Иммуноморфологическая оценка эффективности примененения противобруцеллезных вакцин

В селезенке  отмечалось усиление лимфоидно-гиперпластического и макрофагального процессов. Наблюдалось расширение герминативных центров фолликулов, гиперплазия лимфоидной ткани периартериальных гильз, умеренное депонирование красной пульпы кровью, мукоидное набухание стенок мелких сосудов.

 Кроме того, у животных, вакцинированных штаммами  бруцелл 82, в лимфоузле было  увеличено число макрофагов, загруженных  пигментами, и сосудов с явлениями мукоидного и фибринозного набухания, а также фибринозного некроза их стенок. У морских свинок, иммунизированных штаммом 82, в некоторых синусах отмечали лимфостаз и выпот нежных сеток фибрина в их просвете.

Лимфоидно-гиперпластический  и макрофагальный процессы наблюдали и в  отдаленных лимфоузлах, но интенсивность плазмоклеточной реакции в них проявлялась слабее.

На двадцать первые сутки после введения вакцины  лимфоидно-гиперпластическая и плазмоклеточная  реакция в лимфоузлах подопытных животных были сходны с таковыми, отмеченными на четырнадцатые сутки опыта. Разница заключалась в том, что среди клеточных элементов мякотных тяжей лимфоузлов преобладающими были плазматические клетки. В селезенке морских свинок на этот срок исследования отмечались лимфоидно - гиперпластическая и плазмоклеточные реакции, они были сходны с таковыми, отмеченными на 14 сутки после инъекции вакцины.     

  В печени, почках и миокарде полнокровие сосудов, зернистая дистрофия паренхиматозных клеток и очаговые скопления мононуклеарных клеток в интерстициальной ткани на 21-е сутки после иммунизации сохранились почти на прежнем уровне. Помимо этого, у морских свинок, иммунизированных штаммами 82, в правых паховых лимфоузлах наблюдали больше сосудов микроциркуляторного русла с фибриноидным некрозом и макрофагов, загруженных гемосидерином, а также в корковом веществе отмечали разрастание молодой соединительной ткани.

Через двадцать восемь дней после вакцинации иммуноморфологические  изменения в лимфатических узлах все еще оставались хорошо выраженными. В правом паховом лимфоузле фолликулы имели расширенные герминативные центры, перифолликулярная зона их заметно обеднена клеточными элементами, мякотные тяжи гиперплазированы, а мозговые синусы расширены. В последних обнаруживались скопления эритроцитов, лейкоцитов и макрофагов, а также скопления лимфоцитов в мозговом слое заглоточного лимфатического узла и скопление лимфоидно-гистиоцитарных клеток в трабекулах лимфоузла. Среди плазмоцитов преобладали зрелые формы. В селезенке число фолликулов с расширенными герминативными центрами увеличилось. Больше стало артериол, венул и капилляров с мукоидным набуханием стенок. По ходу тяжей от коркового вещества к воротам узла в мозговых тяжах и в красной пульпе селезенке отмечали значительное количество плазмоцитов, особенно зрелых форм.

Мышечная ткань  на месте введения как вакцины  из штамма бруцелл 82-ПЧ, так и штамма 82  на этот срок была без заметных морфологических изменений. В паренхиматозных  органах на этот срок исследования иммуноморфологические изменения были несущественны, за исключением лишь слабо выраженной зернистой дистрофии паренхиматозных клеток.

 В легких обнаруживали  умеренное кровенаполнение сосудов,  утолщение межальвеолярных перегородок  за счет инфильтрации их лимфоидно-гистиоцитарными клетками, а также, скопления лимфоидных клеток в перибронхиальной и периваскулярной тканях с формированием лимфоидных фолликулов.

 Помимо этого, у  лабораторных животных иммунизированных  штаммами 82, в правых паховых лимфоузлах  наблюдали такие же изменения как в предыдущий срок. В контррегионарных и отдаленных лимфоузлах иммуноморфологические реакции были несколько ниже, чем в регионарных. В матке обнаруживали некроз эпителия некоторых желез со скоплением в этих участках мононуклеарных клеток.

Следовательно, противобруцеллезные вакцины из штаммов 82 и 82-ПЧ вызывают в организме привитых морских свинок выраженные однотипные иммуноморфологические реакции, которые несколько варьируют в зависимости от степени реактогенности и остаточной вирулентности этих прививочных препаратов. Сравнительный анализ полученных результатов показал, что вакцина из штамма бруцелл 82-ПЧ является менее реактогенной по сравнению с другими вакцинными препаратами против бруцеллеза животных.

