Санитарно-бактериологическое исследование питьевой воды

Стерилизация  шприцев

Шприцы стерилизуют  в разобранном виде: отдельно цилиндр  и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 мин. При работе со спороносной  миклофлорой стерилизацию производят в автоклаве при 132±2ºС (давл. 1,5 атм) – 30 мин.

Простерилизованный шприц  собирают после того, как он остынет  в цилиндр вставляют поршень, надевают иглу, предварительно вынув  из нее мандрен. Иглу, цилиндр и  поршень берут пинцетом, который  стерилизуют вместе со шприцем.

Стерилизация  металлических инструментов

Металлические инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) стерилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление  ржавчины и потерю остроты. Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в воду рекомендуется обертывать ватой.

Стерилизация  бактериальных петель

Бактериальные петли, сделанные  из платиновой или нихромовой проволоки, стерилизуют в пламени спиртовой  или газовой горелки. Такой способ стерилизации получил название прокаливания или фламбирования.

Петлю в горизонтальном положении вносят в нижнюю, наиболее холодную, часть пламени горелки, чтобы не произошло разбрызгивания сжигаемого патогенного материала. После того как он сгорит, петлю  переводят в вертикальное положение, накаливают докрасна вначале нижнюю, затем верхнюю часть проволоки и прожигают петледержатель. 

Подготовка  к стерилизации и стерилизация бумаги, марли и ваты

Вату, марлю, фильтровальную бумагу стерилизуют в сухожаровой  печи при температуре 160ºС в течение часа от момента показания термометром данной температуры или в автоклаве при давлении 1 атм в течение 30 мин.

Перед стерилизацией  бумагу и марлю нарезают кусочками, а вату сворачивают в виде шариков  или тампонов нужной величины. После  этого каждый вид

 

 

материала в отдельности  по одной или несколько штук заворачивают в плотную бумагу. При разрыве  пакета простерилизованный материал следует  стерилизовать повторно, так как  стерильность его нарушается.

Стерилизация  перчаток и других резиновых изделий

Изделия из резины (перчатки, трубки и т. д.), загрязненные вегетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе гидрокарбоната натрия или  текучим паром в течении 30 мин; при загрязнении спороносной  микрофлорой в автоклаве при  давлении 1,5 – 2 атм в течение 30 или 20 мин.

Резиновые перчатки перед  стерилизацией внутри и снаружи  пересыпают тальком для предохранения  их от склеивания. Между перчатками прокладывают марлю. Каждую пару перчаток завертывают отдельно в марлю  и в таком виде помещают в биксы.

Стерилизация  патогенных культур микробов

Пробирки и чашки, содержащие культуры микробов, не нужные для дальнейшей работы, складывают в металлический  бак, пломбируют крышку и сдают на стерилизацию. Культуры патогенных микробов убивают в автоклаве в течение 30 мин при давлении 1 атм. Вегетативные формы микробных культур разрешается уничтожать кипячением. Стерилизуемый материал заливают холодной водой (лучше 2 – 5 %  щелочным раствором) и ставят на огонь, предварительно запломбировав крышку бака. Крышка должна иметь несколько маленьких отверстий для выхода пара. Культуры микробов кипятят 2 ч с момента закипания воды. Сдача баков для стерилизации в автоклавную производится специально выделенным лицом под расписку. Режим стерилизации регистрируется в в специальном журнале.

Правила работы с автоклавом

Перед началом работы осматривают автоклав и контрольно-измерительную  аппаратуру. В автоклавах с автоматическим регулированием пара на электровакуумном манометре водопаровой камеры стрелки  устанавливают в соответствии с режимом стерилизации: нижнюю стрелку ставят на 0,1 атм ниже,

 

 

верхнюю на 0,1 атм выше рабочего давления.

Водопаровую камеру заполняют  водой до верхней отметки водомерного  стекла. В период заполнения водой  вентиль на трубе, по которой пар  поступает в камеру, держат открытым для свободного выхода воздуха из котла.

