Шпаргалка по "Микробиологии"

Стерилизация в пламени проводится для обеззараживания бактериальных петель, игл, предметных и покровных стекол, пинцетов.

Стерилизация горячим воздухом проводится в электрических сухожаровых шкафах, имеющих различную форму и размеры, снабженных хорошей тепловой изоляцией. Необходимая температура автоматически поддерживается терморегулятором. Cтерилизуют лабораторную посуду и шприцы при температуре 180°С в течение 1 ч. Чашки Петри, пастеровские и градуированные пипетки помещают в специальные металлические пеналы или заворачивают в бумагу по несколько штук. Пробирки и колбы закрывают ватными пробками.

Стерилизация паром проводится двумя способами: насыщенным паром под давлением и текучим паром.

СТЕРИЛИЗАЦИЮ  ПАРОМ ПОД ДАВЛЕНИЕМ осуществляют в автоклаве, который представляет собой толстостенный котел цилиндрической формы, покрытый снаружи кожухом и герметически закрывающийся крышкой, бывают горизонтальные и вертикальные. Пар поступает в рабочую камеру из маленького котла, воду в котором нагревают электротоком. Давление измеряют манометром.

Не изменяющиеся под действием высокой температуры  и давления питательные среды (МПА, МПБ), растворы или посуду с заразным материалом стерилизуют при 1 атм (121°С) 15–20 мин; среды с углеводами и  нативными белками – при 0,5 атм (110°С) 5–10 мин; материал и посуду, содержащие бациллы сибирской язвы, обеззараживают при 1 атм в течение 2ч.

Контроль за соблюдением режимных параметров работы автоклава проводится с помощью  максимального термометра. В отдельных  случаях в автоклав помещают бензойную кислоту или бензонафтол с точками плавления 120°С и 110°С.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ  ТЕКУЧИМ ПАРОМ проводится троекратно (дробно) в течение трех дней по 30–60 мин в автоклаве при незавинченной  крышке и открытом выпускном кране  или в спец аппарате, который представляет собой металлический цилиндр, покрытый теплоизоляционным материалом с отверстием в конической крышке для выхода пара, краном и указательной трубкой в донной части. Внутри аппарата имеется подставка для стерилизуемых материалов. Залитую в него воду подогревают любым источником тепла. В текучепаровом аппарате стерилизуют питательные среды, изменяющие свои свойства при температуре выше 100°С: молоко, желатину, картофель и среды с углеводами. Вегетативные формы микроорганизмов при такой стерилизации погибают, а споры сохраняются. Спустя сутки при комнатной температуре часть из них прорастает и повторное воздействие пара их уничтожает. Прогреванием на третьи сутки полностью обезвреживают всю спороносную микрофлору, которая к этому времени завершает вегетацию.

Свертывание (уплотнение) сыворотки  и яичных сред производят в двустенном свертывателе с электрическим нагревом. Аппарат покрыт теплоизоляционным материалом и имеет стеклянную и металлическую крышки. Воду в свертыватель наливают через имеющееся в его верхней части отверстие, которое закрывается пробкой с вмонтированным термометром. Пробирки со средами укладывают на дно свертывателя в наклонном положении. Прогревают среды однократно или дробно при температуре 80–90°С в течение 1 ч.

Фильтрование как механический способ стерилизации может быть использовано для обеспложивания жидких веществ, которые нежелательно подвергать действию высокой температуры, например сывороток, антибиотиков. Для этого изготовляют мелкопористые фильтры с точно градуированными порами, которые задерживают микроорганизмы.

В быту используется стерилизация кипячением для обработки  игл и шприцев. Кипятят их в  стерилизаторах 30–45 мин. Для повышения  точки кипения и устранения жесткости  воды добавляют 1 % соды. Этот метод не обеспечивает полного уничтожения микробов, так как споры бактерий и некоторые вирусы выдерживают кипячение в течение нескольких часов.

36. Антибиотики. Биохимические и  генетические механизмы лекарственной  устойчивости микроорганизмов. Методы  определения антибиотикочувствительности бактерий.

