Шпаргалка по "Микробиологии"

Силу антитоксических  сывороток измеряют в международных  единицах (ME) по способности нейтрализовать определенную дозу токсина.

Т.к. лошадиные  сыворотки являются гетерологичными, они могут вызывать, особенно при повторном введении в организм, аллергические реакции на лошадиный белок Þ обязательный предварительный контроль на чувствительность организма к лошадиному белку (внутрикожная проба с 0,1 мл лошадиной сывороткой в разведении 1:100). Введение допустимо только если нет выраженной кожной реакции в течение 20–30 мин.

Антитоксические иммунные сыворотки нужно вводить  как можно раньше от момента заражения, так как АТ нейтрализуют токсин только до его адсорбции на клетке-«мишени».

Для уменьшения побочных эффектов из иммунных сывороток  выделяют чистые Ig, также используют гомологичные человеческие сыворотки. Сырьем для приготовления нормального Ig человека может служить плазма крови доноров, сыворотка плацентарной крови. Использование Ig человека для экстренной профилактики и лечения кори, коклюша, менингококковой инфекции, полиомиелита, скарлатины обусловлено присутствием АТ против соответствующих возбудителей в крови взрослых людей, вследствие бытовой иммунизации, перенесенных инфекций или вакцинации против них.

От специально иммунизированных доноров получают сыворотку крови для приготовления Ig целенаправленного действия для  экстренной профилактики и лечения  столбняка, клещевого энцефалита, гриппа, стафилококковой инфекции. Противоэнцефалитный иммуноглобулин получают из сывороток крови людей, проживающих в местах распространения данного заболевания, содержащих достаточно высокий уровень специфических противовирусных АТ.

Для создания пассивного иммунитета очень перспективно получение препаратов моноклональных АТ на основе гибридом из клеток человека. Такие препараты будут обладать наиболее целенаправленным действием при минимальных возможностях осложнений.

32. Диагностические биопрепараты. Диагностикумы для серологических реакций. Диагностические сыворотки. Принципы их получения.

Диагностикумы бывают:

а) антигенными  – получают из возбудителя, либо ипользуют  самого возбудителя

б) антительными – иммунные диагностические сыворотки  – получают иммунизацией лабор. животных.

Напр., используют сыворотки против лейкоцитарных  АГ – для типирования донора и  реципиента (при пересадках органов).

33. Иммунологическая толерантность.  Определение понятия, механизмы  формирования иммунологической  толерантности.

Иммунологическая толерантность – явление специфической иммунной ареактивности, приобретенной в результате предшествующего контакта с этим Аг. Это явление неспособности иммунной системы ответить на присутствие Аг.

Механизмы

А. Центральные связаны с непосредственным влиянием на функцию иммунных клеток:

1) клональное  абортирование

2) клональная делеция – элиминация  антигеном имм. клеток в тимусе (вероятно, апоптоз незрелых Т-лимфоцитов  наступает вследствие воздействия  на них Аг без сопутствующих  сигналов – интерлейкина  I и интерлейкина II), а также клеток В-зависимой популяции

3) повышение активности супрессорных  Т-клеток

4) блокада  эффекторных клеток (напр., блокада  синтеза В-клеткой антител вследствие  связывания её антигенных рецепторов  поливалентным антигеном

5) блокада, опосредованная введенными антителами – искусственно введенные АТ быстро элиминируют Аг и имм.ответ на развивается.

6) отсутствие  контрсупрессии Þ Т-хелперы не активируются

Б. Периферические не связаны с изменением функции иммунокомпетентных клеток. Обуславливают в некоторых системах состояние видимой ареактивности: "перегрузка антигеном", сывороточные антитела

34. Клеточные факторы иммунитета  для оценки иммунного статуса  организма (Е-РОК, РБТЛ, РТМЛ ).

Метод Е-РОК (Е-розеткообразующих  клеток)

Этот метод – общепризнанный стандартый метод колич. учета Т-лимфоцитов в периферической крови людей.

При смешивании лимфоцитов чка и эритроцитов  Баранова последние избирательно адсорируются только Т-лимфоцитами и образуют т.н. Е-розетки.

Розеткообразующей клеткой (РОК) считается лимфоцит, присоединивший 3 и более эритроцитов Баранова. Исходя из абсолютного кол-ва лейкоцитов в 1 л крови вычисляют абсолютное кол-во Т-лимфоцитов в 1 л крови.

У здоровых людей  Т-лимфоциты составляют 40-70% общего числа лимфоцитов.

