Вирус чумы крупного рогатого скота

2.5. Гемагглютинирующие свойства. 

 Вирус агглютинирует эритроциты амфибий, рептилий, птиц, человека, мышей и морских свинок. Эритроциты КРС, овец, коз, свиней и лошадей агглютинируются не всеми штаммами вируса. Разнообразие в агглютинабельности эритроцитов КРС зависит от ионной силы, концентрации солей и рН р-ра. Инагглютинабельность эритроцитов определенных видов объясняется, вероятно, быстрой элюцией с них вируса. Приблизительно 105 инфекционных единиц (ИД 5о) вируса равны 1 ГА.Некоторые штаммы вируса теряют ГА-активность при 56°С за 5 мин, сохраняя инфекционные свойства, другие, наоборот, сохраняют ГА-способность после прогревания при 56°С в течение 180-240 мин, а инфекционная активность их утрачивается через 90 мин Для отдельных штаммов НБ характерна определенная температура, при которой они утрачивают ГА-активность. Это свойство можно использовать для дифференциации штаммов. ГА лентогенного шт. В1 в инфицированных клетках ХАО накапливаются к 12 ч культивирования в более низких титрах (1:16 - 1:32), чем ГА велогенного (Т/53) штамма (1:64 - 1:128). Вирус НБ, выращенный в КЭ, состоит из инфекционных и неинфекционных ГА частиц. У этих 2 типов частиц изучены структурные белки, ГА- и нейраминидазная активности, полипептидный состав жирных кислот в липидах мембраны. Фиксация эритроцитов цыплят гаотеральдегидом не снижает их агглютинабельности по отношению к вирусу НБ. Фиксированные таким образом эритроциты можно использовать в РГА и РТГА после хранения при температуре 4°С в течение 2 мес. Велогенные штаммы отличаются от лентогенных по ГА-свойствам. Дифференциация указанных возбудителей - обработка их в течение 1 ч азотистой кислотой при рН 4 и температуре 37°С.

  
 
        2.6. Особенности культивирования в различных живых системах. 

Вирус НБ хорошо культивируется не только на восприимчивой птице, но и на куриных эмбрионах, изолированных ХАО, в культуре фибробластов КЭ, некоторых первичных и перевиваемых клетках. Репродукция вируса в культуре клеток сопровождается уплотнением цитоплазмы клеток, появлением в ней вакуолей; через 40 часов в цитоплазме некоторых клеток обнаруживают большое количество малых аморфных, эозинофильных включений.

2.7. Органный патогенез (этапы). 

 I ст.- проникновение вируса в организм:

Путь проникновения ВБН в организм – аэрогенный, т.е. воздушно-капельный или воздушно-пылевой, где фактором передачи являются капли слизи, мелко-дисперсная пыль, т.д.

II ст.- первичная локализация  и репродукция вируса происходит  в месте проникновения вируса  в организм (входные ворота).

III ст. - первичная диссеминация  вируса. ВБН быстро проникает  в кровь (уже через 96 ч после  заражения). Под действием вируса  нарушается проницаемость гематоэнцефалического барьера и развивается вирусемия, поэтому главным признаком заболевания являются обширные и локализованные кровоизлияния в различные системы и органы.

IV ст. - вторичная локализация  и репродукция вируса

V ст. -  вторичная диссеминация  вируса По кровяному руслу  вирус может попадать в различные  органы и ткани, вызывая поражения  центральной нервной системы, органов  дыхания, пищеварения, что обусловливает  широкий спектр клинических проявлений болезни.

VI ст. - выделение вируса  из организма через разные  выделительные системы: носоглотку, кишечник, кожу и т.д. с разными  секретами и экскретами - слизью, мочой, фекалиями, слюной и т.д.

3. Диагностика болезни, вызываемая этим вирусом 
 
3.1. Постановка предварительного диагноза.

 Диагноз на чуму крупного рогатого скота (чуму КРС) ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков болезни, патологоанатомических изменений и лабораторных исследований патматериала от павших и больных животных.

