Общая характеристика березового гриба (чаги) и его химического состава

 

При просматривании хроматограммы в видимом и УФ-свете на старте

видно желтое пятно, которое характерно для флавоноидов.

Во второй системе  наблюдается частичное разделение флавоноидов с  Rf= 0.23 и Rf = 0.30. Однако   в   данной   хроматограмме   можно   наблюдать   другие индивидуальные компоненты, такие как фенолокислоты, стеролы.

Наличие стеролов с Rf₁=0.66 и Rf₂=0.40, подтверждается качественными реакциями с серной кислотой (H₂SO₄), дающая характерное розовое окрашивание.

При опрыскивании хроматограммы 5 % водным раствором соды, 5 % спиртовым раствором хлорида алюминия и парами аммиака, наблюдали    изменение   окраски   пятен,   характреных    для флавоноидов, а именно флавонов и флавонолов.

В результате  хроматографического анализа толуольного экстракта  в

различных системах растворителей  можно сделать вывод о том, что в толуольном экстракте обнаружены фенолокислота; терпеновые соединения (бетулиновая кислота, бетулин и  лупеол); флавоноиды (флавоны и флавонолы); стеролы.

Исследование  надосадочной жидкости толуольного экстракта

Полученный толуольный экстракт упариваем, получаем раствор слабо-желтого цвета. Раствор сушим при нормальных условиях, получаем бледно-желтый осадок с желтым маслообразным вкраплением, которое отмываем петролейным   эфиром. Петролейный   экстракт упариваем, получаем желтую

маслообразную жидкость с массой 0.03г.

Проводим хроматографический анализ в системе растворителей  гексан –

диэтиловый   эфир – ледяная  уксусная    кислота (73:25:2),  характерная   для анализа липидов [25]. На хроматограмме наблюдали наличие размытого, характерного для высших жирных кислот, пятен с голубым свечением из чего

можно   сделать   вывод   о  наличии   высших  жирных   кислот   в толуольном

экстракте.

Выход высших жирных кислот составил 0.07 %.

 

2.3.3 Исследование этилацетатного экстракта

Этилацетатный экстракт получаем по схеме (Рисунок 2.8) при экстрагировании чаги этилацетатом при температуре 77 °С (Т_кип растворителя).

После предварительной  экстракции полученный экстракт упариваем до 10 мл, охлаждаем. Экстракт сливаем и оставляем, который испарятся при нормальных условиях, в результате чего выпадает черный осадок с массой 0.22 г, выход составил 0.55 %.

Исследование  надосадочной жидкости этилацетатного экстракта

Проводим  хроматографирование этилацетатного экстракта с помощью

тонкослойной хроматографии  на пластинках “Silufol”.

Для этого использовали различные системы растворителей:

1. хлороформ – бензол – этилацетат (4:8:1);
2. бензол – хлороформ – муравьиная кислота – этанол – этиловый эфир (30:5:5:5:10).

Полученные хроматограммы  просушиваем при комнатной температуре, просматриваем их в видимом и  УФ-свете, проявляем ФМК, 5 % водным раствором соды, 5 % спиртовым раствором хлорида алюминия, парами аммиака (Таблица 2.14).

 

Таблица  2.14 – Хроматографический анализ этилацетатного экстракта

№ пят-на	Rf пят-на	Система 1			Rf пят-на	Система 2
		Вид. свет	УФ	ФМК		Вид. свет	УФ	NH3	5%р-р Na2CO3	5% р-р AlCl3	ФМК
1	0.00	кор	жел	син	0.19	кор	жел	жел	жел	жел	син
2	0.36	-	-	син	0.30	кор	тем	тем	бл-жел	кор	-
3	0.46	-	-	син	0.37	-	тем.жел	тем	бл-жел	кор	-
4	0.54	-	гол	син	0.59	-	гол	-	-	-	син

 

Хроматографирование  в системах 1 и 2 дало полное разделение веществ (4 пятна). В обеих системах наблюдали флюоресценцию голубого цвета, пятна с Rf₁=0.54 и Rf₂=0.59, которые при опрыскивании ФМК окрашиваются в синий цвет, что предполагает наличие фенолокислот. Пятна 2 и 3 в системе 1 с Rf =0.36 и Rf=0.46 не флюоресцируют в УФ-свете, а с ФМК дают синее окрашивание. Идентификацию проводили при “свидетелях” – бетулине и лупеоле, которые являются основными терпеноидами бересты березы. Пятна 2 и 3  оказались идентичны бетулину (Rf=0.36) и лупеолу (Rf=0.46).