Открыл Флемминг в 1928г, затем были созданы синтетические. Это продукты жизнедеятельности живых Ò, а т/же синтетические в-ва, обладающие способностью убивать или тормозить рост и размножение мкÒ in vivo et in vitro. Известно >1000 антибиотиков и >2 тыс НМС, способных тормозить рост и размножение. Но выбор АБ ограничен, т.к. большая их часть ТОКСИЧНЫ для МКÒ.

По МЕХАНИЗМУ  ДЕЙСТВИЯ выделяют: БАКТЕРИЦИДНЫЕ (убивают) и БАКТЕРИОСТАТИЧЕСКИЕ (тормозят рост и размножение, после устранения АБ рост и размножение возобновляются).

ТРЕБОВАНИЯ  к АБ:

Min влиять на ## МКÒ.

Max антимикробный эффект в условиях МКÒ.

Медленно развивающаяся  зависимость со стороны мкÒ.

Хорошо растворяться и быть устойчивы в обычных  услових хранения.

Сохранять антимикробное  действие вне зависимости от среды.

Антимикробное действие должно проявляться вне  зависимости от того, где находится  мкÒ – внутри или вне #.

Желательно, чтобы  обладал иммуностимулирующим действием.

КЛАССИФИКАЦИЯ:

По происхождению:

продуцируются БАКТЕРИЯМИ (грамицидин, полимиксин) – борьба м/у мкÒ в естественных условиях

синтезируются АКТИНОМИЦЕТАМИ (стрептомицин, неомицин) – род Streptomyces основной продуцнет антибиотиков.

Продуцируются ПЛЕСНЕВЫМИ ГРИБАМИ (пенициллин, циклоспорин) – род Penicillium, первый антибиотик.

РАСТИТЕЛЬНОГО происхождения (аллицин)

ЖИВОТНОГО происхождения (лизоцим, интерферон)

По спектру антимикробного действия:

УЗКИЙ спектр действия – только на гр+ или гр–

ШИРОКОГО АНТИБАКТ спектра действия – на гр+ и гр–

ШИРОКОГО спектра действия –  на Б!!, + хламидий, риккетсий, спирохет

АНТИГРИБКОВОГО действия (нистатин, леваин)

Действующие на МИКОБАКТЕРИИ – лечат  tbc (стрептомицин)

ПРОТИВООПУХОЛЕГО действия – действуют  на синтез НК

с ИММУНОСУПРЕССИВНЫМ действием –  при пересадке органов.

По механизму действия:

Подавляющие синтез # СТЕНКИ мкÒ (пенициллин). Если мкÒ переходит в L–форму, АБ не эффективен.

Нарушающие ПРОНИЦАЕМОСТЬ мбны, оказывают бактерицидное действие (нистатин, грамицидин).

Нарушающие СИНТЕЗ БЕЛКА (эритромицин, тетрациклин) – действуют только на 70S рибосомы.

Ингибирующие ДЫХАТЕЛЬНУЮ ЦЕПЬ – бактерицидное (цианиды).

Нарушающие СИНТЕЗ НК – не только на  Б!!, но и на В!!, раковые # (бактериостатическое).

Устойчивость мкÒ к АБ делится на:

НЕГЕНЕТИЧЕСКАЯ: 1) утрата рецепторов к АБ на поверхности Б!!

↓ метаболической активности Þ АБ, действующие на синтез не работают

если микроб расположен внутри # хозяина, то многие АБ не могут на них воздействовать, т.к. не проникают в ## МКÒ

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ – проявляется чаще. Обусловлена следующими факторами:

НЕХРОМОСОМНЫЕ – плазмиды (R-плазмида), придающие устойчивость. Чем больше генов в плазмиде, тем более устойчивы Б!!

R-плазмида содержит гены, контролирующие синтез ферментов, которые разрушают антибиотик (пенициллаза или бета–лактамаза). Плазмиды передаются в процессе конъюгации в пределах вида или рода.

