Отчет по практике в АО «Институт промышленной биотехнологии»

3.Физиологический раствор желчи (ФРЖ)

Состав:

NaCl

Желчь

Вода дистиллированная

Приготовление:

В двух литрах дистиллированной воды растворяла 10 г NaCl и 10 мл желчи. Разливала по 250 мл во флаконы и стерилизовала при температуре 120˚С в течение 40 минут.

4. 0,5% раствор NaCl

Состав:

NaCl

Вода дистиллированная

Приготовление:

В одном литре дистиллированной воды растворяла 5 г NaCl. Разливала по флаконам и стерилизовала при температуре 120˚С в течение 40 минут.

5. Агар Эндо

Состав среды:

Dipotassium Phosphate

Peptic Digest of Animal Tissue

Agar

Lactose

Sodium Sulfite

Basic Fuchsin

H₂O

Приготовление:

При приготовлении питательной среды Эндо агара использовала готовую сухую питательную среду, содержащую все вышеперечисленные компоненты. Навеску готовой сухой питательной среды - 41,5 г (Dipotassium Phosphate – 3,5 г, Peptic Digest of Animal Tissue – 10 г, Agar – 15 г, Lactose – 10 г, Sodium Sulfite – 2,5 г, Basic Fuchsin – 0,5 г) растворяла в одном литре воды. Готовую питательную среду стерилизовала в автоклаве при темпетатуре 121˚С в течение 15 минут. рН питательной среды после стерилизации – 7,5 ± 0,2.

Перед розливом в чашки  Петри среду тщательно перемешала. Срок хранения чашек со средой не более 2-3 суток в темном месте при температуре от 2 до 8˚С.

Данная питательную среду используют при выполнении работ по проекту «Выработка стратегии по сохранению биоресурсов казахстанского сектора Каспийского моря и организация мониторинговых исследований» для выделения и дифференциации грамотрицательных микроорганизмов кишечной группы.

6. Среда Чапика (для грибов)

Состав:

Глюкоза

NaNO₃

K₂HPO₄

MgSO₄

KCl

FeSO₄

CaCO₃

Приготовление:

В 0,5 литре дистиллированной воды растворяла 10 г глюкозы, 1 г NaNO₃, 0,5 г K₂HPO₄, 0,25 г MgSO₄, 0,25 г KCl, 0,25 г FeSO₄, 1,5 г CaCO₃. рН питательной среды доводила добавлением молочной кислоты. Разливала в четыре колбы. Стерилизовала при режиме 118°С на 20 минут.

Стерилизация является одним из важнейших и необходимых приемов в микробиологической практике. Различают термическую и холодную стерилизацию. В микробиологии находят применение следующие способы термической стерилизации: прокаливание в пламени и обжигание, сухожаровая стерилизация (горячим воздухом), стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавирование), дробная стерилизация (тиндализация), кипячение. Из методов холодной стерилизации микробиологи используют стерилизацию фильтрованием, газообразными средствами, УФ-лучами и др. видами излучений.

Стерилизация  питательных сред

Стерилизация  насыщенным паром под давлением  – автоклавирование. Наиболее надежный и чаще всего применяемый способ стерилизации.

Стерилизацию паром  под давлением осуществляют в  автоклавах.

Среды обычно стерилизуют  в пробирках, колбах, бутылях. Сосуды со средами закрывают ватно-марлевыми  пробками, и прикрывают бумажными  колпачками.

В микробиологической практике стерилизацию в автоклаве осуществляют при температуре 111-138˚С, т.е. от 0,5 до 2.5 ати.

Наиболее надежные режимы стерилизации 15-45 мин при 121˚С (1 ати) и 10-30 мин при 128˚С (1,5 ати).

Температура и длительность автоклавирования питательных сред определяется их составом, термоустойчивостью или термолабильностью компонентов.

Стерилизация  стеклянной посуды

Основным способом стерилизации стеклянной посуды является обработка сухим горячим воздухом при температуре не выше 180˚С в течение 1-3 часов (погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов). Стерилизацию осуществляют в специальных суховоздушных (сухожаровых) стерилизаторах и сушильных шкафах.

Общий микробиологический анализ почвы

Для проведения микробиологического  анализа почвы используют два  метода:

1. Метод высева на плотные среды заключается в высеве определенного объема исследуемой суспензии на плотную питательную среду в чашки Петри, выращивании и последующем подсчете выросших колоний.