3.2. Анализ эпизоотологических данных

 В естественных условиях ньюкасловскую болезнь чаще регистрируют у птиц из отряда куриных (куры, индейки цесарки, фазаны, павлины). Описаны случаи заболевания голубей, воробьев, сорок, попугаев, ястребов. Степень восприимчивости к вирусу у разных пород и возрастных групп птицы неодинаковая. Молодые индюшата более восприимчивы к заражению, чем взрослые индейки Зарегистрированы вспышки болезни у цыплят при отсутствии заболевания взрослой птицы, находившейся в контакте с молодняком.

Источник возбудителя инфекции - больные и переболевшие птицы, выделяющие вирус со всеми секретами, экскретами, яйцами и выдыхаемым воздухом. Вирус начинает выделяться в инкубационный период через 24 ч после заражения птицы. В организме переболевшей птицы его обнаруживают в течение 2-4 месяцев, после клинической выздоровления.

Факторами передачи вируса могут быть яйца, перо и пух от больных птиц, тушки вынужденно убитой птицы, инвентарь, подстилка, корма. При инкубации инфицированных яиц вирус вызывает септицемию и гибель куриных эмбрионов. Погибший эмбрион гиперемирован, отечен, на голове и конечностях имеются точечные кровоизлияния. При содержании больших партий больной птицы инфицированный воздух из помещений выбрасываемся наружу, и разносится потоками ветра на расстояние 3-5 км. Заражение птицы происходит алиментарно и аэрогенно, через корм, воду, воздух, при совместном содержании здоровой и больной птицы. В благополучные хозяйства возбудителя чаще заносят с яйцами, поступающими для инкубации.

Вирус в активном состоянии может сохраняться в организме клещей. Установлена трансовариальная передача. Заболеваемость высокая - до 100%, летальность - 60 -90%.

 3.3. Краткая характеристика клинических признаков.

 При естественном течении инкубационный период длится от 5 до 15 дней (в среднем 5-6 дней).

Симптомы болезни довольно разнообразны. Описаны четыре формы клинического проявления болезни. При первой велогенной форме наблюдают угнетение, слабость, расстройство функции органов дыхания, диарею с появлением водянистых зеленоватых фекалий с примесью крови, тремор, опистстонус. Возможны параличи лап и крыльев, а также гибель птицы без каких-либо признаков. Смертность достигает 90%. Основной патологоанатомический признак - геморрагическое поражение пищеварительного тракта. Полагают, что эта форма болезни вызывается высокопатогенными (велогенными) азиатскими штаммами вируса. Велогенная висцеротропная НБ с летальностью до 100% в 1966 - 1973гг. получила эпизоотическое распространение, особенно в Европе и США. Вторая форма болезни характеризуется поражением, главным образом, органов дыхания (кашель, удушье) и нервной системы. Погибает от 10 до 50% заболевшей птицы. Среди цыплят гибель достигает 90%. Пневмоэнцефалит с летальностью до 100% был широко распространен в Западном полушарии в 1940-1950гг., в настоящее время регистрируется очень редко. Старая птица погибает редко. Некоторые мезогенные штаммы, вызывающие эту форму болезни, до сих пор используются в качестве вакцинных (шт. Н, Комаров и др.). Третью наиболее легкую форму болезни вызывают лентогенные штаммы вируса. Наблюдают незначительные изменения респираторного игерминативного трактов (оофориты и сальпингиты). Яйценоскость прекращается на 7-22-й день, снижается аппетит, легкий кашель можно услышать ночью. Четвертая - асимптоматическая форма протекает без признаков и заболевание часто определяется серологически или выделением вируса. 

3.4. Краткая характеристика основных патанатомических изменений.

