Шпаргалка по "Микробиологии"

Исследованию на эшерихий подлежат также промывные воды желудка, смывы  с рук обслуживающего персонала, воздух палат, при токсикоинфекции  – остатки пищи. Материалы (исключая кровь) высевают на среду Эндо и помещают в термостат при температуре 37°С. Через 18–24 ч инкубации в термостате с этой среды отбирают красные лактозоположительные колонии эшерихий и агглютинируют их на стекле в поливалентной ОК–сыворотке, содержащей антитела к 22 сероварам энтеропатогенных кишечных палочек (ЭПКП). При положительной реакции агглютинации колонии пересевают на скошенный агар и на следующие сутки выделенную культуру агглютинируют в поливалентных сыворотках с меньшим набором антител, а затем в каждой из тех, которые входили в смесь, вызвавшую агглютинацию выделенных эшерихий. На заключительном этапе серологической идентификации ЭПКП ставят развернутую реакцию агглютинации в специфической сыворотке. Для этого диагностическую сыворотку разводят в двух рядах пробирок до титра, который указан на этикетке ампулы. В один из них добавляют смытую со скошенного агара гретую культуру, в другой – ее прокипяченную взвесь. Пробирки помещают на сутки в термостат при температуре 37°С. Гомологичные сыворотке штаммы ЭПКП должны агглютинироваться в ней хотя бы до половины титра.

Давшая положительную развернутую  реакцию агглютинации культура засевается в среды ряда Гисса для изучения ее сахаролитических и протеолитических свойств.

Профилактика и лечение. Соблюдение санитарно-гигиенических правил, выявление больных и носителей. Специфическая профилактика не разработана.

Для лечения заболеваний, вызванных  кишечными палочками, используют биологические  препараты из микробов-антагонистов – бифидумбактерин, лактобактерин.

Кишечные палочки чувствительны к ряду антибиотиков, но в последние годы увеличилось число антибиотикоустойчивых штаммов, что обусловлено передачей R-плазмид.

7. Коринебактерии. Лабораторная диагностика  дифтерии.

Род Corynebarteriurn (от лат. Сoryne - булава) –  Гр+ палочковидные бактерии, длиной 1–8 мкм и шириной 0,3–0,8 мкм, не образующие спор, не имеющие жгутиков. Содержат зерна волютина, расположенные чаще всего на концах палочек, они часто превышают размеры поперечника бактерии и придают вид булавы. Также имеются включения липидов и крахмала, который откладывается при недостатке кислорода.

В состав клеточной стенки входят специфические только для бактерий рода Corynebacterium липиды: эфиры коринемиколовой  и коринемиколиновой кислот, димикола, фосфатиды маннозы и инозита.

В организме человека обитают условно-патогенные: С.diphtheriae, С.pseudodiphtheriticiim (hofmanii), С.xerosis, С.ulcerans. С.diphtheriae вызывает у человека дифтерию, другие являются возбудителями вторичных инфекций.

КОРИНЕБАКТЕРИЙ ДИФТЕРИИ С.diphtheriae.

Морфология. Прямые или слегка изогнутые палочки. В препаратах располагаются под углом друг к другу в виде букв L, V или китайских иероглифов. Зерна волютина (на концах палочек) выявляются при окраске синькой Леффлера или по методу Нейссера. Факультативные анаэробы, хорошо размножаются при свободном доступе кислорода. К питательным средам требовательны: не способны утилизировать азот из аммонийных соединений, требуют наличия почти всех АК, солей Mg, Zn, Cu, Fe; необходимы углеводы Þ используются среды, полученные на основе ферментативного расщепления белка (казеина, дрожжей) с добавлением крови или сыворотки. На поверхностях плотных сред дифтерийные палочки образуют темно-серые или черные колонии (биовары гравис, способны расщеплять крахмал, или миттис). Рост на скошенном сывороточном агаре сравнивают с шагреневой кожей, колонии не сливаются.

