Фотоэлектроколориметр

 

        Затем во  все пробирки добавляют по 1 капле  раствора йода в йодистом калии,  перемешивают, наблюдают окраску  и определяют рН, при котором  амилаза действует наиболее активно.  В зависимости от активности  слюны ее можно разводить не  в 100, а в 50 или 10 раз.

 

 
10. Определить содержание витамина  С в моче, шиповнике, картофеле,  проводить качественные реакции  на витамины А, Д, Е, B1, B2, РР

Качественная  реакция на витамин А с хлорным  железом.

В сухую пробирку налить 1-2 капли рыбьего жира, 10-15 капель хлороформа. Перемешать и добавить 5 капель 1% раствора хлорного железа. Отметить появление ярко-зеленого окрашивания.

Качественные  реакции на витамин Д.

2.1. Анилиновая  проба на витамин Д.

В сухую пробирку налить 5 капель рыбьего жира, 15 капель хлороформа и 5 капель анилинового реактива (15 частей анилина и 1 часть концентрированной  соляной кислоты). Осторожно нагреть  на спиртовке и отметить появление  красного окрашивания.

2.2. Реакция с  серной кислотой.

В пробу налить 1 каплю  масляного раствора витамина Д, 4 капли  хлороформа, перемешать и добавить 2 капли концентрированной серной кислоты. Встряхнуть и отметить появление  ярко-желтого окрашивания, переходящего в буро-красное.

Качественная  реакция на витамин Е с азотной  кислотой.

В сухую пробирку налить 5 капель 1% раствора токоферола, прибавить 10 капель концентрированной азотной  кислоты и встряхнуть. После отстаивания  эмульсии отметить появление красного окрашивания в верхнем слое.

 

Качественная  реакция на викасол с щелочным раствором цистеина.

       Викасол – синтетический аналог витамина К₁ - в присутствии цистеина в щелочной среде окрашивается в лимонно-желтый цвет.

       Техника выполнения работы.  На сухое часовое стекло наносят 5 капель раствора викасола, добавляют 5 капель раствора цистеина и 1 каплю 10% раствора едкого натра. Появляется лимонно-желтое окрашивание.

Качественные  реакции на витамин PP.

5.1. Реакция с  гидросульфитом натрия.

В пробирку на кончике скальпеля  поместить порошок витамина РР, прилить 0,5-1,0 мл 10% раствора бикарбоната натрия и 0,5-1,0 мл свежеприготовленного 5% раствора гидросульфита натрия. Отметить появление  продукта восстановления витамина РР желтого цвета.

5.2. Реакция с  раствором уксусно-кислой меди.

К 1 мл 0,1% раствора никотиновой  кислоты добавить 1 мл 10% раствора бикарбоната  натрия, прилить равный объем 5% раствора уксусно-кислой меди.

      никотиновая  кислота 

медная соль никотиновой  кислоты синего цвета

Отметить появление голубого окрашивания и выпадения осадка медной соли  синего цвета, образующегося  по следующей реакци

Работа № 6. Реакция  восстановления рибофлавина.

Реакция основана на способности  рибофлавина восстанавливаться. Окрашенный в желтый цвет рибофлавин при восстановлении приобретает розовый цвет, а затем  обесцвечивается, так как восстановленная  форма витамина В₂ бесцветна. Механизм реакции может быть представлен следующим уравнением:

 

Техника выполнения работы. 10 капель взвеси рибофлавина в воде (0,025%) налить в пробирку, добавить туда же 5 капель концентрированной соляной кислоты и поместить небольшой кусочек металлического цинка. Выделяющийся водород восстанавливает рибофлавин и раствор изменяет окраску из желтой в красную и розовую, а затем обесцвечивается.

Работа № 7. Качественная реакция на витамин В₆.

Принцип метода. Витамин В₆ при взаимодействии с раствором хлорного железа образует комплексную соль типа фенолята железа красного цвета.

Техника выполнения работы. К 5 каплям 1% раствора витамина В₆ приливают равное количество 1% раствора хлорного железа и перемешивают. Развивается красное окрашивание.

 
11. Определить  все виды кислотности желудочного  сока и ряд патологических  компонентов (молочную кислоту,  кровь, желчные кислоты и пигменты).

Обнаружение в желудочном соке летучих жирных кислот.

Летучие жирные кислоты (уксусная, масляная, пропионовая) появляются в желудочном соке при недостатке или при отсутствии соляной кислоты в результате брожения компонентов пищи под влиянием ферментов микроорганизмов.