При просматривании хроматограммы в видимом и УФ-свете на старте

видно желтое пятно, предполагаем о наличии флавоноидов.

В системе 2  наблюдается частичное разделение флавоноидов с Rf=0.30 и  Rf = 0.37.  Однако   в данной    хроматограмме   можно наблюдать и другие

индивидуальные компоненты, такие как фенолокислоты, стеролы.

Наличие стеролов с Rf =0.37 подтверждается качественной реакцией с

серной кислотой, дающая характерное розовое окрашивание.

При опрыскивании хроматограммы 5 % водным раствором соды, 5 % спиртовым раствором хлорида алюминия и парами аммиака, наблюдали изменение окраски третьего пятна, характерная для флавоноидов, а именно изофлавона.

В результате хроматографического анализа этилацетатного экстракта в

различных системах растворителей были идентифицированы: фенолокислота; терпеновые соединения (бетулин и лупеол); флавоноиды (изофлавон); стеролы.

Исследование  этилацетатного осадка

Этилацетатный осадок последовательно  растворяем в различных растворителях  с повышающимся градиентом полярности хлороформ, диэтиловый эфир, этиловый спирт. В хлороформе и диэтиловом эфире этилацетатный осадок полностью не растворяется, а раствор приобретает желтоватую окраску. В этиловом спирте этилацетатный осадок растворяется полностью.

В дальнейшем проводим хроматографирование  полученных растворов этилацетатного осадка с помощью ТСХ на пластинках “Silufol”.

Для этого использовали следующую систему растворителей:

1. бензол – хлороформ – муравьиная кислота – этанол – этиловый эфир (30:5:5:5:10).

Полученные хроматограммы высушиваем при комнатной температуре, просматриваем их в видимом и УФ - свете, проявляем фосфорномолибденой кислотой и специфическими проявителями.

Исследование  этилацетатного осадка (смыв хлороформом)

При     хроматографическом    анализе    этилацетатного    осадка    (смыв

хлороформом) определяем 10 пятен. Распределение пятен в системе растворителей показано в таблице 2.15.

 

Таблица  2.15 –   Хроматографический  анализ   этилацетатного  осадка

                              (смыв хлороформом)

Rf пятна	Проявители
	Вид. свет	УФ	ПарыNH3	5% вод. р-р Na2CO3	5% спирт. р-р AlCl3	ФМК	Пары I2	10% KOH в метаноле
0.00	кор	кор	кор	тем. кор	св. кор	-	кор	кор
0.09	св. жел	жел	св. кор	св. кор	-	-	яр. жел	оранж
0.22	св. жел	жел-зел	св. кор	св. кор	-	-	жел	оранж
0.28	жел	тем	яр. жел	жел-кор	св. жел	жел	яр. жел	яр. жел
0.38	жел	жел	тем	-	св. жел	-	св.кор	кор
0.50		св. жел	тем	-	-	-	св.кор	кор
0.66	-	-	-	-	-	син	-	-
0.78	-	гол	-	-	-	-	св.кор	гол
0.84	-	-	-	-	-	син	-	-
0.91	-	гол	-	-	-	син	св.кор	гол

 

Предполагаем, что в  этилацетатном осадке (смыв хлороформом) содержится фенолокислота (10 пятно), так как десятое пятно флюоресцирует голубым цветом, а при опрыскивании ФМК проявляются синим цветом.