Расщепляют глюкозу и другие моно- и дисахариды с образованием кислоты без газа, восстанавливают  нитраты, расщепляют цистеин.

Лизируются специфичны для отдельных  видов вирулентными фагами, что позволяет устанавливать фаговары исследуемых культур.

АГ. Имеют белковую капсулу, которая содержит К-АГ. Определение этого АГа позволяет установить серовар (их более 10). Группоспецифический полисахарид АГ клеточной стенки дает перекрестные реакции с микобактериями, нокардиями.

Экология и распространение. Передается аэрозольным (воздушно-капельным) путем. В настоящее время часто регистрируется у взрослых (тяжелая формы). Токсигенность связана лизогенизацией специфическим профагом. Выделяясь в окружающую среду со слюной, пленками, дифтерийные палочки сохраняют жизнеспособность в течение нескольких дней. Хорошо переносят высыхание. Чувствительны к дезинфицирующим растворам, антибиоткам.

Патогенность и патогенез. Заболевание развивается у лиц, не имеющих антитоксического иммунитета. На месте внедрения (зев, гортань, трахея, реже – нос, ухо) развивается местный воспалительный процесс. Все патогенные виды обладают фимбриями Þ АДГЕЗИЯ к клеткам хозяина, они выявляются в РА трипсинизированных бараньих эритроцитов.

Токсигенность – способность секретировать  гистотоксин, что проявляется в виде локальной воспалительной реакции и в общей интоксикации организма, особенно чувствительны к нему надпочечники, миокард, НС. Токсин блокирует синтез белка, что приводит к гибели клеток, возникает некроз и летальный исход.

Ферменты (гиалуронидаза, нейраминидаза,фибринолизин) обеспечивают распространение в  тканях, но бактериемия клинически не проявляется.

Корд-фактор нарушает фосфорилирование и дыхание клеток микроорганизмов.

Иммунитет. Наиболее восприимчивы дети 1–4 лет. Вырабатывается не очень прочный антитоксический иммунитет, возможны повторные заболевания дифтерией. Невосприимчивость зависит главным образом от содержания в крови антитоксина и АТ (опсонины, преципитины, комплементсвязывающие). Уровень антитоксического иммунитета устанавливают, определяя в крови антитела в РНГА с эритроцитарным диагностикумом (эритроциты нагружены дифтерийным анатоксином). Титр 1:20 и выше Þ иммунность обследуемого. Такжеже применяется реакция Шика (внутрикожно вводят дифтерийный токсин, у неимунных людей – местная воспалительная реакция, при наличии антитоксина реакции нет).

Лабораторная диагностика. В диагностике дифтерии важное значение имеет микроскопический метод. Мазки из налетов зева и носа окрашивают метиленовым синим, по Нейссеру и Граму. Одновременно материал засевают на элективную и дифференциально–диагностическую среды. Выделив культуру, ее идентифицируют по культурально–биохимическим признакам. Затем определяют токсигенность, испытывая культуру на морских свинках или в реакции преципитации на пластинчатом фосфатно–пептонном агаре, подсевая ее бляшками к расположенной вдоль чашки полоске фильтровальной бумаги, смоченной антидифтерийной сывороткой.

Токсигенные штаммы коринебактерии дифтерии при внутрикожном введении вызывают местный некроз, а при подкожном – гибель животных с экссудацией в серозные полости и резкое увеличение надпочечников. Положительная реакция преципитации в агаре проявляется образованием на границе взаимодействия антитоксина и продуцируемого экзотоксина равномерно сливающихся полос преципитации или «стрел–усиков».

Экспресс–диагностика. Если прямой микроскопией мазков, окрашенных обычными способами, выявить коринебактерии дифтерии в материале не удается, то его берут тампоном со свернутой сывороткой (метод Фольгера). Тампон помещают в термостат для подращивания культуры и через 3–5 ч им делают мазки.

