Валидационная оценка методов качественного и количественного анализа ингредиентов лекарственного средства: Рибоксина в таблетках по0,2г

Пятигорский филиал государственного бюджетного образовательного      учреждения высшего профессионального образования                                                         «ВОЛГОГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ»                          Министерства здравоохранения Российской Федерации

 

 

Зав. кафедрой: профессор М.В. Гаврилин

 

 

 

КУРСОВАЯ  РАБОТА  НА ТЕМУ:

«Валидационная  оценка методов качественного и  количественного анализа ингредиентов лекарственного средства: Рибоксина в таблетках по0,2г.»

 

 

Исполнитель: студентка 5 курса 19 группы

Толканева Ирина  Евгеньевна

Руководитель: Степанюк Светлана Николаевна

 

 

 

 

 

Пятигорск, 2012-2013 учебный год

Оглавление

Глава I. Обзор литературы…………………………………………….3

§1.1. Введение…………………………………………………………..…3

§1.2. Общая характеристика и свойства рибоксина и производных 6,9-замещённых пурина………………………….…………………………………4

§1.3. Получение рибоксина и производных 6,9-замещённых пурина …………………………………………………………………………………….6

§1.4. Качественный анализ рибоксина и производных 6,9-замещённых пурина ……………………………………………………………………………6

§1.5. Методы количественного анализа рибоксина и производных 6,9-замещённых пурина …………………………………………………………….8

§1.6.Фармакологические свойства, применение, форма выпуска и условия хранения рибоксина и производных 6,9-замещённых пурина ………….………………………………………………………………………..10

Глава II. Экспериментальная часть. Валидационная оценка методики качественного  и количественного определения рибоксина в таблетках (0,2 г.)……………………………………………………………….13

§2.1. Определение специфичности  методики качественного анализа рибоксина в таблетках…………………………………………………………13

§2.2.Определение линейности рибоксина в таблетках……………………………………………………………………….16

§2.3.Определение прецизионности рибоксина в таблетках……………………………………………………………………….19

§2.4.Определение правильности рибоксина в таблетках…………………………………………………………………………23

Список литературы………………………………………………………28

 

Глава I.Обзор литературы

§1.1. Введение .

Любая аналитическая методика должна быть утверждена в установленном  порядке, что подтверждает её метрологическая  аттестация. Для этой цели в фармацевтической практике используют метод валидации, то есть  экспериментальное доказательство того, что методика пригодна для решения поставленных задач.

Валидационная оценка включает в себя:

• Испытание на идентификацию;
• Количественное испытание на определение примесей;
• Испытание на предельное содержание для контроля примесей;
• Испытание  для количественного определения действующего вещества в образцах активной субстанции или готового лекарственного препарата, а также для количественного определения других компонентов лекарственного препарата( консерванты, стабилизаторы, антиоксиданты и др.)

Испытание на идентификацию предназначено для подтверждения подлинности анализируемого вещества в образце. Обычно это достигается путём сравнения какого либо свойства (спектры, хроматографическое поведение, реакционная способность) испытуемого и стандартного образца.

В валидационном анализе применяются  следующие испытания предназначенные для контроля примесей:

• Количественные;
• Предельные.

Назначение обоих испытаний необходимо для характеристики чистоты образца.

Для валидации количественных и  предельных испытаний необходимо размещение валидационной характеристики.

Количественное определение предназначено  для определения количества анализируемого вещества в образце.

При валидации методик количественного  определения действующих веществ  и других компонентов лекарственного препарата применяются одинаковые валидационные характеристики.

Валидационные характеристики:

1. Правильность;
2. Прецизионность ;

             - Сходимость;

             -Внутрилабораторная прецизионность;

             - Межлабораторная прецизионность;

  3. Специфичность;

   4.  Предел обнаружения;

  5.  Предел количественного определения ;

  6. Линейность;

. .7. Диапазон применения;

.. 8. Опасность.

 

§1.2. Общая характеристика и свойства рибоксина и производных 6,9-замещённых пурина.

Из большого числа производных 6,9-замещённых пурина рассмотрим меркаптопурин, азатиоприн и инозин (рибоксин).

Рибоксин - природное рибофуранозное производное гипоксантина. Он является естественным метаболитом человека организма. Производные пурина представляют собой кристаллические вещества жёлтого (меркаптопурин), светло-жёлтого (азатиоприн),белого с желтоватым оттенком( инозин) цвета (таблица 1)

 

 

 

Лекарственное вещество	Химическая структура	Описание
Mercaptopurine-меркаптопурин	6-меркаптопурин	Желтоватый кристаллический порошок без запаха или почти без запаха.
Azathioprine-азатиоприн	6-(1-метил-4-нитроимидазолил-5)-меркаптопурин	Светло-жёлтый с зеленоватым оттенком кристаллический порошок. Температура разложения 241-248 °С (конец разложения)
Inosine –Инозин (Рибоксин)	9-β-D-рибофуранозилгипоксантин	Белый или белый со слабым желтоватым оттенком кристаллический порошок  без запаха. Удельное вращение от -47°  до - 54°( 1%-ный  водный раствор)

В воде и этаноле меркаптопурин  и азатиоприн практически нерастворимы, инозин в воде медленно и умеренно растворим, в этаноле очень мало растворим. Растворимы или легко  растворимы меркаптопурин и азатиоприн в растворах щелочей и мало растворимы в разведённых кислотах. Азатиоприн и инозин практически  нерастворимы в хлороформе, а инозин – в эфире.

 

§1.3Получение рибоксина и производных 6,9-замещённых пурина.

Синтез меркаптопурина осуществляют из гипоксантина, действуя на него пентасульфидом дифосфора в  среде безводного пиридина.