2.   Метод высева в жидкие среды заключается в высеве определенного объема из различных разведений исследуемой суспензии в пробирки или колбы с жидкой питательной средой, выращивании при оптимальной температуре и последующем расчете наиболее вероятного числа клеток, содержащихся в 1 г почвы.

Контроль качества питательных сред

Ставится позитивный и негативный контроль до начала проведения анализа  и использования сред

         1. Позитивный контроль показывает, что среда может поддерживать  рост целевой тест культуры и выполняет специфическую или ожидаемую реакцию по отношению к ней.

         2. Негативный  контроль показывает, что среда  не поддерживает рост нецелевого  микроорганизма

А также ставят аналитический  контроль.

Для постановки аналитического контроля используют стерильную и не стерильную матрицу, а также суспензию тест-организма с известным титром.

LCS – лабораторная контрольная проба (стерильная матрица) с добавлением суспензии тест-организма: в пробирку, содержащую 1 г стерильной матрицы, вносят 1 мл суспензии и 9 мл стерильной дистиллированной воды (1:10), далее готовят ряд последовательных десятикратных разведений. Делают высев в трехкратной повторности по 0,1 мл из разведений в чашки Петри с питательной средой. Разведения для посева выбирают с учетом титра суспензии, чтобы на чашках Петри выросло от 30 до 300 колоний.

LS – лабораторная спайкированная проба (аликвота полевой пробы с добавлением суспензии тест-организма): в пробирку, содержащую 1 г полевой пробы, вносят 1 мл суспензии тест-организма и 9 мл стерильной дистилированнойводы (1:10), далее готовят ряд последовательных десятикратных разведений. Делают высев в трехкратной повторности по 0,1 мл из разведений в чашки Петри с питательной средой. Разведения для посева выбирают с учетом титра суспензии, чтобы на чашках Петри выросло от 30 до 300 колоний.

SD – дупликат пробы LS.

Относительное процентное различие (RPD,%)

Относительное процентное различие (RPD,%) рассчитывается между дупликатными пробами по формуле:

 

       LS - SD

RPD = ------------------------------х 100%

   (LS + SD) х 0,5

Допустимый предел RPD - + (0-20)%.

 

Процент извлечения (%R) пробы LCS

 

       Т  - Т

%R = --------------------х 100

       Т

Где: Т – титр пробы LCS; Т – титр суспензии тест-организма.

 

Приготовление разведений

Численность популяции  микроорганизмов обычно велика, поэтому  для получения изолированных колоний необходимо приготовить ряд последовательных разведений. Разведения готовят в стерильной водопроводной воде или в 0,85% растворе NaCl (физиологическом растворе). В ходе опыта целесообразно использовать один и тот же коэффициент разведения, например 10, что уменьшает вероятность ошибки.

 

 

5. Методы охраны  труда и окружающей среды

Проблемами, связанными с обеспечением здоровых и безопасных условий труда, занимается охрана труда, которая представляет собой систему  законодательных, социально-экономических, организационных, технических, гигиенических и лечебно-профилактических мероприятий и средств, обеспечивающих безопасность, сохранение здоровья и работоспособность человека в процессе труда.

В настоящее время  в каждом хозяйстве, объединении, области республики имеются комплексные планы улучшения условий, охраны труда и социально-оздоровительных мероприятий. На их осуществление выделены необходимые материальные ресурсы и денежные средства, что способствует улучшению работы по охране труда.

Безопасность труда  – состояние условий труда, при  котором отсутствует производственная опасность – возможность воздействия  опасных и вредных производственных факторов на работающих.

Закон Республики Казахстан  «О безопасности и охране труда» регулирует общественные отношения в области охраны труда и направлен на обеспечение безопасности, сохранение жизни и здоровья работников в процессе трудовой деятельности, а также устанавливает основные принципы государственной политики в области безопасности и охраны труда.

В лаборатории мониторинга, где я проходила практику, в  обязательном порядке соблюдаются  правила техники безопасности на предприятии.

В девяти часовой рабочий  день сотрудников лаборатории включен  один час – обеденный перерыв, плюс отдельно от основных помещений имеется комната для приема пищи. В лаборатории для проведения микробиологических работ имеются помещения: комната микробиологических исследований, бокс-комната, средоварочная, термостатная комната, автоклавная, препараторская (моечная), гардероб для персонала и склад. Воздух, подаваемый в боксы для проведение стерильных работ, очищается. При работе в лаборатории персонал пользуется специальной одеждой, предусмотренной действующими правилами и нормами (халат, косынка, перчатки и т.д.).