Профилактика и лечение. Для профилактики дифтерии используют адсорбированную коклюшно–дифтерийно–столбнячную вакцину (АКДС), содержащую в 1 мл 20 млрд микробных тел палочек коклюша, 30 АЕ (антигенные единицы) дифтерийного анатоксина, 10 АЕ столбнячного анатоксина. Вакцинацию начинают с 5–6–месячного возраста. Курс иммунизации состоит из трех внутримышечных инъекций по 0,5 мл препарата с интервалом 30–40 дней. Ревакцинацию проводят в 3 года, 6 и 11 лет. По эпидемическим показаниям вакцинируют все население, даже людей старше 50 лет.

Специфическое лечение проводится лошадиной антитоксической иммунной сывороткой, которую вводят дробно по методу Безредки в зависимости от тяжести заболевания в количестве от 10 000 до 250 000 АЕ Антибиотики и сульфаниламиды сокращают сроки бактериовыделения у реконвалесцентов и санируют организм здоровых бактерионосителей. Для этих целей назначают пенициллины, тетрациклины, эритромицин.

8. Бордетеллы. Лабораторная диагностика  коклюша.

Род Bordetella включает 3 вида, патогенных для человека: В.pertussis (возбудитель коклюша), В.parapertussis (паракоклюш) и В.bronchiseptica (возбудитель бронхисептикоза). Жгутики из них имеет только В.bronchiseptica, образуют уреазу и растут на простом кровяном агаре (кроме В.pertussis), агглютинируется сыворотками к АГ: В.parapertussis – 1, В.parapertussis – 14, В.bronchiseptica – 12.

BORDETELLA PERTUSSIS – был выделен Борде и Жангу. Коклюш – острое инфекционное заболевание с приступами спазматического кашля.

Морфология. Небольшие, Гр–, неподвижные коккобактерии. Спор не образуют, имеют небольшую капсулу, строгие аэробы, требовательны к питательным средам (должны содержать АК (как фактор роста), кровь, адсорбент ЖК, которые тормозят размножение этих бактерий (древесный уголь или ионообменные смолы)). Обычно культивируют на картофельно-глицериновом агаре с добавлением крови, на кровяном агаре и на полусинтетическом КУА без крови. Мелкие, круглые, блестящие как капельки ртути колонии появляются через 48–72ч. На кровяном агаре наблюдается гемолиз. Свежевыделенные культуры образуют S-формы колоний, после пересевов – R-форма.

БХ активность слабая: не расщепляют белки и углеводы, не восстанавливают нитриты, образуют каталазу.

АГ. У бордетелл выявлены: 14 Аг (агглютиногенов), из которых 7-й является родовым, общим для всех видов, а другие либо только видовые (1 – В.pertussis, 14 – В.parapertussis, 12 – В.bronchiseptica), либо в разных комбинациях встречаются у представителей рода; + гемагглютинин, протективный АГ.

Экология и распространение. Обитают в верхних дыхательных путях человека - больного или носителя. Попадая в окружающую среду, быстро погибают. Прямой солнечный свет, УФ, высокие и низкие температуры, высыхание, дезинфицирующие вещества не переносят.

Заражение происходит от больного, который  заразен в катаральном периоде  и в течение 1–1,5 мес. болезни. Путь – воздушно-капельный.

Патогенность. Имеет токсические и сенсибилизирующие вещества: филаментозный гемагглютинин (поверхностный белок, обеспечивает адгезию к клеткам эпителия верхних дыхательных путей), трахеальный цитотоксин (вызывает деструкцию ресничек, подавляет иммунный ответ), аденилатциклаза, дермонекротический токсин, коклюшный токсин (экзотоксин, участвует в адгезии, тормозит фагоцитоз), эндотоксин (ЛПС клеточной стенки), гемолизины и др.

Основной токсин, вызывающий раздражение нервных рецепторов слизистой дыхательных путей в результате чего возникает кашель. Всасываясь в кровь, оказывает возбуждающее действие на дыхательный центр и вызывает спазм мелких бронхов.