ХРОМОСОМНЫЕ – определяются Мт в  структуре самой хромосоме. В  основном они вызываются транспозонами  и IS–элементами. Если в популяции появляется устойчивый мутант, то он выживает и активно размножается, а остальные гибнут. Þ При лечении не рекомендуется использовать один и тот же АБ, т.к. с устойчивой инфекцией бороться гораздо сложнее.

КОСВЕННАЯ РЕЗИСТИВНОСТЬ  – при заражении смешанной инфекцией устойчивые мкÒ будут разрушать АБ, предотвращая его воздействие на чувствительные мкÒ (они будут выжывать).

37. Экология микроорганизмов. Роль  микроорганизмов в круговороте  веществ в природе, микрофлора  основных сред обитания.

САНИТАРНАЯ МБ изучает санитарное состояние среды и мкФ, а т/же её опасность. Люди и теплокровные Ж!! – основные источники распространения большинства инфекционных болезней. Наиболее массивное выделение патогенных мкÒ происходит воздушно-капельным или фекально-оральным ПУТЁМ. Сан/МБ исследование необходимо для РЕШЕНИЯ вопроса о наличии или отсутствии мкÒ, патогенных для чка, на объектах окр среды. Обнаружить их в окр среде сложно Þ определяют загрязнение ВЫДЕЛЕНИЯМИ чка или Ж!!. Если загрязнение есть, то вполне вероятно, что вместе с выделениями в среду попали и патогенные мкÒ. Т.о, определение фекального или воздушно-капельного загрязнения достаточно надёжно при оценки потенциальной опасности для здоровья чка.

Полости тела чка, сообщающиеся с внеш средой, заселены N мкФ. Обнаружение представителей этой мкФ свидетельствует о загрязнении соответствующими выделениями, т/е мкÒ называются САНИТАРНО-ПОКАЗАТЕЛЬНЫМИ. Они должны отвечать следующим требованиям, должны:

постоянно и в больших кол-вах  содержаться в выделениях чка  и большого круга теплокровных Ж!!

не должны иметь прир резервуара или естественных мест обитания

сохранять жизнеспособность в столько же, сколько и патогенные мкÒ, выводимые из Ò теми же путями

интенсивно  размножаться в окружающей среде

легко обнаруживаться МБ методами и подвергаться кол-венному  определению

достаточно типичными, чтобы их дифференциальная диагностика осуществлялась без особого труда.

САН-ПОКАЗАТЕЛЬНЫЕ мкÒ В РАЗЛ ОБЛАСТЯХ СРЕДЫ

ВОДА –  кишечные палочки и энтерококки.

ПОЧВА – кишечные палочки, энтерококки, Clostridium perfringens, термофилы.

ВОЗДУХ– стрепто- (зеленящие и гемолитические), патогенные стафилококки.

ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ – кишечные палочки, энтерококки, патогенные стафилококки, протей.

ПРЕДМЕТЫ обихода  – киш палочки, энтерококки, патогенные стафилококки.

МЕТОДЫ САН-БИОЛ ИССЛЕДОВАНИЙ

Определение суммарного обсеменения (микробного числа) объектов.

Определение и титрование санитарно-показательных  мкÒ.

 Обнаружение  патогенных мкÒ или продуктов их жизнедеятельности.

Определение микробной порчи изучаемых субстратов.

ПОЧВА. Плотность мкФ особенно высока в черноземных почвах, хорошо удобряемых сероземах. Максимальна на глубине 10-20 см, в верхнем слое и на глубине >1-2м мкÒ мало. МкÒ почвы осуществляют синтез биомассы и аккумуляцию энергии, фиксируют N, обеспечивают брожение, гниение, нитрификацию и денитрификацию, трансформацию S, P и других элементов. Почва содержит также мкÒ, поступающие из воды, воздуха и от животных. С водой в почву попадают патогенные и условно-патогенные мкÒ. В нормально функционирующей почве интенсивно протекает процесс самоочищения: органические вещества перерабатываются в гумус и почва освобождается от несвойственных ей грибов и бактерий.