Рибоксин продуцируют микроорганизмы Bacillus Subtilis. Его получают микробиологическим синтезом. Затем с помощью физико-химичексих методов выделяют из нативных растворов. Кроме того инозин получается при дезаминировании аденозина.

Существуют химические способы  его получения:1) Введение  углеводного  остатка в готовое пуриновое  ядро 2)Достройка пуриновогоядра уже  синтезированного N-гликозида

 

§1.4. Качественный анализ рибоксина  и производных 6,9-замещённых пурина.

Подлинность инозина и азатиоприна подтверждают с помощью ИК-спектров, получаемых после прессования в таблетках из калия бромида или в вазелиновом масле в области от 4000 до 600 см ^-1( азатиоприна в области 3500-1650см^-1). Они должны иметь так же характеристические полосы, что и прилагаемый к ФС рисунок спектра азатиоприна и соответственно спектр ГСО инозина. Методом ВЭЖХ определяют время удерживания пика инозина на хроматограмме. Оно должно быть аналогичным его ГСО.

Для установления подлинности используют УФ-спектры поглощения. Раствор 0,0004%-ного меркаптопурина в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты имеет максимум поглощения около 325 нм, а в 0,1 М растворе  натрия гидроксида – два максимума(231 и 310 нм). Азатиоприн в виде 0,001%-ного раствора в том же растворителе максимум поглощения при 280 нм и минимум – при 242 нм. Водный 0,001%-ный раствор инозина имеет максимум поглощения при 249 нм, в щелочной среде -253 нм. Отношение оптических плотностей водного раствора при 250 и 260 нм должно быть 1,60-1,80.

Подлинность меркаптопурина можно  подтвердить не только указанными физическими, но и химическими методами, основанными  на реакциях окисления, солеобразования, обнаружение в молекулах третичного азота, меркаптогруппы, остатка рибозы. При использовании в качестве реактива свежеприготовленного раствора нитропруссида натрия в щелочном растворе меркаптопурина появляется желтова-то зелёное окрашивание, переходящее  при подкислении в тёмно-зелёное. Из меркаптопурина, растворённого в  растворе аммиака, выпадает под действием  хлорида меди (II) и гидроксиламина гидрохлорида оранжево-жёлтый осадок. Из растворов меркаптопурина в этаноле при добавлении насыщенного спиртового раствора ацетата ртути(II) выпадает белый осадок, а под действием спиртового раствора ацетата свинца – жёлтый осадок. Идентифицировать меркапропурин можно также с помощью селенистой кислоты ( красный осадок), концентрированной азотной кислоты ( жёлтое окрашивание), концентрированной серной кислоты в присутствии этанола и сахарозы ( коричневое окрашивание).

Для подтверждения наличия нитрогруппы  в молекуле азатиоприна ( R-NO₂  )выполняют процесс гидрирования цинковой пыли в присутствии хлороводородной кислоты .Через 5 минут раствор желтеет. Затем фильтруют и после добавления мочевины проводят реакции диазотирования и азосочетания в фильтрате с помощью нитрита натрия и щелочного раствора β-нафтола; образуется розовый осадок.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Остаток рибозы в молекуле инозина  обнаруживают, добавляя к водному  раствору 0,1% раствор хлорида железа (III) в концентрированной хлороводородной кислоте и 10-ти % спиртовый раствор орцина. После нагревания на кипящей водяной бане в течение 20ти минут смесь приобретает зелёное окрашивание.

 

 

§1.5Методы количественного анализа рибоксина и производных 6,9-замещённых пурина.

Меркаптопурин количественно определяют ( по ФС) йодометрическим методом  в смеси воды и 30%-ного раствора гидроксида натрия, устанавливая эквивалентную  точку потенциометрическим методом.

Количественное определение меркаптопурина обратным аргентометрическим методом  основано на образовании двузамещённой  соли серебра. Навеску растворяют в  растворе аммиака и выполняют  определение обратным аргентометрическим методом, оттитровывая избыток 0,1М раствора нитрата серебра раствором тиоцианата аммония той же концентрации ( индикатор железоаммониевые квасцы):

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Определение меркаптопурина может  быть выполнено методом обратного  меркуриметрического титрования . Действуют  избытком 0,05М раствором нитратом ртути (II). Выпавший осадок фильтруют избытком титранта, оттитровывают как и в случае аргентометрического определения, раствором тиоцианата аммония (индикатор железоаммониевые квасцы).

Количественное определение азатиоприна  может быть выполнено методом  неводного титрования.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

В качестве растворителя используют диметилформамид, усиливающий кислотные  свойства азатиоприна. Титрант –  гидроксидтрибутиламмония. Эквивалентную  точку устанавливают потенциометрическим  методом. Меркаптопурин также количественно  определяют (МФ) в среде диметилформамида, используя в качестве титранта метилат  натрия и индикатор тимоловый  синий.

Содержание азатиоприна и инозина (по ФС) определяют спектрофотометрическим методом. В качестве растворителя для определения азатиоприна используют 0,1М раствор хлороводородной кислоты, оптическую плотность измеряют на спектрофотометре при 280 нм по отношению к растворителю. Расчёт выполняют по удельному показателю поглощения( 600). Инозин определяют при 249 нм. Берут на анализ навеску инозина и растворитель (вода), в соотношении соответствующим 0,00% концентрации. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца инозина в тех же условиях.

 

§1.6.Фармакологические свойства, применение, форма выпуска и условия хранения рибоксина.

 

Состав лекарственного препарата.

Активное вещество- рибоксин. Вспомогательные вещества: стеарат кальция, картофельный крахмал, сахарная пудра.

Состав пленочной оболочки: гидроксипропилцеллюлоза (гипролоза), титана диоксид, тальк, полиэтиленгликоль (макрогол 4000), тропеолин О (краситель тропеолин О).