Иммунитет стойкий, повторные заболевания не регистрируются. В течение болезни синтезируются АТ – определяются в РА, РП, РСК. Эти антитела обнаруживаются и у переболевших коклюшем.

Лаб. диагностика подтверждает и дифференцирует это заболевание от сходных паракоклюша и бронхисептикоза. Основным методом диагностики на ранних стадиях заболевания является бактериологический, в позднем периоде применяют серодиагностику.

Материал для БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО  исследования – отделяемое слизистой  оболочки носоглотки, взятое спец тампоном. В поздних стадиях и при  стертых формах в сыворотке крови  больных определяют АТ в РА, РНГА, РСК. Для экспресс-диагностики  применяют ИФА.

Профилактика и лечение. Для специфической профилактики применяется АКДС, коклюшный компонент – убитые бордетеллы. Вакцину вводят троекратно детям, начиная с 3-месячного возраста по схеме. Для лечения используют противококлюшный Ig (на ранних стадиях), а также антибиотики.

9. Микобактерии. Лабораторная диагностика  туберкулёза.

МИКОБАКТЕРИИ Род Mycobacteriurn (сем. Mycobacteriaceae, порядок Actinomycetales) включает более 100 видов, широко распространенных в природе. Большая часть – сапрофиты и условно-патогенные. У человека вызывают туберкулез (М.tuberculosis – в 92% случаев, М.bovis - 5%, М.africanus – в 3%) и лепру (М.lерrае).

М.tuberculosis – туберкулез – хроническое инфекционное заболевание. В зависимости от локализации выделяют туберкулез органов дыхания и внелегочные формы (кожи, костей и суставов, почек и др.). Локализация зависит от путей проникновения и вида возбудителя.

Морфология. Гр+, прямые или слегка изогнутые палочки длиной 2–8 и шириной 0,3 мкм. Высокое содержание липидов придает ряд характерных свойств: устойчивость к кислотам, щелочам и спирту, трудное восприятие анилиновых красителей (для окраски применяют метод Циля–Нильсена). В культурах встречаются зернистые формы, ветвящиеся, зерна Муха (шаровидные кислотоподатливые, легко окрашивающиеся по Грамму). Возможен переход в L-формы. Неподвижны, спор и капсул не образуют.

Для размножения используют сложные  пит среды, содержащие яйца, глицерин, картофель. Стимулируют рост микобактерий АСП, соли NН₄, альбумин, глюкоза, твин-80. Чаще всего применяют среду Левенштейна–Йенсена (яичная среда с добавлением картофельной муки, глицерина и соли) и среду, содержащую АСП, глицерин, цитрат Fe, фосфат калия. Размножаются медленно. Период генерации длителен – деление клеток в оптимальных условиях 1 раз в 14–15ч. Первые признаки роста обнаруживаются через 8–10 дней после посева. Затем на плотных средах появляются морщинистые, сухие с неровными краями колонии. В жидких средах – сначала нежная пленка на поверхности, затем утолщается и падает на дно. Среда при этом остается прозрачной.

АГ. Выделяют белковые, полисахаридные и липидные соединения. АТ образуются на туберкулиновые протеиды, на полисахариды, фосфатиды, корд-фактор. Специфичность АТ определяется в РСК, РНГА, преципитации в геле. АГ состав М.tuberculosis, М.bovis, M.leprae и других микобактерий (включая многие сапрофитические виды) сходен. Туберкулиновый протеин (туберкулин) обладает выраженными аллергенными свойствами.

Экология и распространение. В естественных условиях М tuberculosis вызывает туберкулез у человека, человекообразных обезьян. Из лабораторных животных высокочувствительными являются морские свинки, менее – кролики. К М.bovis – возбудитель туберкулеза у крупного рогатого скота, свиней и человека – высокочувствительны кролики и менее – морские свинки. М.africanus вызывает туберкулез в странах Африки. Путь заражения воздушно-капельный, возбудитель проникает через верхние дыхательные пути, иногда через слизистые оболочки ЖКТ или через поврежденную кожу.