Фотоэлектроколориметр

Проба Геллера

К 1 мл концентрированной  азотной кислоты осторожно, держа  пробирку наклонно, наслоить 1 мл профильтрованной мочи (лучше наслаивать мочу пипеткой). На границе двух слоев при наличии белка появляется белое кольцо.

Проба с сульфосалициловой кислотой

К 1 мл профильтрованной мочи прилить 3 - 4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты. Появление осадка или мути указывает на присутствие белка.

Примечание! Избыток сульфосалициловой кислоты может привести к растворению.

 

2. Качественное определение сахара в моче с помощью реактива Фелинга.

В норме  в моче содержится 0,2-0,4 г/л глюкозы  и она не обнаруживается обычными реакциями. При диабете и некоторых  других заболеваниях, а также после  обильного приема с пищей углеводов, эмоционального стресса, при отравлениях  эфиром, оксидом, хлороформом, поражения  почек он в значительных количествах появляется в моче.

В пробирку налить 1 - 2 мл мочи, добавить равный объем  реактива Фелинга и осторожно нагреть верхний слой жидкости. При наличии сахара отметить выпадение кирпично-красного осадка.

 

3. Качественное обнаружение сахара в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест».

«Глюкотест» приготавливается путем пропитки полосок фильтровальной бумаги размером 0,5×5см смесью, содержащей глюкозооксидазу, пероксидазу и краситель. При смачивании бумаги раствором, содержащим глюкозу, происходит окисление глюкозы под действием фермента глюкозооксидазы. Образующаяся при этом перекись водорода разлагается ферментом пероксидазой с окислением содержащего в тесте красителя. Интенсивность изменения окраски в определенной степени пропорциональна содержанию глюкозы в растворе, поэтому «Глюкотест» используется и для полуколичественного определения содержания глюкозы в моче (от 1,0 до 2,0 г/л и выше).

Бумажку «Глюкотеста» погрузить в исследуемую мочу так, чтобы нанесенная на бумажку желтая полоса была смочена. Немедленно извлечь бумажку, положить смоченным концом на пластмассовую пластинку и через 2 мин сравнить изменившуюся окраску цветной полосы со шкалой, имеющейся в комплекте. Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски.

 

4. Количественное определение белка  в моче по методу Робертса-Стольникова.

При наличии  в моче белка, открытого качественными  реакциями, его количество определяют методом Робертса-Стольникова. В основе метода лежит проба Геллера – денатурация белка азотной кислотой. Экспериментально установлено, что при наслаивании на азотную кислоту, растворы, содержащие 0,0033% белка, дают белое колечко в промежутке между второй и третьей минутами после наслаивания. Если колечко появляется непосредственно после наслаивания раствора белка на азотную кислоту, то путем последовательного разведения исследуемого материала достигают такого максимального разведения, при котором появляется кольцо между второй и третьей минутами. Умножая разведение на 0,0033%, получаем процентное содержание белка в моче.

Ход работы. В пробирку налить 1 мл концентрированной азотной кислоты с хлористым натрием (реактив Ларионовой) и наслаивать на нее осторожно из пипетки равный объем мочи. Моча, благодаря меньшему удельному весу, наслаивается на кислоту. На границе двух жидкостей при наличии белка появляется белое кольцо, толщина и быстрота появления которого зависят от количества белка. Если колечко появилось сразу после наслаивания мочи, то нужно вновь повторить эту реакцию с мочой, сделав разведение в 10, 20 раз, при необходимости - в 30 раз и т.д., добиваясь, чтобы белое колечко денатурированного белка, появилось между второй и третьей минутами после наслаивания.

Расчет. Колечко появилось через 2 минуты после наслаивания, когда моча была разведена в 40 раз. Следовательно, содержание белка в моче составляет 0,0033 × 40 = 0,132%.

 

5. Качественное определение кетоновых тел.

В нормальной моче кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная  и b-гидроксимасляная кислоты) содержатся в небольших количествах (0,02-0,05 г/сут, или 20-50 мг) и обычными качественными реакциями не обнаруживаются. Повышенная экскреция их с мочой (кетонурия) наблюдается при сахарном диабете (до 10-50 г/сут), голодании, инфекционных заболеваниях (туберкулезе и др.)