На дверях холодильника, где хранятся микроорганизмы, изображен международный знак биологической опасности и размещен перечень штаммов микроорганизмов. Отработанный материал после окончания работы обеззараживается в автоклаве.

В рабочую зону лаборатории допускаются лишь лица, имеющие соответственное разрешение. В рабочих зонах лаборатории не допускают пребывание детей.

В лаборатории предусмотрена система общего водоснабжения. Она оборудована запорными клапанами, препятствующими противотоку. Имеется вентиляция.

Системы безопасности включают противопожарную и электробезопасность. В каждой лаборатории имеются огнетушители и план эвакуации при пожаре. 

В лаборатории  имеется достаточное пространство для безопасного проведения лабораторных процедур. Помещения в лаборатории обеспечиваются достаточным освещением для проведения любых работ. Раковины с проточной водой размещены в каждой лабораторной комнате. Имеется душ.

Для работы в лаборатории персонал носит специальную одежду – халаты. При процедурах, которые могут сопровождаться прямыми или случайными контактами с микроорганизмами, обязательно надевают специальные одноразовые резиновые перчатки. После их использования перчатки снимают и  моют руки. Каждый раз после различных манипуляций, а также в конце рабочего дня работники лаборатории моют руки. При необходимости предохраняют глаза и лицо от брызг кислот, щелочей, дезинфицирующих растворов, попадания инфицированного материала и источников искусственной и ультрафиолетовой радиации, во всех случаях надевают защитные очки, марлевые или ватные повязки и другие защитные средства. Защитную одежду вне лабораторных помещений, а именно в столовой, буфете, служебных помещениях, библиотеках, комнатах персонала не носят. В лабораторной зоне не принимает пищу, не пьют, не курят. Защитная лабораторная одежда не хранится в тех же шкафчиках или ящиках, что и личная.

В лабораторных помещениях всегда поддерживается порядок и чистота. Перед работой и после, рабочие поверхности дезинфицируют и, обязательно, в каждый после работы в боксе на 30 минут включают бактерицидные лампы. После работы отработанный материал подвергается автоклавированию.

 

  6. Исследование способности биопрепарата «Экобак» к биодеградации нефтяных углеводородов и возможности использования его в качестве деструктора нефтяных загрязнений

С первого дня моего  пребывания на практике, я ознакомилась с техникой безопасности на предприятии. Далее, ознакомившись с основными научно-исследовательскими работами лаборатории, я приступила к работе по своей теме: «Исследование способности биопрепарата «Экобак» к биодеградации нефтяных углеводородов и возможности использования его в качестве деструктора нефтяных загрязнений».

Цель работы: оценить способность биопрепарата «Экобак» деградировать углеводороды нефти.

Объект исследования: биопрепарат «Экобак», который представляет собой культуральную жидкость, в состав которой входит 4 штамма углеводоокисляющих микроорганизмов: Bacillus sp. шт.PR 28, Bacillus sp. шт. S 20, Micrococcus roseus шт. УД6-4, Micrococcus  varians PR 69.

Актуальность. Нефть и нефтепродукты являются одними из самых опасных и широкомасштабных загрязнителей окружающей среды.

Нефтяная промышленность по опасности воздействия на окружающую среду занимает третье место в  числе 130 отраслей современного производства.

При ликвидации загрязнений только механическими и физико-химическими способами не всегда достигается должный эффект, так как зачастую возникает проблема утилизации отходов, образующихся после очистки.

Наиболее перспективными  являются микробиологические методы очистки нефтезагрязненных объектов. Большинство ученых привлекают методы биоремедиации, как не наносящие дополнительного ущерба окружающей среде  и наиболее дешевые:  если стоимость очистки 1 м³ загрязненной почвы методом сжигания составляет около 3 тыс. долларов США, то с использованием биоочистки — от 100 до 300 долларов. Микроорганизмы, способные использовать нефть, распространены очень широко и могут быть выделены из любой полевой, лесной, луговой почвы. Кроме того, способность использовать нефть в качестве источника энергии присуща не единичным специализированным формам, а многим группам углеводородокисляющих микроорганизмов (УВОМ). В их числе бактерии из родов Acinetobacter, Arthrobacter, Bacillus, Cytophaga, Clostridium, Corinebacterium, Flavobacterium, Methanobacterium, Micobacterium, Nocardia, Rhodococcus, Pseudomonas, Vibrio, мицелиальные грибы родов Aspergillus, Penicillium, Mucor, Fusarium, Trihoderma, дрожжи – Candida, Endomyces, Rhodotorula, Saccharomyces, Torulopsis.