Стерилизационную камеру автоклава загружают стерилизуемым  материалом. После этого крышку (или  дверь) автоклава закрывают, закрепляя  плотно центральным затвором или  болтами; чтобы избежать перекоса, болты завинчивают крест-накрест (по диаметру). Затем включают источник подогрева (электрический ток, пар), закрывая вентиль на трубе, соединяющей источник пара со стерилизационной камерой. С началом парообразования и создания давления в водопаровой камере производят продувку (удаление воздуха из стерилизационного котла). Способ удаления воздуха определяется конструкцией автоклава. Вначале воздух выходит определенными порциями, затем появляется ровная непрерывная струя пара, указывающая, что из стерилизационной камеры воздух полностью вытеснен. После удаления воздуха кран закрывают, и в стерилизационной камере начинается постепенное повышение давления. Началом стерилизации считается тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. После этого интенсивность подогрева уменьшают, чтобы давление в автоклаве в течение нужного времени оставалось на одном уровне.

По окончании времени  стерилизации подогревание прекращают. Закрывают вентиль в трубопроводе, подающем пар в стерилизационную камеру, и открывают вентиль на конденсационной (нисходящей) трубе для снижения давления пара в камере. После падения стрелки манометра до нуля медленно ослабляют прижимные приспособления и открывают крышку (дверь) автоклава.

Температура и продолжительность  стерилизации определяются качеством стерилизуемого материала и свойствами тех микроорганизмов, которыми он заражен.

Стерилизация  текучим паром

 

 

 

Стерилизация текучим  паром производится в текучепаровом  аппарате Коха или в автоклаве  при не завинченной крышке и открытом выпускном кране. Баки с отработанным материалом переносят на металлических подносах с высокими бортами в присутствии сопровождающего лица, допущенного к работе с заразным материалом.

Виды стерилизации

Стерилизация кипячением

Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторе. В стерилизатор наливают дистиллированную воду, так как водопроводная образует накипь. Стеклянные предметы погружают в холодную, металлические предметы в горячую воду с добавлением гидрокарбоната натрия. Стерилизуемые предметы кипятят на слабом огне. Началом стерилизации считается момент закипания воды в стерилизаторе. По окончании кипячения инструменты берут стерильным пинцетом, который кипятят вместе с остальными предметами.

Стерилизация  сухим жаром

Стерилизация сухим  жаром производится в печи Пастера. Подготовленный к стерилизации материал кладут на полки так, чтобы он не соприкасался со стенками. Шкаф закрывают и после этого включают обогрев. Продолжительность стерилизации при температуре 150.*С – 2 ч, при 165ºС – 1 ч, при 180ºС – 40 мин, при 200º - 10-15 мин (при 170ºС бумага и вата желтеют, а при более высокой температуре обугливаются).

Началом стерилизации считается  тот момент, когда температура  в печи достигнет нужной высоты. По окончании срока стерилизации печь выключают, но дверцы шкафа не открывают до полного охлаждения, так как холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование трещин на горячей посуде.

Тиндализация

Тиндализация – дробная  стерилизация с применением температуры  ниже 100ºС, предложенная Тиндалем. Прогревание  стерилизуемого материала производят в

 

 

водяной бане, снабженной терморегулятором, по часу при температуре 60-65ºС в течение 3 дней. В промежутках  между прогреваниями обрабатываемый материал выдерживают при температуре 25ºС для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3. Микробиология

 

1. Приготовление питательных сред

 

Основы питательных  сред

Питательные среды служат для выделения из исследованного материала чистых культур микробов и изучения их свойств. Питательные среды являются основой бактериологических работ, не редко определял своим качеством результаты исследования.