РБТЛ (реакция бласттрансформации лимфоцитов

Основан на наличии митогенов, специфически действующих на Т- или на В-лимфоциты, что позволяет раздельно судить о функциональной активности Т- и  В-клеток. (Так, ФГА и конканавалин А стимулируют Т-кл., а митоген  Лапокосса и ЛПС эшеришии (E.coli) – В-клетки. Схема постановки реакции:

1) выделение  лимфоцитов

2) подсчет  кол-ва клеток и доведение суспензии  до нужной концентрации

3) посев клеток  и их последующее культивирование  в течение 72 часов

4) регистрация  результатов, включая:

  а) приготовление  мазков для подсчета процента  стимулированных лимфоцитов

  б) определение  интенсивности включения Н-3-тимидина (³Н)

РТМЛ (реакция торможения миграции лейкоцитов)

Используется для изучения акитвности лимфокининов. В основе РТМЛ лежит способность гранулоцитов и моноцитов крови, а также макрофагов к свободной миграции, которая тормозится под действием лимфокина. Миграцию и ее торможение под влиянием лимфокинов изучают в специальных капиллярах или на стекле под слоем агарозы. Результаты ингибиции миграции оценивают по разности площадей миграции клеток.

Оценка гуморального иммунитета (В-системы) включает определение  кол-ва В-лимфоцитов в крови с  помощью теста розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами, несущими на своей поверхности комплекс (антиэритроцитарные АТ + комплемент), с целью выявления на лимфоцитах рецепторов для комплемента и теста иммунофлюоресценции с использованием антисывороток против иммуноглобулинов чка.  Функциональную активность В-лимфоцитов оценивают косвенно по уровню сывороточных иммуноглобулинов различных классов – IgG, IgM, IgA, IgE.

35. Комплемент. Свойства, структура,  роль в организме, механизмы  активации.

СИСТЕМА КОМПЛЕМЕНТА – многокомпонентная самособирающуюся систему белков сыворотки крови, к/я играет важную роль в поддержании гомеостаза. Активируется в процессе самосборки, т.е. последовательного присоединения к образующемуся комплексу отдельных фракций (их 9). Продуцируются они ## печени, мононуклеарными фагоцитами и содержатся в сыворотке крови в неактивном состоянии.

Процесс активации  комплемента инициируется 2 путями:

Классический путь (1-4-2-3-5-6…). Инициирующим фактором является иммунный комплекс Аг-Ат, причем только содержащие Fc-фрагменты – IgG и IgM могут связывать С1-фракцию комплемента. При присоединении С1 к иммунному комплексу образуется Cl-эстераза → формируется энзиматически активный комплекс (С4b+С2а) – С3-конвертазой. Этот фермент расщепляет С3 на С3а и С3b. При взаимодействии субфракции С3b с С4 и С2 образуется пептидаза, действующая на С5. Если инициирующий иммунный комплекс связан с # мембраной, то самособирающийся комплекс С1-4-2-3 обеспечивает фиксацию активированной фракции С5, а затем С6 и С7. Последние три компонента фиксируют С8 и С9. При этом С5а+С6+С7+С8+С9= мембраноатакующий комплекс, после его присоединения # лизируется (гемолиз эритроцитов или бактериолизис).

Особенность альтернативного пути (D-B (P)) в том, что инициация может происходить без участия иммунного комплекса за счет ЛПС # стенки гр–, поверхностных структур вирусов, иммунных комплексов, включающих IgA и IgE. В этом случае необходимо участие сывороточного белка (пропердин), который активен лишь в присутствии ионов Mg²⁺ и факторов В и D. Фактор D в активной форме – протеиназа, расщепляет фактор В с образованием фрагмента Вb, к/й в комплексе с С3b является С3-конвертазой. Функция пропердина – стабилизация комплекса С3b-Вb.

При активации комплемента появляются продукты протеолиза компонентов С4, С2, С3 и С5. Одни из них (фрагменты  С4b, С2b, С3b, С5b) участвуют непосредственно в самосборке и активации системы комплемента. В отличие от них низкомолекулярные фрагменты С3а и С5а (АНАФИЛАТОКСИНЫ) играют роль в патогенезе болезней иммунных комплексов и других заболеваний, при которых резко ↑ связывание и активация комплемента в Ò.

Комплемент выполняет ряд функций:

цитолитическое и цитотоксическое  действие клетки-«мишени»;

анафилотоксины участвуют в  иммунопатологических реакциях;

↑ эффективность фагоцитоза иммунных комплексов (через Fc-рецепторы);

фрагмент С3b способствует связыванию и захвату иммунных комплексов фагоцитами, опсонизируя объекты фагоцитоза;

фрагменты С3b, С5а и Вb (хемоаттрактанты), участвуют в развитии воспаления.

В здоровом организме идет постоянное формирование иммунных комплексов (против Аг аутофлоры) Þ белки комплемента быстро обновляются. Потребление комплемента резко ↑ при патологиях, связанных с усиленным образованием иммунных комплексов при инфекциях и иммунопатологических состояниях.

36. Радиоиммунный анализ.