 При вскрытии трупов птицы, павшей при остром течении болезни, обнаруживают воспаление слизистых оболочек носа и ротовой полости, полосчатые кровоизлияния на слизистой оболочке пищевода, зоб переполнен слежавшимися или жидкими кормовыми массами, слизистая оболочка желудка покрыта слизью. На границе железистого и мышечного отделов желудка видны кровоизлияния в виде пояска. В тонком кишечнике наиболее характерны очаги некроза и эрозии вокруг пейеровых бляшек, в толстом - везикулярные папулы, эрозии и изъязвления на всем протяжении слизистой оболочки. Селезенка в состоянии атрофии. На слизистой ротовой полости, пищевода и пилоруса - изъязвления, эпителий либеркюновых желез дегенерирован и слущен, вокруг расширенных и некротизированных крипт в слизистой оболочке тонкого кишечника скопление слизистого секрета и выпотевание нейтрофилов. Атрофия и некроз обнаружены в селезенке, печени, солитарных лимфоузлах и тимусе. Изменения в печени непостоянны. Селезенка поражается довольно часто. Она увеличена, бледная, пятнистая. Яичники гиперемированы, лицевые клетки увеличены, иногда разорваны, и желточная масса находится в брюшной полости. В сердечной мышце заметны кровоизлияния, в полости сердечной сорочки экссудат. Слизистые оболочки гортани и трахеи катарально воспалены. Характерно поражение кишечника:острый катар, резкая гиперемия, кровоизлияния, наличие фибринозно-некротических участков. Последние часто встречаются в двенадцатиперстной и тонкой кишках. Иногда поражается весь кишечник. Точечные и пятнистые кровоизлияния обнаруживают у 50-70 и даже 90% больных кур в двенадцатиперстной, прямой и слепой кишках. Изменения в печени носят непостоянный характер. У отдельных цыплят она увеличена, полнокровна, темно-вишневого цвета, иногда с единичными точечными геморрагиями под капсулой. Желчный пузырь наполнен желчью темного цвета, а на слизистой оболочке иногда отмечают точечные кровоизлияния и некротические очаги. Почки полнокровны и отечны. Селезенка нормальной величины или уменьшена в размере. Слизистые носовой полости, гортани и трахеи гиперемированы, с мелкими точечными кровоизлияниями, нередко с дифтерийными наложениями. Легкие у большинства кур бывают воздушными, светло-розового цвета, иногда с явлениями застойной гиперемии и отека. В перикарде и грудобрюшной полости небольшое количество жидкости светло-соломенного цвета. Сердечная мышца темного цвета, дряблая, полнокровная, иногда с мелкими точечными кровоизлияниями в области эпикардиального жира. В мозге явления отека и гиперемии, в отдельных случаях точечные кровоизлияния в твердой и мягкой мозговых оболочках и веществе мозга.

Постоянно обнаруживают поражения в железистом желудке и по всей длине кишечной трубки. Слизистая оболочка резко утолщена за счет отека и клеточной инфильтрации и находится в состоянии выраженного десквамативного катара. Покровный эпителий и эпителий крипт подвергаются дистрофии, некрозу и слущиванию в просвет. Крипты в форме вытянутых мешковидных бесстуктурных образований, окрашенных в серо-синеватый цвет. Соединительнотканные волокна подслизистого слоя сильно раздвинуты в результате воспалительного отека и инфильтрации лимфоцитами и другими клеточными элементами. Закономерно для НБ – некротические поражения толстого кишечника. Отмечают также сильное развитие клеточно-пролиферативных реакций в ЦНС и внутренних органах, по ходу капилляров и мелких сосудов, а в веществе мозга со стороны клеток микроглии - образование глиозных узелков. Кроме того, встречаются тигролиз, вакуолизация цитоплазмы и ядра, хроматолиз и гибель нейронов. В селезенке, печени, почках и ЖКТ пролиферативные явления вокруг сосудов, в междольковой, межканальцевой и подэпителиальной соединительной ткани. В селезенке резкая гиперплазия фолликулов, утолщение и фибриноидный некроз стенок сосудов с развитием околоконцевых артерий очагов крупноклеточной пролиферации с некрозами в центре их и отложением фибрина. В почках - признаки некробиоза эпителия канальцев и картина тяжелого нефроза. В легких - явления застойной гиперемии и отека и редко некротическая пневмония. Описанная картина вскрытия и гистологические изменения характерны для классического проявления НБ при заражении велогенными штаммами. Из многочисленных наблюдений установлено, что течение инфекции с поражением нервной системы или респираторного тракта без острого септического процесса чаще вызывается вирусами с природно ослабленной вирулентностью.

