Санитарное-микробиологическое исследование воды

Коли – титром (КТ) называют наименьший объем воды, в котором обнаружена кишечная палочка.

Коли – индекс (КИ) называет число кишечных палочек в 1000 мл воды.

Кишечная  палочка является постоянным обитателем кишечника человека и животных, следовательно, ее присутствие в питьевой воде является индикатором фекального загрязнения, поэтому она отнесена к CПМ Чем выше концентрация БГКМ тем вероятнее присутствие в исследуемой воде патогенных бактерий (сальмонелл, возбудителей дизентерии и холеры). Показатели КТ и КИ указывают на санитарное состояние воды, ее пригодность в качестве питьевой.

             КТ и КИ определяют двумя  методами:

     1. Метод бродильных проб;

     2. Метод мембранных фильтров.

В нашем случае КТ и КИ мы определяли методом бродильных проб.

       Суть метода заключается в  посеве определения объемов исследуемой  воды в питательные среды накопления  с индикатором и поплавками, инкубации  ее при температуре +37⁰С, с последующим пересевом из забродивших пробирок на среду Эндо, дифференциацией выросших колоний и вычисления коли – титра воды по нормативам.

   Данный  метод основан на ферментативной  способности БГКП расщеплять  при помощи ферментов лактозу  или глюкозу до кислоты и  газа. Исследуемая вода засевается  в различных объемах в глюкозопептонную  среду с индикатором и поплавками, при наличии кишечной палочки  появляется помутнение, меняется  цвет индикатора (желтый переходит в красный), и появляются пузырьки газа в поплавках. Воду методом бродильных проб исследовали в три этапа по дням.

   Первый день. Проводили посев водопроводной воды. Для этого взяли 4 пробирки со средой Булижа (вишнево – красного цвета), добавили в каждую пробирку исследуемой воды, и в III и  IV пробирки прилили стерильной воды. Затем посевы поместили в термостат на 24 часа при температуре 43⁰С. Рост сапрофитной  микрофлоры при этой температуре подавляется.

	I	II	III	IV
Исследуемая вода, мл	10	5	1	0,1
Питательная среда, мл	5	2,5	2,5	2,5
Стерильная вода, мл	-	-	5	5

  Второй день. Провели учет результатов посева разных объемов воды. В пробирках 1 и 2 среда помутнела, приняла соломенно-желтое окрашивание, в «газовых» появился воздух- это говорит о наличии кишечной палочки. Во время роста кишечная палочка сбраживает разные углеводы в питательных средах. Для того чтобы убедиться, что изменения произведены кишечной палочкой, мы из каждого забродившего посева бактериологической петлей сделали пересев штрихом на агар Эндо, разделенный на сектора в чашках Петри, таким образом, чтобы появились изолированные колонии. Посевы на среде Эндо поместили в термостат (37⁰С) на сутки.

Третий  день. Учет результатов посева на среде Эндо. Появились красные с металлическим блеском, выпуклые слизистые колонии. Из полученных колоний делали мазки, окрашивали по Граму и микроскопировали. Методика приготовления препарата: Препараты для микроскопирования готовили на предметном стекле. Материалом служат взвеси бактериальных культур, выросших на питательных средах. Для приготовления мазка пробирку со взвесью бактерий держим в левой руке, в правой- бактериологическую петлю, тщательно прожигали ее на пламени горелки и, не выпуская из рук, около пламени открывали пробирку свободными пальцами правой руки, петлей захватывали каплю материала, пробирку закрывали, ставили в штатив. Свободной левой рукой брали предметное стекло за края, нанося на его поверхность каплю и легкими круговыми движениями растирали по стеклу, затем препарат высушивали на воздухе, петлю прожигали. Высушенный на воздухе мазок фиксировали – закрепляли на стекле. Затем мазок окрашивали.