Сходен с ИФА, но вместо фермента на иммуноглобулине фиксируется радиоактивная метка (напр., в состав Ig включается атом трития - ³Н). После обработки препарата раствором таких иммуноглобулинов радиоактивное излучение регистрируется (с помощью микродатчиков либо методо сцинтилляций в геле, либо др. методом).

Метод очень чувствителен и относительно легко выполним.

37. Кооперация клеток в иммунном  ответе. Процессинг антигенов макрофагами  и В-лимфоцитами. Лимфокины.

Патрульные макрофаги, обнаружив  в крови чужеродные белки (клетку), предъявляют его Т-хелперам (происходит процессинг АГ макрофагами). Т-хелперы передают АГ информацию на В-лимфоциты, которые начинают бласттрансформироваться и пролиферировать, выделять нужный иммуноглобулин.

Меньшая часть Т-хелперов (индукторы) побуждают макрофагов и макрофаги  начинают продуцировать интерлейкин I – активатор основной части Т-хелперов. Те, возбуждаясь, в свою очередь объявляют всеобщую мобилизацию, начиная бурно выделять интерлейкин II (лимфокин), который ускоряет пролиферацию и Т-хелперов, и Т-киллеров. Последние имеют специальный рецептор именно к тем белковым детерминантам, которые были предъявлены патрульными макрофагами.

Т-киллеры устремляются к клеткам-мишеням  и разрушают их. Одновременно интерлейкин  II способствует росту и созреванию В-лимфоцитов, которые превращаются в плазматические клетки. Тот же интерлейкин II вдохнет жизнь в Т-супрессоры, которые замыкают общую реакцию иммунного ответа, останавливая синтез лимфокинов. Размножение иммунных клеток прекращается, но остаются лимфоциты памяти.

38. Реакция непрямой гемагглютинации и реакция коагглютинации, механизм, практическое использование.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Ставится для обнаружения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, микоплазм, риккетсий и вирусов, иммунные комплексы которых с агглютининами в обычных классических РА увидеть не удается, или же для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперсным веществам и мельчайшим микроорганизмам.

РНГА для серодиагностики  инфекционных болезней. Используя РНГА для обнаружения антител в сыворотках больных, готовят ЭРИТРОЦИТАРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ ДИАГНОСТИКУМЫ. Для этого эритроциты обрабатывают 15 мин раствором танина в разведении 1:20 000–1:200 000, что придает им устойчивость и повышает адсорбционную способность. Затем их смешивают с известным антигеном и инкубируют в течение 2 ч при температуре 37°С.. Сенсибилизированные антигеном эритроциты 2–3 раза отмывают изотоническим раствором натрия хлорида и добавляют к сыворотке, разведенной и разлитой в лунки панелей. Контролем служат взвеси интактных и нагруженных антигеном эритроцитов, которые вносят в сыворотки, дающие заведомо положительную и отрицательную реакции.

Результаты реакции учитывают  через 2 ч после инкубации в  термостате и оценивают плюсами: «++++» – эритроциты покрывают  лунку в виде зонтика с неровными краями; «–» – скопление эритроцитов в виде «пуговицы»

РЕАКЦИЯ КОАГГЛЮТИНАЦИИ

Используется для серотипирования  моргов и для обнаружения АГ в  биологических жидкостях.

Принцип реакции. Используется способность клеток S.aureus неспецифически фиксировать на своей поверхности иммуноглобулин FC-фрагментом благодаря наличию особого белка А. Таким путем получают стафилококковый антительный диагностикум.

Реакция ставится как обычная р-ция  агглютинации на среде.

Раздел III.

1. Стафилококки. Лабораторная диагностика стафилококковой инфекции.

Относятся к семейству Micrococcoceae. Род Staphylococcus включает 19 видов, из которых патогенны для человека только некоторые: S.aureus, S.epidermidis и S.saprophyticus. Заболевания вызывают золотистые, реже – эпидермальные и еще реже – сапрофитные стафилококки.

Морфология, физиология. Отдельные клетки имеют форму правильного шара, при размножении образуют скопления в виде гроздьев винограда (slaphyle – виноградная гроздь). Размер от 0,5 до 1,5 мкм. В препаратах из патологического материала (из гноя) располагаются поодиночке, парами или небольшими скоплениями. Золотистые стафилококки имеют способность образовывать нежную капсулу.

Стафилококки – факультативные анаэробы, но лучше развиваются в аэробных условиях, Гр+. На поверхности плотных питательных сред образуют круглые, выпуклые, пигментированные (золотистые, палевые, лимонно-желтые, белые) колонии с ровными краями; в жидких – равномерное помутнение. В лабораториях используют способность стафилококков размножаться в средах с большим количеством (6-10 %) NaCl (ЖСА). Такую концентрацию соли другие бактерии не переносят Þ солевые среды являются элективными для стафилококков. Штаммы золотистых стафилококков, продуцирующие гемолизины, дают на кровяном агаре колонии, окруженные зоной гемолиза.