Виды коровяка и их применение в медицине

Примечание: Ι – внешний вид выделенной фракции полисахаридов;

ΙΙ –содержание полисахаридов, % в воздушно-сухом сырье.

В моносахаридном составе полисахаридов наиболее разнообразными являются фракции ВРПС и ПВ. Для них характерным является наличие галактозы, глюкуроновой и галактуроновой кислот [8].

 

5.2. Иридоиды

Состав иридоидов изучали  с помощью хроматографии на бумаге и в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил» в различных системах растворителей (таблица 3).

 

 

 

Таблица 3 Характеристека основных иридоидов травы коровяка скипетровидного

№	Значение Rf  в системе  БУВ* (4:1:2)		Окраска пятен реактивами						УФ-спектр,  λ max		Иден-тифи-циро-ванно как
			Шталя		Бэкон –   Эдельмана		Трим – Хилла
	Экс-перимент	литература	Види-мый	УФ-свет	Види-мый	УФ-свет	Види-мый	УФ-свет	Экс-перимент	литература
1	0,45	0,41	Сине-голу-бая	Тёмно-синяя	Коричневая	Тёмно-коричневая	Синяя	Сине-фиолетовая	212	210	С9-тип  ауку-бин
2	0,10	0,12	—	—	Жёлто-оранжевая	Коричневая	—	—	198	198	С9-тип  катал-пол
3	0,80	0,82	Серо-голу-бая	Гол-убая	Коричневая	Коричневая	Розо-вая	Розо-во-сире-невая	198	198	С9-тип  галири-дозид
4	0,65	0,62	Синяя	Тёмно-синяя	Коричневая	Тёмно-коричневая	Крас-ная	Кра-сно-фиолетовая	—	222	С9-тип  гарпа-гид
5	0,60	—	Синяя	Тёмно-коричневая	Жёлтая	Жёлто-коричневая	Серая	Синяя	—	235	С10-тип  сирин-гоксид
6	0,36	0,35	Серая	Синяя	Коричневая	Коричневая	Бурая	Бурая	275 282	275 282	пеони-фло-рин
7	—	0,47	Зеле-нова=то-жёл-тая	Коричневая	—	—	Фиолетовая	Синяя	—	260	катал-позид

* БУВ – н-бутанол  – уксусная кислота – вода

Вещества 1, 2, 4 (аукубин, каталпол и гарпагид) – идентифицировали в присутствии достоверных образцов иридоидов. Для количественного  определения иридоидов выбран спектрофотометрический метод с использованием гидроксамовой реакции. Максимум поглощения наблюдался при длине волны 530 нм, что совпадает с данными литературы для пеонифлорина. Установлено, что содержание иридоидов в траве коровяка скипетровидного несколько выше, чем в цветках (0,34 % ± 0,02 и 0,24 % ± 0,01 соответственно) (таблица 8) [8].

 

5.3. Фенольные соединения

Для препаративного выделения фенольных соединений использовали спирто-водные извлечения из травы коровяка скипетровидного (рисунок 2) . Извлечения концентрировали, очищали и вещества разделяли фракционированием по растворимости, методом жидкостной экстракции, дробной кристаллизации, тонкослойной, препаративной бумажной хроматографии. Выделенные соединения идентифицировали по совокупности физико-химических свойств, данным УФ-спектроскопии, температуре плавления и сравнением с хроматографией на бумаге и ТСХ с достоверными образцами. Окончательным доказательством структуры служило отсутствие депрессии температуры плавления в пробе смешения исследуемых веществ со «свидетелем».

Рисунок 2 – Схема выделения фенольных соединений из 
травы коровяка скипетровидного

 

5.4. Кумарины

Определение кумаринов проводили в хлороформной фракции (таблица 4).

 

Таблица 4 Хроматографическая характеристика хлороформной фракции кумаринов травы коровяка скипетровидного

Вещество  (шифр)	Общая  формула	Флюоресценция  в УФ-свете		Величина Rf  в системах  растворителей*
		До обработки  10 %раствором  КОН	После обработки  10 % раствором  КОН	Система 1	Система 2
Умбеллиферон  (Х-1)	С9Н 6О3	Синяя	Ярко-синяя	0,32	0,87
Скополетин  (Х-2)	С10Н8О4	Голубая	Ярко-голубая	0,56	0,37
Эскулетин  (Х-3)	С15Н16О9	Голубая	Голубая	0,02	0,03
Кумарин  (Х-4)	С9Н12О2	—	Жёлто-зелёная	0,91	0,12

* система 1 – БУВ (4:1:5); система 2 – хлороформ – ацетон (1:2).

 

                               

 

     УМБЕЛЛИФЕРОН                                       КУМАРИН

(7-гидроксикумарин)

 

Методом препаративной  хроматографии на бумаге, а также методом ТСХ выделили вещества X-1 и X-2. Сравнение температуры плавления, УФ- и ИК-спектров, величин Rf в различных системах растворителей вещества Х-1 и стандартного образца умбеллиферона (7-гидроксикумарина) показало идентичность этих веществ. Данные хроматографического анализа, температура плавления, УФ- и ИК-спектральные характеристики, отсутствие депрессии температуры плавления со стандартным образцом позволили охарактеризовать вещество Х-2 как 7-гидрокси-6-метоксикумарин или скополетин (таблица 5) [8].