 

2.2. Динамика     уровня    содержания    иммунокомпетентных  клеток в крови и органах вакцинированных морских свинок

Вакцинация оказало влияние  и на состав плазматических клеток  лимфоузла и селезенки. Антителообразующие клетки в гистосрезах лимфоузлов и селезенки, после обработки  соответствующей меченой сывороткой, давали специфичную ярко-зеленую флуоресценцию, которую оценивали по интенсивности свечения в крестах.

Результаты  подсчета антителообразующих клеток в  регионарном к месту введения вакцины правом паховом лимфоузле  и селезенке представлены в таблице 1.

 

Таблица 1  Динамика содержания антителообразующих клеток в регионарном лимфоузле  и селезенке морских свинок, иммунизированных штаммом бруцелл 82-ПЧ

Срок  исследования, дни	Селезенка	Лимфоузел
1 3 5 7 10 15 22 29 Показатели  интактных животных	43,6 ±2,07 74,30 ±3,90 103,09 ±3,53 116,12+3,76 138,34 ±3,53 119,12 ±1,76 76,02 ±3,52 54,32 ±3,72   22,34 ±1,22	50,69 ±2,16 84,66 ±3,54 119,10 ±3,09 143,26 ±2,45 159,02 ±1,18 130,56 ±3,20 96,33 ±3,39 68,35 ±1,48   35,06 ±1,59

Вакцинация  усиливала образование антителообразующих клеток в этих лимфоидных органах начиная уже с первого дня, пик которых наблюдали спустя 10 суток после инокуляции препарата.

Начиная с 15-го и до 29-го дня опыта отмечали снижение количества плазматических клеток как  в селезенке, так и в регионарном лимфоузле. Причем, отличия показателей подопытных животных, по сравнению с интактными, во все сроки исследования  были статистически достоверными.

Иммунизация оказала  соответствующее влияние на состав антителообразующих клеток регионарного лимфоузла и селезенки. Данные об этом приведены в таблицах 2 и 3. 

 

 

 

 

 

Таблица 2 Состав антителообразующих клеток (%) регионарного лимфоузла морских свинок, вакцинированных штаммом бруцелл 82-ПЧ

 

Срок  исследования, дни	Плазмобласты	Незрелые  плазмоциты	Зрелые  плазмоциты
1 3 5 7 10 15 22 29 Показатели  интактных животных	14,61±0,43 29,25±0,90х 20,87±0,68х 13,33±0,39 11,06±0,58 7,33±0,33 5,68±0,55 5,51±0,35     7,57±0,89	83,27±1,13х 67,33±0,35х 73,26±2,05х 78,68±3,59х 86,32±0,67 87,99±2,92 88,69±0,42 82,29±2,06х     90,9±82,56	8,20±0,46 9,48±0,33х 11,93±1,18х 14,05±2,35х 8,66±0,39 10,74±1,78 11,68±0,32х 18,26±1,02х     7,49±0,59
Примечание  – Х отмечены достоверные различия Р<0,05

 

      Как видно из данных таблицы  3, вакцина уже через сутки после  введения вызывала повышение уровня содержания плазмобластов в регионарном лимфоузле, пик которой отмечали на третий день опыта. Показатели последних и пятых суток исследований были статистически достоверными (Р<0,05). Затем уровень содержания плазмобластов снижалась до минимального значения на 29-е дни, а в дальнейшем процентное содержание этих клеток нормализовалось и к концу опыта  показатели их приближались к таковым интактных животных.

    Достоверное  снижение уровня содержания незрелых  плазмоцитов в лимфоузле наблюдали  спустя 1, 3, 5 и 7 суток, а также через 29 дней после иммунизации. В остальные сроки исследования также отмечали некоторое снижение их содержания, но эти данные были не достоверными.

    Количество  зрелых плазмоцитов в лимфоузле  у интактных животных составило  7,49±0,59%. Вакцинация способствовала достоверному увеличению числа зрелых плазматических клеток на 3,5 и 7 сутки, а затем на 10-й день опыта наблюдали снижение их уровня до 8,66±0,39%.    Процентное содержание плазмобластов в селезенке морских свинок таблица 4 до вакцинации составило 7,33±0,67%. Через сутки после иммунизации их количество достоверно увеличилось (Р<0,05) и на третий день опыта отмечали максимальное их число (23,05±1,16%). Далее наблюдали постепенное снижение этих клеток до 15-го дня исследования и они оставались на этом уровне до конца эксперимента.

