Иммуноморфологическая оценка эффективности примененения противобруцеллезных вакцин

На правах  рукописи

УДК 619:636.09:615.37

 

Паритова Асел Ержановна

 

 Иммуноморфологическая оценка эффективности

применения  противобруцеллезных вакцин.

 

6N1202- Ветеринарная санитария

Ветеринарная  медицина и биотехнология

«Эпизоотология, паразитология и ВСЭ»

 

РЕФЕРАТ

диссертации на соискание академической степени  магистра

 ветеринарных наук по специальности Ветеринарной санитарии.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

УРАЛЬСК – 2011

Работа выполнена  в Западно - Казахстанском аграрно-техническом  университете

имени Жангир хана

 

 

Научный руководитель:                  доктор ветеринарных наук,

                                                              профессор  Кушалиев Кайсар Жалитович

 

Официальный оппонент:                Старший научный сотрудник

                                                       ЗапКазНИВС, к.в.н.

                                                       Туяшев  Есен Курмашович.

 

 

 

Защита диссертации  состоится  21 февраля 2011 г. в 15.00  на заседании Государственной аттестационной комиссии при Западно-Казахстанском аграрно-техническом университете имени Жангир хана.

 

 

 

 

 

 

 Секретарь  ГАК            ____________________________ Айтпаева З.С.

 

 

 

 

С диссертацией можно ознакомиться в научной  библиотеке Западно-Казахстанского  аграрно-технического  университета  имени Жангир хана

                                             

                                                    СОДЕРЖАНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………………4

2. ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ…………………………. ..8

2.1. Патоморфологические изменения в органах и тканях лабораторных животных, привитых вакцинами из штаммов бруцелл  82 и 82 –  ПЧ…………………………………………………8

2.2. Динамика     уровня    содержания    иммунокомпетентных  клеток в крови и органах вакцинированных морских свинок…10

2.3. Иммуноморфологические изменения в организме  морских  свинок  после  одно-,  двухкратной иммунизации………………..14

3.ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………….18

4. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ……………………………………………………………..19

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1.ВВЕДЕНИЕ

Актуальность  темы

Бруцеллез –  это хроническая инфекционная болезнь  животных, характеризующееся нарушением беременности, абортами,   воспалительными процессами в различных органах.

Бруцеллёз сельскохозяйственных животных является распространённой . инфекционной болезнью, поражающей животных всех видов и представляющей серьёзную угрозу здоровью людей.  
Уже давно стало очевидным, что успешная борьба с этой зооантропонозной инфекцией в широких масштабах практически невозможна без использования средств специфической профилактики [1,2]. Необходимость их применения особо возрастает в связи с изменениями, происходящими в агропромышленном комплексе нашей страны: расформирование колхозов, совхозов, создание акционерных обществ, фермерских хозяйств, расширение и увеличение крестьянских подворий.       Поэтому мероприятия против этого заболевания начали проводить ещё с конца 19 века в начале в Европе. От начала внедрения до полного решения проблемы требовалось от 40 до 80 лет. Но в странах, где животных оздоровили, затем нередко возникали рецидивы болезни. Успех оздоровления во всех случаях определялся и напрямую зависел от экономических ресурсов, которыми располагала страна [2].

 Среди постсоветских республик по заболеваемости бруцеллезом Казахстан занимает второе место после Кыргызстана. В последние годы в стране регистрируется ежегодно 2500-3500 случаев заболевания людей, зараженными оказываются 33 тысяч крупного рогатого скота [3].

Важнейшим и  перспективным методом борьбы с  инфекционными болезнями является иммунопрофилактика.

       Степень изученности проблемы. Против бруцеллеза в разное время было предложено значительное количество убитых и живых вакцин. Наибольшее признание во всем мире получила живая вакцина против бруцеллеза из аттенуированного агглютиногенного штамма B. abortus 19, которая широко применялась в СССР, США и многих других странах мира. Существенным недостатком этих вакцин является наличие в крови иммунизированных животных антител, выявляемых в серологических реакциях, принятых для диагностики бруцеллеза, затрудняющих определение эпизоотического статуса животных по бруцеллезу.

С целью устранения этих недостатков было предложено много  противобруцеллезных вакцин из живых  и убитых бруцелл диссоциированных штаммов.

Среди препаратов из диссоциированных штаммов бруцелл  в некоторых странах СНГ до настоящего времени применяется живая вакцина из штамма B. abortus 82. В эксперименте и производственных условиях проходили испытания и другие российские живые вакцины из слабоагглютиногенных штаммов, например, B. abortus 82-ПЧ, B. abortus 7579-АВ, а США – живая вакцина из инагглютиногенного штамма B. abortus RB-51.