 

Таблица 5 УФ- и ИК-спектральные характеристики кумаринов травы коровяка скипетровидного

Вещество,  шифр	Температура  плавления, °C	УФ-спектр  (λ макс, нм)	Поглощение в ИК-области, см  –1
			–С=С–	–ОН	–ОСН3	>С=О
Х-1  (Умбеллифе-рон)	233–234	256, 325	1616–  1576	3300	—	1725
Х-2  (Скополетин)	204–205	256, 298,  340	1613–  1570	3340	2928,  2845	1707

Количественное определение  кумаринов проводили методом  прямой спектрофотометрии, основанной на поглощении кумаринов в УФ-области. Для расчётов использовали значение удельного показателя поглощения стандартного образца скополетина, указанного в литературе (таблица 8) [8].

 

5.5. Флавоноиды

Флавоноиды определяли в спиртовом и этилацетатном извлечениях с помощью качественных реакций и методов хроматографии (таблица 6).

 

 

 

 

Таблица 6 Хроматографическая характеристика основных флавоноидов травы коровяка скипетровидного

Вещество  (шифр)	Значение Rf в  системах  растворителей		Окраска пятен
			В УФ-свете	После обработки
	1	2		NH4OH	AlCl3, 1 %
Х-5	0,16	0,57	Тёмно-коричневая	Оранжевая	Тёмно-жёлтая
Х-6	0,18	0,87	Тёмно-коричневая	Зелёная	Жёлто-зелёная
Х-7	0,24	―	Тёмно-коричневая	Оранжевая	Жёлтая
Х-8	0,41	―	Коричневая	Зелёная	Жёлтая
Х-9	0,69	0,42	Коричневая	Жёлто-зелёная	Жёлто-зелёная
Х-10	0,73	0,65	Коричневая	Жёлто-зелёная	Жёлтая
Х-11	0,22	0,30	Жёлто-зелёная	Ярко-зелёная	Жёлтая
Х-12	0,81	0,27	Коричневая	Оранжевая	―
Х-13	0,52	0,35	Бурая	Зелёная	―
Х-14	0,56	0,81	Зелёная	Оранжевая	―

1 – 30% кислота уксусная; 2 – бензол  – этилацетат – кислота уксусная (50:50:1).

 

                                  

       КВЕРЦЕТИН                                                           РУТИН

                                  

                                              АПИГЕНИН

 

Выделение флавоноидов  проводили методом препаративной  хроматографии на бумаге. Были выделены и достоверно идентифицированы лютеолин, апигенин, цинарозид, кемпферол, кверцетин, рутин. Количественное определение суммы флавоноидов проводили методом дифференциальной УФ-спектрофотометрии в пересчёте на рутин (таблица 8)[8].

 

5.6. Оксикоричные кислоты

Выделение оксикоричных кислот проводили методом препаративной хроматографии из бутанольной фракции (таблица 7).

 

Таблица 7 Хроматографическая характеристика фенольных соединений бутанольной фракции травы коровяка скипетровидного

Вещест-во  (шифр)	Rf,  первое  направле-ние	Rf,  второе  направле-ние	Окраска пятен		Rf стандартного  вещества, второе  направление
			В УФ-свете  λ254 нм	После  обработки  NH4OH
Х-15	0,45	0,12	Коричне-вая	Жёлтая	Цинарозид  Rf ≈ 0,15
Х-16	0,62	0,65	Ярко-голубая	Зелёная	Хлорогеновая  кислота Rf ≈ 0,64
Х-17	0,60	0,85	Бледно-голубая	Ярко-голубая	Кофейная  кислота Rf ≈ 0,84
Х-18	0,52	0,30	Фиолето-вая	Фиолето-вая	—
Х-19	0,30	0,25	Сиреневая	Сиреневая	—
Х-20	0,80	0,75	Оранже-вая	Коричне-вая	—

Сравнение физико-химических свойств изучаемых веществ с  достоверными образцами кислоты хлорогеновой и кислоты кофейной показало их идентичность. Вещество X-16 является 3-O-кофеил-D-хинной или хлорогеновой кислотой, X-17 – 3,4-диоксикоричной или кофейной.

 

5.7. Аминокислоты

Определение аминокислот проводили в водном извлечении из сырья на аминокислотном анализаторе Amino Acid Analyzer A 339 чешского производства. Установлено наличие в сырье 15 аминокислот, преобладающими являются аспарагиновая, глютаминовая, лейцин, валин и аргинин [8].

 

5.8. Свободные органические кислоты

Свободные органические кислоты определены по методике ГФ XI издания. Хроматографически в присутствии достоверных образцов идентифицированы лимонная, яблочная, янтарная и винная кислоты.

В результате фитохимических исследований установлено количественное содержание основных групп БАВ в  траве коровяка скипетровидного (таблица 8).

 

 

 

 

Таблица 8 Количественное содержание основных групп БАВ в траве коровяка скипетровидного

БАВ	Метод определения	Количественное содержание,  ( ± Δ ), %
Полисахариды	Гравиметрический	4,59 ± 0,23
Восстанавливающие сахара  в пересчёте на глюкозу	Дифференциальная  УФ-спектрофотометрия	3,42 ± 0,01
Иридоиды в пересчёте  на пеонифлорин	Спектрофотометрический	0,34 ± 0,02
Дубильные вещества	Перманганатометрический	3,86 ± 0,16
Флавоноиды в пересчёте  на рутин	Дифференциальная  УФ-спектрофотометрия	0,49 ± 0,01
Свободные  органические кислоы  в пересчёте  на яблочную кислоту	Алкалиметрический	0,55 ± 0,04
Аскорбиновая кислота	Титриметрический	0,084 ± 0,002
Кумарины в пересчёте  на скополетин	Спектрофотометрический	0,33 ± 0,01
Каротиноиды, мг%	Спектрофотометрический	16,91 ± 0,01
Хлорофилл	Спектрофотометрический	0,92 ± 0,02
Свободные  аминокислоты, мг%	Аминокислотный  анализатор	9,74 ± 0,01