Шпаргалка по "Микробиологии"

Вирусы Коксаки В характеризуются  более высокой нейротропностью. У новорожденных мышей вызывают энцефаломиелит. Выделяются при асептическом серозном менингите, миокардите и энцефаломиокардите у детей до 3-летнего возраста и при других заболеваниях. Вирусы обеих групп являются возбудителями полиомиелитоподобных заболеваниях, острых респираторных и кишечных инфекций.

После заболевания остается напряженный  типоспецифический иммунитет. В  сыворотке крови в течение  многих лет сохраняются вируснейтрализующие  антитела. Комплементсвязывающие антитела исчезают спустя несколько месяцев.

Вакцинопрофилактика не разработана.

Вирусы ECHO

Вирусы ECHO по своей структуре, репродуктивной способности мало отличаются от вирусов полиомиелита и Коксаки. Культивируются на первичных и перевиваемых линиях клеток. Цитопатическое действие у разных серотипов выражено неодинаково. В отличие от полиовируса они не патогенны для обезьян и не патогенны для новорожденных мышей, что отличает их от вирусов Коксаки.

Антигены. Вирусы ECHO имеют общий комплементсвязывающий антиген, который не дает перекрестных реакций с антисыворотками к вирусам полиомиелита и Коксаки, и типоспецифические антигены. В реакции нейтрализации индентифицировано 32 серотипа. Они обладают гемагглютинирующими свойствами.

Патогенез и иммунитет. Вирусы ECHO, так же как и вирусы Коксаки, являются возбудителями довольно разнообразных по своему клиническому проявлению заболеваний, напоминающих паралитические формы полиомиелита, серозный менингит, острые респираторные и кишечные инфекции и др. При заболеваниях, вызванных вирусами ECHO, в сыворотке крови появляются Комплементсвязывающие, вируснейтрализующие антитела и антигемагглютинины. Основную роль в иммунитете играют вируснейтрализующие антитела, которые сохраняются длительное время.

Лабораторная диагностика энтеровирусных инфекций. Материалом для исследования служат кал, смывы и мазки из зева, кровь. Выделение вирусов проводят путем заражения исследуемым материалом культур первичных и перевиваемых клеток, а их идентификацию - в РСК и реакции нейтрализации. Для дифференцировки вирусов Коксаки от полиовируса и вирусов ECHO заражают мышей-сосунков, а также используют серологические методы - РСК, РН и РТГА (серодиагностика осуществляется в тех же реакциях с парными сыворотками больных). При заболевании отмечается нарастание титра антител. Реакцию нейтрализации ставят в культуре клеток или на мышах-сосунках (при выделении вирусов Коксаки).

23. СПИД-ассоциированные возбудители.  Лабораторная диагностика.

27. ВИЧ- инфекция. Лабораторная диагностика,  иммунопатогенез ВИЧ- инфекции.

Возбудителем СПИДа (синдром приобретенного иммунного дефицита, ВИЧ–инфекция, или «болезнь Т–хелперов») является лимфотропный ретровирус, избирательно поражающий определенный клон Т–хелперов без заметного влияния на Т–супрессоры, что приводит к дисбалансу между ними и специфическому для СПИДа снижению коэффициента Т–хелперы/Т–супрессоры. Ретровирус СПИДа выделил Люк Монтатье в 1983 г. во Франции и дал ему название «вирус, ассоциированный с лимфоаденопатией, или LAV». Год спустя в США его получил Р. Галло и назвал «вирусом Т–клеточного лейкоза человека III типа – HTLV–III». В настоящее время вирус СПИДа называют вирусом иммунодефицита человека – ВИЧ (HIV).

Ультраструктура ВИЧ. Зрелый вирион имеет сложную структуру, округлую форму диаметром 100–140 нм. Его сердцевина представлена нуклеоидом продолговатой формы, в которой содержатся РНК, протеины и обратная транскриптаза. В оболочке, покрывающей нуклеоид, содержатся протеины и гликопротеиды, обладающие чрезвычайно высоким аффинитетом к рецепторам Т–хелперов.