 

Таблица 3 Состав антителообразующих клеток (%) селезенки морских свинок, привитых вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ

 

Срок  исследования, дни	Плазмобласты	Незрелые  плазмоциты	Зрелые  плазмоциты
1 3 5 7 10 15 22 29 Показатели  интактных животных	12,37±0,20х 23,05±1,16х 18,81±1,69х 13,07±1,55х 7,61±0,36х 7,76±0,60 7,98±0,81 7,99±0,92     7,33±0,67	83,64±0,49х 70,85±0,58х 74,11±1,76х 78,65±3,63х 85,39±0,68 90,62±0,90 83,52±1,02х 83,03±2,09х     90,04±0,58	10,05±1,21 12,16±2,91 13,14±1,16 12,32±0,65 11,06±0,60 7,68±0,35 14,56±1,54х 15,02±0,60х     8,69±0,63
Примечание - Х отмечены достоверные различия Р<0,05

 

    

      Показатели незрелых плазмоцитов,  по сравнению с таковыми интактных,  уже на первые сутки исследования достоверно снизились до 83,64+0,49, а на третий день - до 70,85±0,58% (Р<0,05). Затем наблюдали постепенную нормализацию к 15-му дню, а в дальнейшем происходило повторное достоверное снижение этих данных с 22-х суток и до конца срока исследования.

     С  первых дней опыта отмечали  повышение процентного количества  зрелых плазмоцитов, которые к  седьмым суткам исследования  достоверно увеличивались в два  раза по сравнению с таковыми  интактных животных. В дальнейшем  наблюдали снижение этого показателя, но начиная с 22 и до 120-го дня снова происходило статистически достоверное увеличение зрелых антителообразующих клеток (Р<0,05).

      В наших исследованиях увеличение плазмобластов в лимфоидных органах объяснялось тем, что эти органы вырабатывали их в ответ на введение прививочного препарата, а достоверное снижение незрелых плазмоцитов и статистически достоверное увеличение зрелых антителообразующих клеток - переходом первых в более зрелые формы.

    Известно, что после кооперации иммунокомпетентных клеток (Т- и В-лимфоциты, макрофаг), В-лимфоциты дифференцируются в плазматические клетки, продуцирующие специфические антитела. Поэтому для четкого представления иммунологических процессов, вызванных вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ,   изучали динамику содержания Т- и В-лимфоцитов в периферической крови подопытных морских свинок и проводили подсчет антителообразующих плазмоцитов в гистосрезах лимфоузлов и селезенке. Для изучения степени повреждающего действия прививочного препарата проводили подсчет количества аутоантителообразующих клеток в периферической крови лабораторных животных, а также выявляли иммунные комплексы антиген - антитело, откладываемые в стенки сосудов микроциркуляторного русла внутренних органов.

     Исследования  показали, что в крови морских свинок Т-лимфоцитов составили 22,11+1,36, В-лимфоциты - 13,18 +0,85%. Вакцинация заметно снизила количество Т-лимфоцитов на первый и, особенно, на третий день с последующим увеличением числа этих клеток на седьмой день. Причем и снижение, и увеличение их были статистически достоверны. В дальнейшем количество Т-лимфоцитов увеличивалось до 15-го дня, затем наблюдалось постепенное  снижение и на 29-е сутки после введения вакцины число их приблизилось к показателям интактных животных и оставалось примерно на этом уровне до конца исследования.

      Иммунизация вызвала также увеличение  количества В-лимфоцитов крови  морских свинок, пик которых отмечали  на 15-е сутки опыта. Затем происходило  постепенное уменьшение числа  этих клеток с нормализацией  и

х содержания на 29-е и последующие дни после вакцинации.

 

Таблица 4 Динамика уровня содержания Т- и В- лимфоцитов у морских свинок,     привитых вакциной из штамма бруцелл 82-ПЧ

 

Срок  исследования, дни	Т-лимфоциты, %	В-лимфоциты, %
1 3 5 7 10 15 22 29   Показатели интактных животных	19,65±1,84 12,04±0,88х 19,96±1,49 28,81±1,61х 33,94±1,75х 43,02±2,53х 29,13±0,71х 21,31±0,79 23,03±1,34   22,11±1,36	14,99±0,78 17,22±0,88  18,03±0,55х 18,39±0,70х 22,27±0,87х 26,16±2,28х 23,1±50,90х 13,94±1,06 14,02±1,46   13,18±0,85
Примечание - Х отмечены достоверные различия Р<0,05