Вакцины из указанных  штаммов обладают различной иммунологической и противоэпизоотической эффективностью и до настоящего времени опыты  по сравнительному изучению препаратов с целью отбора наиболее эффективного средства профилактики бруцеллеза все еще проводятся.

– B. abortus 82 (Россия). Находится в SR- форме. Получен профессором  Салмаковым К.М. (ВНИВИ, г. Казань). Обладает слабыми агглютиногенными свойствами. Живая вакцина из этого штамма принята в ветеринарную практику Департаментом ветеринарии МСХ РФ в 1988 году для специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота. Обладает достаточной иммунологической и противоэпизоотической эффективностью. Допускается иммунизация и ревакцинация молодняка и взрослого крупного рогатого скота. При первичном применении у животных, находящихся в беременном состоянии, может вызывать поствакцинальные осложнения в виде абортов, поэтому их иммунизируют по мере растела. У животных, имеющих иммунный фон против бруцеллеза, осложнений, как правило, не вызывает; для усиления иммунитета допускается ревакцинация коров через каждые 1-2 года;

– B. abortus 82-ПЧ (Россия) – пенициллино-чувствительный вариант  вакцинного штамма 82. Находится в SR-форме. Обладает слабыми агглютиногенными свойствами, не абортогенен. Получен профессором Салмаковым К.М. и доктором ветеринарных наук Белозеровой Г.А. (ВНИВИ, г. Казань). Вакцина из этого штамма с разрешения Департамента ветеринарии МСХ РФ испытывалась в производственных условиях. Окончательный вывод о ее иммуногенных и противоэпизоотических свойствах пока не сделан;

В хозяйствах республики Казахстан для специфической  профилактики бруцеллеза животных до сих пор используются различные  противобруцеллезные живые вакцины: B. abortus 19 и 82, B. melitensis Rev–1. Многолетний опыт использования этих вакцинных препаратов  показал, что, несмотря на значительную их эффективность, полного оздоровления хозяйств республики от бруцеллеза не произошло.[4]

            Объект   исследования. Обьектом исследования служат морские свинки в количестве 50 голов.

       Теоретическая и методологическая основа магистерской диссертации. Сравнительную иммуноморфологическую оценку эффективности  противобруцеллезных вакцин 82 и 82-ПЧ проводили путем патоморфологических, гематологических, иммунофлуоресцентных, гистологических методов исследований. Работу выполняли на кафедре физиологии и морфологии Западно-Казахстанского аграрно-технического университета и в научно-исследовательском центре на базе Западно-Казахстанского аграрно-технического университета, в ТОО «Батыс Зоо Вет Сервис» а также часть экспериментов проводили в Московской Государственной Академии Ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина, на материале, взятом от морских свинок которые использовались в совместных научно-экспериментальных опытах по изучению противобруцеллёзных вакцин в ЗКАТУ Уральска. Некоторые этапы работы проводили в комплексе с магистрантами и научными сотрудниками ЗКАТУ им.Жангир хана. В серии опытов изучали динамику морфологических изменений у лабораторных животных, иммунизированных вакцинами из штаммов 82 и 82-ПЧ в сравнительном аспекте. Опыт проводили на 50 морских свинках, разделенных на 5 групп. Первую и вторую группы иммунизировали вакцинным штаммом 82 в дозе 1,5 млрд.м.к., который вводили подкожно во внутреннюю область правого паха, третью и четвертую штаммом 82 и тем же методом. А пятая группа оставалась интактной. Спустя три месяца после первичной иммунизации провели ревакцинацию животных первой и третьей групп теми же вакцинными штаммами и в тех же дозах.Взятый материал был зафиксирован в 10% растворе нейтрального формалина, спирт-формоле (9:1). Фиксированные кусочки подвергались уплотнению путём заливки в парафин и целлоидин-парафин по общепринятой методике (Меркулов Г.А. 1969), после чего из них изготавливались гистологические срезы на ротационном микротоме.Для некоторых специальных окрасок были изготовлены замороженные срезы. Гистологические срезы окрашивались гематоксилин-эозином, по Романовскому-Гимзе.

  Научная новизна. Нами осуществлено комплексное изучение иммуноморфологической перестройки организма животных при иммунизации их новыми вакцинными штаммами бруцелл.

   Дана сравнительная иммуноморфологическая оценка эффективности и реактогенности вакцин штаммов бруцелл 82, 82-ПЧ.