Наиболее характерны, особенно при остром течении болезни Ньюкасла, изменения воспалительного геморрагического характера в желудочно-кишечном тракте, изъязвления лимфатических бляшек кишечника. Специфичны кровоизлияния на слизистой оболочке в виде геморрагического пояска на границе между железистым и мышечным желудком. При наличии иммунного фона изменения могут быть нетипичными или вообще отсутствовать.

4. Виды патологического материала, направляемые от больных и павших животных.

 Вирус в зависимости от вирулентности и тропизма можно выделить из различных органов (головной мозг, костный мозг, трахея, кишечник, селезенка и др.), поэтому для исследования рекомендуется брать голову, легкие, трахею, селезенку, печень от только что павших или вынужденно убитых птиц.

Патматериал необходимо брать только в начале вспышки болезни (в первые 3-5 дней), так как по мере ее развития концентрация вируса резко снижается. Сразу после отбора материал отправляют в лабораторию в термосе со льдом. Допускается консервирование патматериала в стерильном 50%- ном глицерине.

 Пробы крови для  серологического исследования получают  путем прокола подкрыльцовой  вены или убоя цыплят (5-10) из  каждой исследуемой группы.  Повторное  взятие крови проводят через 15-20 дней.

Подготовка материала включает приготовление суспензии для заражения тест-объектов и препаратов-отпечатков для исследования в РИФ. Суспензию из внутренних органов (1:10) готовят на фосфатно-буферном растворе или МПБ с рН 7,2, после чего центрифугируют 15 минут при 2-3 тыс. об/мин. Надосадочную жидкость обрабатывают антибиотиками ( по 1000 ЕД / мл пенициллина и 1000 мкг стрептомицина ) в течение 30-60 минут при комнатной температуре .

Препараты - отпечатки готовят из печени, почек и селезенки на предметном стекле. При этом мазки должны быть тонкие и ровные, площадью не более 0,8 х 0,8 см по три отпечатка каждого кусочка органа на отдельном стекле. После высушивания на воздухе препараты фиксируют охлажденным ацетоном в течение 4-10 минут.

 
5. Этапы лабораторной диагностики.

 Диагноз болезни Ньюкасла ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.

 Массово применяемая иммунизация хозяйств, разный уровень иммунитета в хозяйствах и разница в вирулентности вируса болезни Ньюкасла в природе усложняют диагностику заболевания. Клиническое течение и результаты вскрытия могут обнаружить ВБН, но для окончательного диагноза необходимо лабораторное исследование (изоляция и идентификация возбудителя) и установление вирулентности.

Изоляция возбудителя обычно проводится на куриных эмбрионах, потом идентифицируется реакцией торможения гемагглютинации. Вирулентность, как правило, определяется этими тестами – определение среднего времени гибели куриных эмбрионов (mean death time, MDT); индекс интрацеребральной патогенности (ICPI); внутривенный индекс патогенности (IVPI).

Для лабораторной диагностики в лабораторию направляют трахею, легкие, селезенку, печень, головной мозг (или голову) от свежего трупа курицы. От нескольких кур одного птичника получают парные сыворотки: в начале заболевания и спустя 2-3 недели.

Вирус, в зависимости от его тропизма можно выделить из головного и костного мозга, трахеи, кишечника, селезенки, легких, печени. Для исследования рекомендуется брать голову, легкие, трахею и селезенку от только что павших или вынужденно убитых птиц. Вирус удается выделить только в период вспышки болезни. Через 15 дней выделить его обычными методами, как правило, не удается. Поэтому патологический материал необходимо брать в начале вспышки (в первые 3-5дн.) и направлять в лабораторию в термосе со льдом. Внутренние органы можно помещать в стерильный 50%-ный р-р глицерина на дистиллированной воде. Смывы из трахеи и клоаки лучше консервировать на холоде или при температуре не выше 4°С.