Техника проведения работы: В пробирку поместить 1-2 мл желудочного сока, содержащего летучие жирные кислоты, и содержимое пробирки нагреть на спиртовке. Отметить появление резкого запаха (запах брынзы).

Качественная реакция на молочную кислоту (проба Уфельмана).

Увеличение содержания молочной кислоты в желудочном соке наблюдается при ряде заболеваний, сопровождающихся ахлоргидрией, особенно при раке желудка.

Техника выполнения работы: К 1 мл 1% раствора фенола добавить 3-5 капель раствора FeCl₃. Отметить образование фенолята железа фиолетового цвета.

В пробирку с фенолятом железа добавить по каплям желудочный сок, содержащий молочную кислоту. Отметить переход фиолетовой окраски в желто-зеленую в результате образования молочнокислого железа.

Добавить 1-2 капли соляной кислоты. Жидкость обесцвечивается в следствии разрушения соли.

Обнаружение крови.

Реакция основана на окислении бензидина под действием атомарного кислорода, образующегося из пероксида водорода при действии гемоглобина крови (метгемоглобин).

Кровь в желудочном соке появляется при опухолях, язве желудка, гипертрофических гастритах, варикозном расширении вен пищевода и других заболеваниях.

Техника выполнения работы: В пробирку прилить 1-2 мл желудочного сока, содержащего кровь, добавить 4-5 капель 0,2% спиртового раствора бензидина и 5-6 капель 1% раствора пероксида водорода. Отметить появление синего окрашивания в результате образования дифенохинондиимина - продукта окисления бензидина.

Обнаружение желчи.

Желчь в желудочном соке появляется нередко при ахлоргидрических и ахилических гастритах, раке желудка, при антиперистальтических движениях кишечника. В составе желчи химическим путем определяют желчные кислоты и желчные пигменты.

А. Проба на желчные пигменты (проба Гмелина).

Реакция основана на окислении азотной кислотой билирубина в биливердин зеленого цвета.

Техника выполнения работы: В пробирку налить 1-2 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно по стенке наслоить желудочный сок, содержащий желчь. Отметить образование на границе наслаивания зеленого кольца.

 

Б. Проба на желчные кислоты (реакция Петтенкофера).

Реакция основана на конденсации желчных кислот с оксиметилфурфуролом, образующимся под влиянием концентрированной серной кислоты из сахарозы. Продукт конденсации имеет красно-фиолетовую окраску.

Техника выполнения работы: В пробирку поместить 1-2 мл желудочного сока, содержащего желчь, добавить 5-6 капель 5% раствора сахарозы и осторожно по стенке наслоить 1-2 мл концентрированной серной кислоты. Отметить на границе наслаивания образование красно-фиолетового кольца

Определение витамина С в картофеле.

Отвешивают 5 г картофеля  на весах, растирают в ступке с 20 каплями 10% раствора НСl (чтобы картофель не темнел), постепенно приливают 15 мл дистиллированной воды. Полученную массу сливают в колбочку для титрования, ополаскивают ступку водой, сливают ее в колбочку для титpoвания и титруют 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до розовой окраски.

Вычисляют содержание аскорбиновой кислоты по формуле, приведенной  выше.

Содержание аскорбиновой кислоты в 100 г капусты составляет 25-60 мг, в 100 г шиповника 500-1500 мг, в 100 г хвои 200-400 мг, в 100 г картофеля - 1-5 мг.

 

 
12. Провести  анализ мочи, уметь определять  в моче патологические компоненты: глюкозу, ацетоновые тела, кровяные  пигменты, желчные пигменты и  кислоты.

Определение химических компонентов  нормальной мочи.

Качественное определение хлоридов

Налить в пробирку 1 мл мочи, добавить 2 - 3 капли 30% раствора азотной кислоты  и 3 - 4 капли 1% раствора азотнокислого серебра. Образуется творожистый осадок хлорида серебра. Написать реакцию.

Качественное обнаружение сульфатов

К 1 мл мочи добавить 2 - 3 капли 1% раствора уксусной кислоты и 2 - 3 мл раствора хлористого бария. Выпадает нерастворимый  осадок сульфата бария. Написать реакцию.

Обнаружение фосфатов

В пробирку налить 1 мл молибденового  реактива и нагреть его до кипения. После этого прибавить 5 - 6 капель мочи. Выпадает желтый кристаллический осадок фосфорно-молибденовокислого аммония, нерастворимый в азотной кислоте, но растворимый в аммиаке.

