Санитарно-бактериологическое исследование питьевой воды

Приготовление питательных сред

1. Питательный агар-агар (сухой):

Препарат в количестве 38,5г. размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят 3 мин. до полного расплавления агара, фильтруют через ватно-марлевый фильтр,

 

 

разливают в стерильные флаконы и стерилизуют автоклавированием  при температуре 121°С в течение 15 мин. Среду охлаждают до температуры 45-50°С, разливают в чашки Петри слоем 3-4мм. После застывания среды, соблюдая правила асептики, чашки подсушивают при t (37+1)°С в течение 40-60мин. Готовая среда в чашках прозрачная или слегка опалесцирующая желтого цвета.

2. Полужидкий питательный агар:

Размешать 23,5 г порошка М630 или 19,5 г порошка М630I в 1000 мл дистиллированной воды, содержащей 5 мл глицерина. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Разлить в пробирки для тестирования, заполнив их наполовину. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Быстро остудить под струей воды для застывания агара в вертикальном положении до комнатной температуры.

3. Питательный агар со стрептомицином:

Питательный агар со стрептомицином готовят из расчета содержания 100 мг стрептомицина на 1 мл питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Стерильно на стерильной дистиллированной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 мл. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры (45 - 49) °С, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 мл на 10 мл питательного агара.

4. Приготовление среды Эндо:

40 г. агара Эндо растворить в 1 л дистиллированной воды, прокипятить до полного расплавления агара 2-3 мин, профильтровать и снова довести до кипения, остудить до температуры 45-50°С, разлить в стерильные чашки Петри слоем 3-4 мм, после застывания подсушить при температуре (37±1)°С в течение 40-60 минут.

 

2. Посев микроорганизмов

 

 

 

Методы посева на среду

1. Посев из пробирки в пробирку: взять в левую руку наклонно между большим и указательным пальцами пробирку, края пробирок на 1 уровне;
2. В правой руке, как писчее перо держать бактериологическую петлю;
3. Прокалить петлю;
4. Вынуть пробки правой рукой, зажимая их между мизинцем и ладонью;
5. Края пробирок обжечь, ввести стерильную петлю в пробирку с посевным материалом, набрав небольшое количество, осторожно, не задевая края пробирки, перенести в другую пробирку;
6. При посеве в жидкую среду петлю слегка погрузить в среду и растереть посевной материал по стеклу пробирки, после чего смыть его средой;
7. При посеве на скошенный агар пробирку берут в левую руку, так чтобы основание пробирки находилось на поверхности кисти руки и посев осуществлялся под контролем глаза. Петлю с находящимся на ней пересеваемым материалом вводят в пробирку до дна, опускают плашмя на поверхность питательной среды и скользящими движениями наносят штрих снизу вверх, от одной стенки пробирки к другой.
8. После посева пробирки поджечь над спиртовкой, закрыть пробками, петли прокалить.

Посев из пробирки в чашку Петри

При посеве на поверхность  плотной питательной среды в  чашки Петри чашку держат в  левой руке. Дно ее с одной стороны  придерживают I и II пальцами, а с другой IV и V пальцами. Крышку, приоткрытую на столько, чтобы в образовавшуюся щель свободно входили петля или шпатель, фиксируют I и III пальцами или I и II пальцами. Небольшое количество исследуемого материала втирают бактериологической петлей в поверхность питательной среды у края чашки. Затем петлю прожигают, чтобы уничтожить избыток находящегося на ней материала. Линию посева начинают с того места, в котором находится материал. Бактериальную петлю кладут плашмя на питательную среду, чтобы не поцарапать

 

 

 

ее поверхности, и проводят штрихи по всей среде или по секторам, разграфив предварительно дно чашки на 4, 8, 16 равных частей.

При обилии в засеваемом материале микробов они растут в  виде пленки, покрывающей всю поверхность  питательной среды. Такой характер микробного роста получил название сплошного или газонного. Посев газоном производят, когда нужно получить большие количества микробной культуры одного вида. 

 

3.3 Определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре

 

3.3.1 Определение понятия  показателя

Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при t 37ºС в течении 24 ч, видимые с увеличением в 2 раза.