Сроки выживания  патогенных микробов в почве зависят  от их вида и интенсивности процессов  самоочищения. Аспорогенные пат и  условно-пат Б!!, В!! выживают в течение нескольких дней – месяцев; споры возбудителей столбняка, сибирской язвы, анаэробной инфекции – много лет. Для возбудителей ботулизма, актиномикоза, глубоких микозов – естественная среда обитания.

Сан/МБ состояние почвы оценивается  по отношению кол-ва термофильных Б!! и бактерий – показателей фекального загрязнения. Преобладание санитарно-показательных бактерий → санитарно неблагополучные почвы. Для определения давности фекального загрязнения почвы определяют несколько Ò. Присутствие в почве Е. coli и Streptococcus faecalis указывает на свежее; Citrobacter и Enterobacter – не свежее, a Clostridium perfringens – на давнее загрязнение. Более точная оценка – с помощью определения коли-индекса (кол-во БГКП в 1 г почвы), перфрингенс-титра (масса почвы, в которой обнаружена особь вида Cl.perfringens), общей численности сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1 г почвы.

ВОДОЕМЫ. Вода открытых водоемов (как и почва) – естественная среда обитания разн Б!!, Г!!, В!!, П!!. В грунтовых водах – единичные мкÒ. Кол-венный и кач состав микробиоценозов зависит от концентрации минеральных и орг в-в, физ-хим состояния, t°С, рН, концентрации О₂ и СО₂ и др. Состав мкÒ на поверхности воды и на дне различен. В иле активно протекают гниение и брожение, хемоаутотрофноый и гетеротрофный синтез. На поверхности – образуется пленка, в которой протекает фотосинтез. В прибрежной зоне открытых водоемов, особенно вблизи крупных населенных пунктов, вода содержит большое количество заносных патогенных и условно-патогенных микробов.

Сроки выживания  зависят от вида, дозы, t°С воды, степени  насыщения органическими веществами, рН, солнечная радиация, тип водоисточника. Споры возбудителя сибирской  язвы могут сохраняться в воде годы; многие месяцы –энтеровирусы, сальмонеллы, лептоспиры, вирус гепатита А; дни – недели - возбудители дизентерии, холеры, бруцеллеза.

Сан/МБ состояние оценивается по:

микробному  числу (кол-во хемоорганотрофных бактерий в 1 мл воды);

коли-титру (наименьший объем воды, в котором обнаруживается БГКП)

коли-индексу (кол-во БГКП в 1 л воды).

Т/ же определяют наличие энтерококков, сальмонелл, холерного вибриона, энтеровирусов.

Согласно ГОСТу на питьевую водопроводную воду, ее коли-титр должен быть ≥300, коли-индекс – ≤3, а микробное число – ≤100.

ВОЗДУХ непригоден для размножения мкÒ (недостаточно влаги и пит в-в + солнечная радиация и высушивание). Обнаруживаемые микробы поступают из почвы, с поверхностей. Видовой и численный состав мкФ зависит от интенсивности солнечной радиации, ветра, осадков, покрова почвы, плотности населения   и др. Преобладают споры грибов, актиномицетов, бацилл, пигментообразующие виды аспорогенных бактерий. В жилых помещениях содержится в основном мкÒ дыхательных путей и кожи чка.

Сан/МБ состояние по:

микробному числу (количеству особей в 1 м³ воздуха),

наличию сан-показательных  Б!! – представителей микрофлоры дыхательных  путей (гемолитические стрептококки, золотистый стафилоккок).

ЗНАЧЕНИЕ мкÒ ДЛЯ ОКР СРЕДЫ

Участвуют в  круговороте веществ, нитрифицирующие  Б!! разлагают аммиак, соли аммония и азотистой кислоты, фиксируют N (важно для растений), разлагают орг в-ва, образуют гумус (↑ плодородие почв), участвуют в круговороте C, S, P и др элементов, разрушают попадающие в воду и почву ксенобиотики (обычно не встречаются в природе, появляются в результате деятельности человека).

С развитием  молекулярной генетики возникла проблема защиты природы от искусственных  мутантов, а с выходом человека в космос – предупреждение заноса на нашу планету внеземных и попадания  в космос земных микроорганизмов.