Обнаружение ионов кальция

К 1 мл мочи добавить 1 - 2 капли 3% раствора уксусной кислоты и 1 - 2 капли раствора щавелевокислого аммония. Выпадает осадок щавелевокислого кальция (кристаллы  под микроскопом имеют вид конвертиков). Написать реакцию.

Обнаружение аммиака

В пробирку налить 2 мл мочи, добавить равный объем раствора гидроксида кальция и над пробиркой держать смоченную водой красную лакмусовую бумажку. Через некоторое время бумажка синеет от выделяющегося аммиака.

Обнаружение креатинина (реакция Вейля)

К 1 мл мочи добавить 1 мл 10% раствора гидроксида натрия и 2 капли 10% раствора нитропруссида натрия, появляется красное окрашивание, которое впоследствии переходит в желтое.

Патологические  компоненты мочи.

1. Качественное определение белка.

Белок мочи состоит из сывороточного  альбумина и глобулинов. Кроме  того, на белок дает реакцию моча, содержащая кровь и гной. Белок  в моче обнаруживается с помощью реакций осаждения.

В нормальной моче содержится незначительное количество белка (0,05-0,15 г/сут), что не обнаруживается обычными качественными пробами. Белок в моче обнаруживается при нефрозе, нефрите, сердечной декомпенсации и при некоторых других патологиях. Пробы на белок мочи основаны на его денатурации различными агентами.

Проба кипячением

2 - 3 мл мочи (профильтрованной, если  она щелочная, то ее подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции) довести до кипения и добавить 2 - 3 капли уксусной кислоты. Появление осадка, не растворяющегося при прибавлении кислоты, указывает на присутствие в исследуемой моче белка. Осадки фосфатов и карбонатов кальция и магния растворяются в более кислом растворе.

Проба Геллера

К 1 мл концентрированной  азотной кислоты осторожно, держа  пробирку наклонно, наслоить 1 мл профильтрованной мочи (лучше наслаивать мочу пипеткой). На границе двух слоев при наличии белка появляется белое кольцо.

Проба с сульфосалициловой кислотой

К 1 мл профильтрованной мочи прилить 3 - 4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты. Появление осадка или мути указывает на присутствие белка.

Примечание! Избыток сульфосалициловой кислоты может привести к растворению.

 

2. Качественное определение сахара в моче с помощью реактива Фелинга.

В норме  в моче содержится 0,2-0,4 г/л глюкозы  и она не обнаруживается обычными реакциями. При диабете и некоторых  других заболеваниях, а также после  обильного приема с пищей углеводов, эмоционального стресса, при отравлениях  эфиром, оксидом, хлороформом, поражения  почек он в значительных количествах появляется в моче.

В пробирку налить 1 - 2 мл мочи, добавить равный объем  реактива Фелинга и осторожно нагреть верхний слой жидкости. При наличии сахара отметить выпадение кирпично-красного осадка.

 

3. Качественное обнаружение сахара в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест».

«Глюкотест» приготавливается путем пропитки полосок фильтровальной бумаги размером 0,5×5см смесью, содержащей глюкозооксидазу, пероксидазу и краситель. При смачивании бумаги раствором, содержащим глюкозу, происходит окисление глюкозы под действием фермента глюкозооксидазы. Образующаяся при этом перекись водорода разлагается ферментом пероксидазой с окислением содержащего в тесте красителя. Интенсивность изменения окраски в определенной степени пропорциональна содержанию глюкозы в растворе, поэтому «Глюкотест» используется и для полуколичественного определения содержания глюкозы в моче (от 1,0 до 2,0 г/л и выше).

Бумажку «Глюкотеста» погрузить в исследуемую мочу так, чтобы нанесенная на бумажку желтая полоса была смочена. Немедленно извлечь бумажку, положить смоченным концом на пластмассовую пластинку и через 2 мин сравнить изменившуюся окраску цветной полосы со шкалой, имеющейся в комплекте. Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски.

 

4. Количественное определение белка  в моче по методу Робертса-Стольникова.

При наличии  в моче белка, открытого качественными  реакциями, его количество определяют методом Робертса-Стольникова. В основе метода лежит проба Геллера – денатурация белка азотной кислотой. Экспериментально установлено, что при наслаивании на азотную кислоту, растворы, содержащие 0,0033% белка, дают белое колечко в промежутке между второй и третьей минутами после наслаивания. Если колечко появляется непосредственно после наслаивания раствора белка на азотную кислоту, то путем последовательного разведения исследуемого материала достигают такого максимального разведения, при котором появляется кольцо между второй и третьей минутами. Умножая разведение на 0,0033%, получаем процентное содержание белка в моче.