Проба с нитропруссидом натрия (Легаля) на ацетон

При взаимодействии ацетона с нитропруссидом натрия в щелочной среде появляется оранжево-красное окрашивание. После подкисления концентрированной уксусной кислотой оранжево-красное окрашивание переходит в вишневое.

В пробирку налить 1 мл мочи и добавить 2 - 3 капли  свежеприготовленного раствора нитропруссида натрия и 3 - 4 капли 10% раствора едкого натра. После развития оранжево-красной окраски прилить несколько капель концентрированной уксусной кислоты и отметить изменение цвета раствора в вишневый.

Проба Либена на ацетон

Проба основана на образовании йодоформа СНI₃ при взаимодействии ацетона с I₂ в щелочной среде.

К 1 мл мочи добавить 3 - 4 капли 10% раствора КОН и  по каплям - раствора йода в йодистом калии (раствор Люголя) до появления мути (слабо-желтый кристаллический осадок йодоформа) при наличии ацетона, обладающего специфическим «больничным» запахом.

СНз-С-СН₃ + 2I₂ + 4NаОН —®  СНI₃ + CH₃COONa + 3NaI + 3Н₂О

         êê

         О

К 1 мл мочи добавить 4 - 5 капель 5% раствора FеСl₃. Наблюдается вишнево-красное окрашивание за счет комплексного соединения железа с енольной формой ацетоуксусной кислоты, постепенно бледнеющее при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты:

СНз-С-СН₂СООН —® СН₃-С-СН₃ + СО₂

         êê                                     êê

        О                                     О

 

6. Качественная реакция на кровяные пигменты.

Появление в моче форменных элементов крови (гематурия) или кровяных пигментов (гемоглобинурия) относится к патологии  и может быть обнаружено с помощью ряда проб (гваяковой, бензидиновой и др.). Гематурия имеет место при нарушении целостности кровеносных сосудов, повреждении мочеполовых путей (мочевые камни, рак мочевого пузыря); гемоглобинурия наблюдается при отравлении гемолитическими ядами, при ожогах происходит разрушение эритроцитов. Кровяные пигменты можно открыть бензидиновой пробой, которая основана на окислении бензидина атомарным кислородом, который образуется при разложении перекиси водорода кровяным пигментом, моча окрашивается в синий или зеленый цвет.

Проба с бензидином

В пробирку налить 1 мл прокипяченной  мочи, добавить 4 капли 5% раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте (свежеприготовленный) и 4 капли 3% раствора перекиси водорода. После перемешивания жидкость окрашивается в синий или зеленый цвет, что указывает на присутствие крови в моче.

Проба гваяковой смолой

Налить в пробирку 1 мл исследуемой  мочи. В другую пробирку добавить 1 мл 2% раствора гваяковой смолы, туда же добавить 3 - 5 капель 1% раствора перекиси водорода и осторожно наслоить в пробирку раствор, содержащий мочу. При наличии кровяных пигментов отметить появление синего кольца на границе наслаивания.

 

7.  Качественное определение желчных пигментов.

Желчные пигменты (билирубин, биливердин и др.) образуются при распаде гемоглобина эритроцитов и появляются в моче при желтухах . Моча, содержащая желчные пигменты, имеет желтовато-коричневое или зеленое окрашивание (характерный признак желтухи).

Проба на билирубин с раствором  йода (проба Розина)

К 3 мл мочи осторожно наслоить 1% спиртовый раствор йода или раствор Люголя. При наличии билирубина на границе между обеими жидкостями образуется зеленое кольцо. С нормальной мочой проба отрицательна.

Проба Гмелина на желчные кислоты

К 1 мл концентрированной азотной  кислоты осторожно по стенке наслоить мочу равный объем. При наличии желчных пигментов на границе наслаивания образуется зеленое кольцо.

 

8.  Проба Петенкофера на желчные кислоты.

Реакция основана на конденсации желчных  кислот с оксиметилфурфуролом, образующимся под влиянием концентрированной серной кислоты из сахарозы. Продукт конденсации имеет красно-фиолетовую окраску.

В пробирку поместить 1 мл мочи добавить 5 капель 5% раствора сахарозы и осторожно по стенке пробирки наслоить 1 мл концентрированной серной кислоты. При наличии желчных кислот на границе наслаивания образуется кольцо красно-фиолетового цвета.