Окрашивание по Граму: на фиксированный препарат на 2-3 мин накладывали небольшую полоску фильтровальной бумаги, пропитанную карболовым генцианвиалетом. После этого, не смывая водой, бумажку снимали и на мазок наносили раствор Люголя на 2-3 мин. Последний,так же не промывая водой, сливали, мазок обрабатываем 96% спиртом 30-40 с, затем хорошо промывали водой и дополнительно окрашивали рабочим раствором фуксина 40-50 с (до 1 мин). Вновь промывали водой, высушивали фильтровальной бумагой, микроскопировали.   

  Микрокартина: грамотрицательная палочка, расположена одиночно, края закруглены, спор не образует.

 

 

Это подтверждает наличие кишечной палочки в исследуемой  водопроводной воде.

                 

                                          Рис. 4 Кишечная палочка

  Подсчет колоний в чашках Петри и определение качества исследуемой воды. На МПА в чашках Петри подсчитали выросшие колонии. После подсчета колоний получаемый результат умножали на разведение и определяем среднее число.

   Количество  колоний на МПА в чашках  Петри=240, разведение 1*10⁴

    Среднее число = 240*1*10⁴/4=6*10⁶

   При  выполнении исследования и посева  не были соблюдены асептические  условия. 

    Качество  воды оценивали по содержанию микробов в 1мл:

              Хорошая вода ……………………….. до100

              Сомнительная вода ………………. от 100 до 500

              Плохая вода……………………………. от 500 и более 

   Так  как количество микробов в  1  мл разведенной воды составило  240 колоний, значит, наша вода является  сомнительной и для улучшения  ее качеств необходимо усилить  методы ее очистки. Мы разработали мероприятия  для улучшения качества воды, в аудитории можно поставить несколько разновидностей фильтров, например, чтобы понизить жесткость воды необходимо установить «Фильтр – умягчитель». Также можно воспользоваться фильтром, устраняющим  различные примеси.

     На водоочистных сооружениях  также можно установить более  мощные и современные фильтры  для очистки воды. Воду необходимо  подвергать, хлорированию, озонированию, УФ – облучению – эти методы  направлены на обеззараживание.

                      

 

 

 

 

 

 

                     4. ВЫВОДЫ И ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

    При выполнении данной работы было выявлено что вода, поступающая к нам на кафедру микробиологии, является сомнительного качества. Следовательно, употребление такой воды может привести к возникновению инфекционных заболеваний, одним из возбудителей которых является Escherichia coli.

1. При определении  МАФАнМ в водопроводной воде  нами было выявлено 240 колонний;

2. При определении  коли- титра было установлено, что в водопроводной воде присутствует кишечная палочка; необходимо принять меры по усилению очистки и обеззараживанию воды.

 3. Мы разработали мероприятия для улучшения качества воды.

 

                 

                       

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

                 СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Вербина Н. М. «Гигрометрия  с основами общей микробиологии» / Н. М. Вербина // - М, 1980г, стр. 416 – 418

2. Дудырев, Ю. И.  «Справочник  по гигиене сельскохозяйственных  животных» / Ю. И. Дудырев // - М, 1984г, стр. 85 – 86

3. Кузнецов, А. Ф. «Гигиена содержания  животных» Справочник / А. Ф. Кузнецов // - М. С. П. 2003г, стр. 105 -108

4. Кульский А. А. «Химия воды  и микробиология» / А. А. Кульский // - М. 1999г. 

5. Лабинский А. С. «Общая и  санитарная микробиология с  техникой микробиологических исследований» / А. С. Лабиский / - М. 1997г.

6. Никитенко, А. М. «Санитарно- гигиенический состав воды» / А. М. Никитенко, В. А Журбенко // - Белая Церковь 1909г. Стр. 4-7

7. Никитин Е. Б. «Практикум  по микробиологии»/ Е. Б. Никитин  //- Плалодар 2004г.

8. «Руководство по контролю качества  питьевой воды»  / - Т. 1. – ВО1 –  Женева, 1994г.

9. Справочник по микробиологическим  и вирусологическим методам исследования / Под ред. М. О. Биргера // - М. 1982г.

10. «Методы для унификации санитарно  – микробиологических исследований  воды» /  Сборник СЭВ; Бад  Эльстер 1979г.

11. Научно – производственная  компания «Аргентум – ЭКО» // - М. 2001г.