность их биохимических возможностей и, как следствие, зависимость микоплазм от высших организмов. В процессе эволюции микоплазмы приспособились к тесному сосуществованию с высшими эукариотами. Микоплазмы являются паразитами человека, млекопитающих, рептилий, рыб, членистоногих и растений. Перечень организмов, известных в качестве хозяев микоплазм, постоянно пополняется, при этом растет и число описанных видов микоплазм. К настоящему времени известно более 180 представителей класса Mollicutes [2]. У человека выделяют представителей родов Mycoplasma, Ureaplasma, Acholeplasma, включающих патогенные и сапрофитные виды. В частности, человек – естественный хозяин 16 видов микоплазм – M. buccale, M. fermentans, M. hominis, M. pneumoniae,      M. genitalium, M. lypophilum, M. orale, M. faucium, M. primatum, M. spermatophilum, M. penetrans и M. salivarium. А также представители других родов – Acholeplasmalaidlavaii, A. oculi и Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum [2,5].

1.2 Морфология микоплазм

Морфология и размеры  микоплазм варьируют в зависимости  от возраста культуры, условий и  сред культивирования. Микоплазмы полиморфны. Клетки микоплазм ограничены лишь трехслойной  плазматической мембраной (внутриплазматические мембраны у микоплазм не обнаружены). У микоплазм, в отличие от других бактерий, состояние L-формы, т.е. отсутствие клеточной стенки, является их обычным состоянием [2,6].  

Отсутствие клеточной  стенки у микоплазм определяет их пластичность, которая позволяет  этим микроорганизмам проникать  через поры фильтров диаметром 0,22 – 0,45мкм. Сферическая форма клеток характерна для большинства видов микоплазм. При этом клетки одной и той же микоплазмы могут быть сферической (или несколько вытянутой) формы 0,3 – 0,8 мкм в диаметре, но могут образовывать длинные (до 100 мкм), иногда ветвящиеся тяжи, которые, проходя фазу коккоидных структур, распадаются на ряд сферических клеток, что изображено на рисунке 1.3. Коккоидные структуры иногда образуют кольцо.