В состав сред, применяемых  для выращивания бактерий, входят необходимые для построения белков цитоплазмы органогены: азот, фосфор, углерод, кислород, неорганические соединения, содержащие Na, Mg, Fe, S, микроэлементы CO, J, Mg, B, Zn,Cu. Все перечисленные элементы должны находиться в питательной среде в удобоусвояемом для данного микроорганизма соединения, причем требования различных микробов в этом отношении не одинаковы. Потребность в кислороде и водороде бактерии удовлетворяется главным образом за счет поступления в клетку воды.

По характеру усвоения азота патогенные микроорганизмы делятся следующим образом: один из них извлекают азот из простых аммонийных соединений, другие нуждаются в аминокислотах, третьи расщепляют высокомолекулярные вещества – лептоны, представляющие собой продукты неполного ферментативного переваривания белков. Строго паразитические виды бактерий размножаются только в присутствии негативного, т.е. не измененного белка.

Источником углерода для патогенных бактерий являются углеводы: сахар, многоатомные спирты, органические кислоты и их соли.

Потребность бактерий в  неорганических элементах удовлетворяется  прибавлением к питательной среде солей NaCl, KH2PO4, H2HPO4 и т.д.

Наряду с перечисленными органическими и неорганическими  элементами

 

 

 

бактерии нуждаются  в ростовых факторах, которые по своей роли соответствуют витаминам  для животных. Источником факторов роста являются прибавляемые к питательной среде продукты растительного и животного происхождения, содержащие в своем составе никотиновую, пантотеновую, парабензольную кислоты, витамины А, В, С и др.

Питательные вещества могут  усваиваться микробами только при  определенной реакции питательной среды, т.к. проницаемость оболочек микробных клеток изменяется в зависимости от рН среды.

Продукты для  приготовления питательных сред

1. Продукты животного происхождения (мясо, рыба, молоко, кровь);
2. Продукты растительного происхождения (картофель, рис и т.д.);
3. Органические и неорганические соединения определенного химического состава.

Питательные среды, приготовленные из продуктов растительного и  животного происхождения, несмотря на то, что они могут быть стандартны и не имеют определенного химического состава, находят широкое применение в практике микробиологии.

Синтетические питательные  среды, составленные из химических соединений, используют преимущественно для  изучения обмена веществ микробной  клетки.

Требования  к питательным средам

Питательные среды должны:

1. Содержать необходимые для питания микроба питательные вещества;
2. Иметь реакцию рН, оптимальную для выращиваемого вида микроба;
3. Иметь достаточную влажность, т.к. микробы питаются по законам Диффузии и Осмаса;
4. Обладать изотопичностью;
5. Быть стерильными, обеспечивая тем самым возможность выращивания чистых культур микробов.

Питательные среды подразделяются на среды общего назначения и специальные.

 

 

К первой группе относятся мясопептонные среды: агар-агар, бульон, питательный желатин. Среды общего назначения используют для выращивания многих патогенных микробов и применяют в качестве основы для приготовления специальных сред, добавляя к ним кровь, сахар, молоко, сыворотку, и другие ингредиенты, необходимые для размножения того или иного вида микроба.

К специальным средам относятся элективные (избирательные) и дифферинциально-диагностические  среды.

Элективные  среды

Принцип создания элективных питательных сред основан на удовлетворении основных биохимических и энергетических потребностей того вида для культивирования, которого они предназначаются.

Определенный состав и концентрация питательных веществ, микроэлементов, ростовых факторов при  строго определенном значении рН обеспечивают оптимальные условия для выращивания  одного или нескольких видов микроорганизмов.

Дифференциально-диагностические  питательные среды

Дифференциально-диагностические  питательные среды используют для  определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь  на особенностях его обмена веществ. В состав дифференциально-диагностических питательных сред, предназначенных для выявления сахаролитических и окислительно-восстановительных ферментов, вводят индикаторы: нейтральный красный, метиловый синий, водный голубой краситель и розоловую кислоту. Изменяя свою окраску при различных значениях рН, индикатор указывает на наличие или отсутствие расщепления, окисления или восстановления введенного в среду ингредиента.