Сущность хромотографического анализа

В первую очередь следует отметить отсутствие соответствующей современным требованиям общей фармакопейной статьи на метод. Скупое изложение основ хроматографии в XI-й Государственной Фармакопее не может методически обеспечить становление в России высокотехнологичного фармацевтического производства и в равной степени тормозит формирование современных аналитических под-разделений государственной службы контроля качества лекарственных средств.

Ранее нами отмечалась нецелесообразность прямого заимствования в рамках внедрения в России GMP и GLP зарубежного опыта в решении этой проблемы [1,2]. Это связано, в первую очередь, с необходимостью больших материальных затрат, как на приобретение оборудования (преимущественно зарубежного), так и на подготовку специалистов. В стране отсутствует единая система подготовки специалистов по ВЭЖХ применительно к фармацевтическому анализу, что привело к появлению в многочисленных ФСП на регистрируемые вновь или перерегистрируемые лекарственные средства, разнообразных методик хроматографического определения отдельных соединений. Данные методики в значительной мере отражают специфику лабораторно-методической базы организации-разработчика, и. учитывая сложность метода, не всегда воспроизводимы контрольно-аналитическими лабораториями на местах. Не оптимально подобранные аналитические условия определения многих соединений часто не позволяют получать удовлетворительные результаты при замене сорбента в колонке на его аналог, при отклонениях в составе экстрагента и элгоента, условий экстракции и элюирования (давление, температура, режим элюирования и т.д.) смене режима детектирования.

Немаловажное значение для точного определения низких концентраций действующих веществ, что характерно для целого ряда современных лекарственных препаратов, либо выявления примесей, особенно на фоне нескольких сопутствующих компонентов с близкими физико-химическими свойствами, имеет точное воспроизведение иногда не описанных Б ФСП особенностей методики. Большое значение в этой ситуации и мест и используемый метод обработки сигнала детектора, применяемые алгоритмы математического анализа хромато грамм. Безусловно, большинство задач фармацевтического ВЭЖХ анализа с успехом решается при наличии прибора, предназначенного для универсальных аналитических лабораторий и рассчитанного на определение низких концентраций разнообразных по свое природе веществ. Средняя рыночная стоимость такого прибора составляет 60-100 тысяч долларов США, а годовое обслужи-вание расходными материалами обходится в сумму порядка 5000 долларов. Очевидно, только немногие организации могут позволить себе подобное оснащение, особенно с учетом необходимости постоянной работы в отделах контроля качества фармацевтических предприятий или региональных контрольно-аналитических лабораториях сразу нескольких приборов, в силу большой продолжительности традиционно используемых процедур анализа.

Нами предлагалось ранее решение, основанное на применении унифицированного метода, позволяющего в одной и той же хроматографической системе (колонка с обращенной фазой, градиентное элюирование, УФ-детектирование) проводить анализ сотен соединений [1,2]. Идентификация пиков на хроматограмме исследуемого образна осуществляется путем сравнения их времен удерживания и спектральных характеристик в области УФ-спектра с параметрами, заранее полученными для стандартных веществ на откалибро-ванном приборе. Совокупность таких "справочных" параметров представляет собой "базу данных", а хроматограф, позволяющий осуществлять анализ с применением базы данных, можно назвать "ВЭЖХ-аналшатором". Техническими особенностями созданного в России автоматического ВЭЖХ-анализатора "Милихром А-02" является его простота в эксплуатации (базовая подготовка лаборанта-аналитика не более 1 недели), высокая надежность (выдерживает многомесячный круглосуточный режим эксплуатации и пересылку багажом или по почте), короткое время всего анализа (минуты), десятикратно меньший по сравнению со стандартными хроматографами расход элюента и сорбента для колонок, низкая стоимость, возможность любого серийного прибора работать в режиме средства измерения (автокалибровка).

Главным преимуществом предложенного подхода к фармакопейному анализу по сравнению с традиционным является существенное сокращение времени анализа при одновременном снижении затрат на проведение анализа в десятки раз. Так например, анализ субстанции ампициллина по требованиям Европейской фармакопеии занимает 17-18 часов н для его проведения необходимо приготовить 9 вспомогательных растворов. Этот же анализ на хроматограмме "Милихром А-02" занимает всего 30 мин и не требует использования каких-либо вспомогательных калибровочных растворов.

В настоящее время на подобных анализаторах наработана база в несколько сот соединений. Прибор позволяет надежно идентифицировать любое соединение из базы в многокомпонентных (до нескольких десятков веществ) смесях без использования стандартов. Применение подобных анализаторов в единой сети посредством подключения к Интернет (это конструктивно заложено в прибор) позволяет из одного центра управления контролировать состояние каждого прибора, а также "правильность" выполнения конкретного анализа; пополнять из единого источника базу данных, что решает проблему стандартных образцов в лабораториях на местах. На центральном сервере сети может накапливаться и первично автоматически обрабатываться вся информация о каждом выполненном анализе лекарственного препарата либо субстанции, сведения о выданном заключении; появляется возможность автоматического сопоставления результатов анализа различных лабораторий страны лекарственного препарата или фармацевтической субстанции из одной серии и принятия оперативною решения при выявлении отклонений от нормы. Таким образом, создан реальный прообраз единой надежно контролируемой в реальном масштабе времени системы контроля качества лекарственных средств. Ее масштабирование на территории всей страны возможно уже сегодня при наличии соответствующего финансирования.

Несколько лет на базе НИИ фармакологии Томского научного центра Сибирского отделения РАМН по указанию МЗ РФ действует Школа по подготовке специалистов по ВЭЖХ-анализу в фармации. На ней проводятся лекционные и практические занятия, приобретается опыт самостоятельного решения под руководством опытных специалистов сложнейших задач фармацевтического анализа. Школа предназначена как для начинающих сотрудников аналитических лабораторий, так и для химиков-аналитиков со стажем работы. За несколько лет в ней прошли подготовку более 50 специалистов Государственной системы контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораторий фармацевтических предприятий из 16 регионов страны. Организаторами Школы накоплен богатый опыт подготовки высококвалифицированных кадров, способных решать сложнейшие задачи фармацевтического анализа, в том числе с использованием уникальных отечественных ВЭЖХ-анализаторов "Милихром Л-02". Подготовлен оригинальный методический материал, наработан опыт дистанционного (с помощью Интернет) консультирования последующей работы выпускников Школы. Опыт Школы, при соответствующей поддержке и востребованности, также может быть масштабирован с целью обеспечения лабораторий необходимыми кадрами.

Таким образом, усилиями отечественных специалистов средств, не имеющей мировых аналогов и превосходящей по своим характеристикам наиболее передовые зарубежные системы контроля.

Список используемых источников

1. Аналитической  химии. Физико-химические методы  анализа. Под ред. Е. Н. Дорохова, Г. В. Прохорова, - М.: Высш. шк.., 1991. - 256с.

2. Курс  аналитической химии. Качественный  анализ, книга первая. Под ред. А. П. Крешков. Изд. 5-е, исправленное. - М.: Химия, 1981. - 416 с.

3. Курс  аналитической химии: Учеб. для с.-х. вузов. - 6-е изд., испр. и доп. - М .: Высш. шк. 1994. - 495с.

4. Аналитическая  химия. Книга 2. Физико-химические методы  анализа. Под ред. В.П. Васильева, - М.: Дрофа, 2004. - 384с