 

9. Проба Яффе на уробилин.

К 2 мл мочи прибавить небольшую порцию раствора хлористого цинка. При встряхивании появляется хлопьевидный осадок, который растворить в концентрированном растворе аммиака (около 1мл). В норме появляется слабо-зеленая флюоресценция, ярко выраженная при патологии.

 

10. Качественное определение индикана в моче.

Индикан - калиевая или натриевая  соль индоксилсерной кислоты - содержится в нормальной моче в виде следов. Много индикана содержится в моче травоядных животных, а также в моче человека при усиленном гниении белков в кишечнике, при запорах и непроходимости кишечника.

В пробирку налить 4 мл исследуемой  мочи и прибавить при помешивании равный объем серной кислоты. Затем добавить около 1 мл хлороформа, 1 - 2 капли раствора перманганата калия, закрыть пробкой и несколько раз перевернуть, не встряхивая. Пробирку поставить в штатив и наблюдать интенсивность окрашивания хлороформного слоя в синий цвет

1. Физико-химическое исследование мочи.

Удельный  вес ______________________________

Цвет_______________________________________

Прозрачность_______________________________

рН________________________________________

2. Химическое исследование мочи.

а) Нормальные составные части.

Кальций___________________________________

Магний____________________________________

Сульфаты__________________________________

Мочевина__________________________________

Креатинин__________________________________

б) Патологические составные части.

Сахар______________________________________

Белок (при  обнаружении белка необходимо сделать  количественное определение его)_______________________________

Ацетоновые  тела____________________________

Кровяные  пигменты_________________________

Желчные кислоты___________________________

Билирубин_________________________________

Уробилин__________________________________

Индикан____________________________________

Вывод: __________________________________________________

 
14. Определение содержания кальция  в сыворотке крови.

Нормальный уровень этого  элемента в сыворотке (плазме) крови  практически здоровых людей составляет 2,0.2,75 ммоль/л. У здоровых новорожденных нижний предел концентрации кальция равен 1,75 ммоль/л, у недоношенных детей – 1,25 ммоль/л.

Повышение уровня кальция (гиперкальциемия) в сыворотке крови наблюдается при увеличении его поступления в кровь из резорбцируемой костной ткани или из пищи в условиях снижения почечного клиренса. Более 90% случаев гиперкальциемии обусловлено первичным гиперпаратиреозом и злокачественными новообразованиями.

Снижение концентрации кальция (гипокальциемия) в сыворотке крови отмечается гораздо чаще, чем гиперкальциемия, и происходит по целому ряду причин, а именно:

• гипопаратиреоз, развитие которого наблюдается при нарушении функций паращитовидных желез, например, в результате повреждения при операциях на щитовидной железе;
• псевдогипопаратиреоз – наследуемая резистентность органов-мишеней к паратгормону;
• нарушения всасывания или повышенного выведения кальция (синдром мальабсорбции);
• дефицит витамина D;
• тубулопатия (заболевания почек, сопровождающиеся нарушениями реабсорбции кальция в почечных канальцах);
• острая и хроническая почечная недостаточность;
• гипоальбуминемия;
• острый алкалоз.

Принцип метода. Использование флуорексона для комплексоно-метрического определения кальция основано на том, что его водные растворы в силыющелочной среде не флуоресцируют, по в этих же условиях флуорексон образует с кальцием флуоресцирующие комплексы. Комплекс индикатора с металлом менее прочен, чем комплекс металла с трилоном Б, поэтому по мере добавления последнего к раствору, содержащему металл и индикатор, происходит постоянный переход ионов металла к три-лону Б. При титровании трилоном Б в точке эквивалентности отмечается резкое «затухание» флуоресценции. 
15. Определение активности каталазы крови по Л.И Баху и С.Р. Зубковой.

Количественное определение  активности каталазы крови методом  А.Н. Баха и С.Р. Зубковой.

Принцип метода. Метод основан на титровании избытка перекиси водорода, нерасщепленного каталазой, перманганатом калия в кислой среде.

5Н₂О₂ + 2КМnО₄ + 3Н₂SО₄   →  8Н₂О + 5О₂ + К₂SО₄ + 2MnSО₄