Основные положения диссертационного исследования, выносимые на защиту. Результаты иммуноморфологических, иммунологических исследований при иммунизации морских свинок противобруцеллёзными вакцинными штаммами 82 и 82- ПЧ.

         Научно-практическая значимость работы. Полученные в результате всесторонних исследований вакцинированных животных данные демонстрируют иммунологические свойства изучаемых вакцин и указывают на наиболее лучшие варианты из них, которые в дальнейшем будут применяться при специфической профилактике бруцеллёза. Результаты исследований диссертации, её основные положения и выводы также используются в учебном процессе профильных высших профессиональных учреждений.

Апробация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы доложены на научно - практической конференции молодых ученых и студентов (Уральск, 2010 г.)

 Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 4 научных работ в научном сборнике магистрантов и молодых ученых, в сборнике научно-практической конференции молодых ученых и студентов, из них 2 публикации в изданиях «Білім және ғылым» рекомендованных ВАК РК.

                

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

             2. ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

 

Диссертация изложена на 80 страницах; состоит из обзора литературы,  которая состоит из иммунитета и из специфической иммунопрофилактики бруцеллеза животных, иммунологических методов исследования при инфекционных болезнях, материалов и методики исследования, собственные исследования, результатов,  заключения и списка использованных источников. Работа содержит 10 рисунка, 5 таблиц. Список литературы содержит 129 отечественных и зарубежных  источников.

          

2.1. Патоморфологические изменения в органах и тканях лабораторных животных, привитых вакцинами из штаммов бруцелл  82 и 82 –  ПЧ

Наиболее выраженные иммуноморфологические, патогистологические  изменения в органах и тканях морских свинок, вакцинированных штаммами бруцелл 82 и 82-ПЧ, обнаруживали в регионарных к месту введения вакцины правых паховых и контррегионарных левых паховых лимфоузлах и селезенке.

     Через  три дня после иммунизации  независимо от штамма вакцин  место инъекции было набухшим, на ощупь несколько болезненным.  При послеубойном исследовании отмечалась студенисто-гемморрагическая инфильтрация подкожной клетчатки, выраженное полнокровие сосудов и мелкоточечные кровоизлияния. Распад нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов наблюдался местами на значительном протяжении, а также по всей воспаленной ткани встречались макрофаги, загруженные гемосидерином, которые в местах геморрагий выступали в виде компактных скоплений.

       Лимфатические фолликулы селезенки  иммунизированных морских свинок  имели хорошо выраженные герминативные центры, которые состояли в основном из бластных клеток. Лимфоциты и лимфобласты селезенки имели нормальную ультраструкту, но ядра их были с признаками функциональной активности. Отмечалась некоторая гипертрофия  и фрагментация каналов эндоплазматической сети и комплекса Гольджи. Кроме того, у животных вакцинированных штаммами бруцелл 82  в регионарных лимфоузлах мукоидное набухание стенок мелких сосудов было выражено сильнее и увеличено  количество макрофагов, содержащих в цитоплазме пигменты. Следует отметить, что у морских свинок, привитых штаммом 82 в этих лимфоузлах обнаруживали сильно выраженные небольшие очаговые скопления эпителиоидных клеток в корковом веществе, в печени отмечали зернистую, а местами и вакуольную дистрофию.

По истечении  семи суток после иммунизации в тканях на месте введения вакцины возникали значительных размеров очаги продуктивного воспаления с некротическими фокусами.

 Микроскопически  в местах некроза отмечалось  густое скопление хроматина ядер, распавшихся клеток с наличием среди них небольшого числа сохранившихся нейтрофилов и лимфоцитов. Вокруг некротического очага обнаруживалась обширная зона молодой грануляционной ткани с фокусами диапедезных кровоизлияний.

В почках капилляры  сосудистых клубочков были неравномерно налиты, а некоторые почечные клубочки имели лапчатый вид. В сердечной мышце отмечалось полнокровие сосудов. В надпочечниках наблюдалось расширение коркового вещества органа за счет гиперплазии клеток пучковой зоны и умеренное кровенаполнение капилляров.

Через 10 – 14 дней после вакцинации в лимфоидно-гиперпластический и макрофагальный процесс в лимфатических  узлах усиливались.

 К этим  срокам исследования  фолликулы  в правом паховом лимфоузле   имели расширенные герминативные  центры, мякотные тяжи были гиперплазированы и содержали большое количество клеток плазмоцитарного ряда. Стенка мелких кровеносных сосудов была в состоянии мукоидного набухания. В контррегионарном левом паховом и отдаленных лимфатических узлах гиперпластические пролиферативные процессы хотя и усиливались, но по интенсивности уступали регионарному правому паховому.