3.3.2 Выполнение анализа

Из каждой пробы делают посев не менее 2 объемов по 1 мл. После тщательного перемешивания пробы воды вносят по 1 мл в стерильные чашки Петри, слегка приоткрывая крышки. После внесения воды в каждую чашку вливают (8-12) мл (на чашку диаметром 90-100 мм) расплавленного и остуженного до (45-49)°С питательного агара после фламбирования края посуды, в которой он содержится. Затем быстро смешивают содержимое чашек, равномерно распределяя по всему дну, избегая образования пузырьков воздуха, попадания агара на края и крышку чашки. Эту процедуру производят на горизонтальной поверхности, где чашки оставляют до застывания агара.

Расплавленный агар на период проведения анализа помещают в водяную  баню или термостат, поддерживающие температуру (45-49)°С.

После застывания агара  чашки с посевами помещают в термостат вверх дном и инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (24±2) ч.

 

 

 

3.3.3 Учет результатов

Подсчитывают все выросшие на чашке колонии, наблюдаемые при  увеличении в 2 раза. Учитывают только те чашки, на которых выросло не более 300 изолированных колоний.

Количество колоний  на обеих чашках суммируют и делят  на два. Результат выражают числом колониеобразующих  единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой пробы  воды.

Если на одной из 2 чашек  подсчет невозможен, результат выдают на основании учета колоний на одной чашке. Если на двух чашках имеет место рост расплывчатых колоний, не распространяющийся на всю поверхность чашки, или выросло более 300 колоний и анализ нельзя повторить, подсчитывают сектор чашки с последующим пересчетом на всю поверхность. В этих случаях в протоколе отмечают «число КОЕ/мл - ориентировочно».

Если подсчет колоний  на чашках невозможен, то в протоколе  отмечают «сплошной рост».

Результаты  анализов

18.01.11.

Нет роста колоний

27.01.11.

Нет роста колоний

 

3.4. Правила  работы и поведения в бактериологической лаборатории

 

Особенностью бактериологических работ является постоянное соприкосновение  сотрудников лаборатории с заразным материалом, культурами патогенных микробов, заражёнными животными, кровью и  выделениями больного. Поэтому все сотрудники бактериологической лаборатории обязаны соблюдать следующие правила работы, которые обеспечивают стерильность в работе и предупреждают возможность возникновения внутрилабораторных заражений:

 

 

1. В помещения бактериологической лаборатории нельзя входить без специальной одежды — халата и белой шапочки или косынки.
2. Нельзя вносить в лабораторию посторонние вещи.
3. Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнее платье на халат.
4. В помещении бактериологической лаборатории категорически запрещается курить, принимать пищу, хранить продукты питания.
5. Весь материал, поступающий в лабораторию, должен рассматриваться как инфицированный.
6. При распаковке присланного заразного материала необходимо соблюдать осторожность: банки, содержащие материал для исследования, при получении обтирают снаружи дезинфицирующим раствором и ставят не прямо на стол, а на подносы или в кюветы.
7. Переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, наполненным дезинфицирующим раствором.
8. О случаях аварии с посудой, содержащей заразный материал, или проливания жидкого заразного материала надо немедленно сообщать заведующему лабораторией или его заместителю. Мероприятия по обеззараживанию загрязнённых патогенным материалом платья частей тела, предметов рабочего места и поверхностей осуществляют немедленно.
9. При исследовании заразного материала и работе с патогенными культурами микробов необходимо строго соблюдать общепринятые в бактериологической практике технические приёмы, исключающие возможность соприкосновения рук с заразным материалом.
10. Заражённый материал и ненужные культуры подлежат обязательному уничтожению, по возможности в тот же день. Инструменты, использованные в работе с заразным материалом, тотчас посте их употребления дезинфицируют, как и поверхность рабочего места.

 

 

11.При выполнении бактериологических работ нужно строго следить за чистотой рук: по окончании работы с заразным материалом их дезинфицируют. Рабочее место в конце дня приводят в порядок и тщательно дезинфицируют, а заразный материал и культуры микробов, необходимые для дальнейшей работы, ставят на хранение в запирающийся рефрижератор или сейф.

12.Работники бактериологической лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, возбудители которых могут встретиться в исследуемых объектах.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Используемая  литература

 

1. З.Н. Кочемасова, С.А.Ефремова, А.М.Рыбакова «Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования», г. Москва, «Медицина», 1982г.
2. З.Н. Кочемасова, А.М. Рыбакова «Санитарная микробиология и вирусология», г. Москва, «Медицина», 1987г.
3. «Микробиология», под ред.А.А. Воробьева. - М.: Медицина, 1998г.
4. Методические указания МУК 4.2.1018-01, Минздрав России, г.Москва, 2001г.
5. Шлегель Г. Общая микробиология. - М.: «Мир», 1987г.