Пятна  9 и 7 можно отнести  к терпеновым соединениям, так как  терпеновые соединения не флюоресцируют  в УФ-свете, а с ФМК дают синее окрашивание. Идентификацию проводим при “свидетелях” – бетулине и лупеоле, которые являются основными терпеноидами бересты березы. Пятна 9 и 7 оказались идентичны бетулину (Rf=0.66) и лупеолу (Rf=0.84) соответственно.

При просматривании хроматограммы в УФ - свете, было  обнаружено четвертое пятно флуоресцирующее желтым свечением, предположительно – флавоноид. Для идентификации проводим качественные реакции на флавоноиды. Для этого используем следующие реактивы: пары аммиака, 5 % водный раствор соды, 5 % спиртовый    раствор    хлорида алюминия.   Данные реактивы дали качественные реакции на флавоноиды, а именно флавонол [28].

Оставшиеся пятна 2, 3, 5, 6, 8 идентифицированы, как кумарины. Идентификация проводилась с  помощью специфических проявителей, таких как: пары йода (I₂), 10 % гидроксид калия (KOH) в метаноле. При опрыскивании специфическими проявителями пятна меняли свою окраску, т.е.  приобретали коричневые, оранжевые цвета [15]. Пятно 1 идентифицировано как полифенол.

В результате хроматографического анализа этилацетатного осадка (смыв

хлороформом) в системе  растворителей бензол – хлороформ – муравьиная кислота – этанол – этиловый эфир (30:5:5:5:10) были идентифицированы:   фенолокислота;  терпеновые   соединения (бетулин и лупеол); флавоноиды (флавонолы); стеролы; кумарины; полифенолы.

 Исследование  этилацетатного осадка (смыв диэтиловым  эфиром)

При       хроматографическом     анализе     этилацетатного     осадка   (смыв диэтиловым эфиром) определяем 4 пятна. Распределение пятен в системе растворителей показано в таблице 2.16.

Предполагаем, что в  этилацетатном осадке (смыв диэтиловым эфиром) содержится фенолокислота (4 пятно), так как четвертое пятно флюоресцирует голубым цветом, а при опрыскивании ФМК проявляются синим цветом.

При просматривании хроматограммы в УФ - свете, было обнаружено второе пятно темного цвета, предположительно – флавоноид. Для идентификации проводим качественные реакции на флавоноиды. Для этого используем следующие реактивы: пары аммиака, 5 % водный раствор соды, 5 % спиртовый  раствор хлорида алюминия. При  опрыскивании  хроматограммы

специфическими  проявителями второе пятно меняло свою окраску, от желтого

до темного цвета [28].

Оставшиеся пятна идентифицированы, как антрохиноны также с помощью специфических проявителей, таких как: пары I₂, 10 % KOH в метаноле. При опрыскивании специфическими проявителями пятна меняли свою окраску, приобретая более насыщенный цвет [15].

 

Таблица 2.16 – Хроматографический   анализ    этилацетатного    осадка

                           (смыв диэтиловым эфиром)

№ пятна	Rf пятна	Проявители
		Вид. свет	УФ	Пары NH3	5% вод. р-р Na2CO3	5% спирт. р-р AlCl3	ФМК	Пары I2	10% KOH в метаноле
1	0.74	-	гол	роз	-	-	-	-	гол
2	0.81	жел	тем	яр. жел	жел	жел	-	кор	жел
3	0.84	-	жел	жел	-	-	-	-	тем
4	0.94	-	гол	-	-	-	-	-	син

 

В результате хроматографического  анализа этилацетатного осадка (смыв этиловым эфиром) в системе растворителей бензол – хлороформ – муравьиная кислота – этанол – этиловый эфир (30:5:5:5:10) можно сделать вывод о том, что в этилацетатном  осадке  (смыв этиловым эфиром) обнаружены фенолокислота;

флавоноиды (флавонолы); антрохиноны.

Исследование  этилацетатного осадка (смыв этиловым спиртом)

При хроматографическом анализе этилацетатного осадка (смыв этиловым спиртом) определяем 5 пятнен. Распределение пятен в системе растворителей показано в таблице 2.17.