Клинические особенности. В основе синдрома лежит дефицит Т–клеточного иммунитета и связанное с этим развитие тяжелых инфекционных процессов, вызванных редко встречаемой условно–патогенной микрофлорой или возникновением злокачественных опухолей. Подозрительными на СПИД симптомами являются хронические диарея (15–20%), пневмония (65%) и длительная ремитирующая лихорадка, не поддающиеся лечению химиотерапевтическими препаратами, прогрессирующая потеря массы тела (на 10–15% за 1–2 месяца), лимфопения, саркома Капоши у лиц моложе 60 лет (30%) и другие опухоли. При этом верхние дыхательные пути и легкие чаще всего поражаются простейшими Pneumocyctis carinii, герпесвирусами, аспергиллами (род грибов класса гифомицетов), атипичными микобактериями, токсоплазмами, гельминтами, а кишечник – условно–патогенными грибами рода кандида.

Для вирусологических и иммунологических исследований рекомендуется брать  два образца стерильной гепаринизированной крови по 5 мл каждый, обеспечивая их доставку в течение 6–8 ч после взятия от больного в охлажденном состоянии в сумках–холодильниках. Сыворотка больных для транспортировки и хранения замораживается при температуре –20°C.

Иммунологические показатели. Избирательное поражение Т–хелперов проявляется в их уменьшении и дисбалансе с Т–супрессорами (Т_х/Т_с< 0,6 против 1:1 в норме), снижении общего числа Т–клеток. Одновременно больные СПИДом утрачивают способность реагировать на туберкулин, трихофитин, кандидин и другие аллергены.

Вирусологическая диагностика. Вирусологическое исследование на СПИД основывается на получении прямых показателей наличия в крови больных вируса и специфических к нему антител. С этой целью ретро–вирус выделяют в Т–клеточных культурах, но методики получения и культивирования вируса настолько сложны, что доступны лишь отдельным вирусологическим лабораториям. Широкое применение нашел метод обнаружения в крови больных вируса и антител с помощью иммуноферментного анализа. При этом чаще применяется твердофазный метод обнаружения антител в сыворотке больных и носителей. Для этого производственные институты готовят полистироловые планшеты с сорбированным в лунках антигеном ВИЧ. При их наличии исследование проводится поэтапно: 1) во все лунки, кроме контрольных, на 30 мин при 37°С вносят исследуемые сыворотки; 2) к образовавшемуся иммунному комплексу на 30 мин при 37°С прибавляют антивидовой пероксидазный иммуноконъюгат; 3) для определения присоединения пероксидазного иммуноконъюгата к иммунному комплексу в лунки на 10 мин вносят ортофенилендиамин + Н₂О₂ как субстрат, что в положительных случаях проявляется пожелтением; 4) регистрация результатов реакции (интенсивности окрашивания) проводится специальным спектрофотометром.

Микробиологическая диагностика  основных СПИД–ассоциированных инфекций. Микробиологические исследования, естественно, косвенно подтверждают диагноз СПИД, но по значению не являются второстепенными, так как выявление при пневмониях у детей старше года или у взрослых людей Pneumocyctis carinii характерно лишь для больных с первичным иммунодефицитом человека. Приблизительно то же можно сказать и о кандидах, которые вызывают диарею. Ассоциированный со СПИДом кандидоз по тяжести течения клинических аналогов не имеет. В связи с этим рассмотрим основные лабораторные приемы их обнаружения и выделения.

Диагноз пневмоцистной  пневмонии подтверждается обнаружением в мокроте и слизи верхних дыхательных путей паразитарных телец, цист с внутриклеточными включениями и нарастанием титра антител к ним в крови больных.

Приготовленные мазки фиксируют  и окрашивают по Романовскому–Гимзе. При их микроскопии обнаруживают округлой формы тельца, покрытые бесструктурной оболочкой и содержащие ядро. Размеры их варьируют от 2х1,5 до 2х3 мкм. Зрелые формы цист, образующиеся в процессе сложного цикла развития Р. carinii, имеют несколько (чаще 8) овальных или грушевидных спор диаметром 1–2 мкм каждая.

Из иммунологических методов, подтверждающих пневмоцистную природу пневмонии, используется РСК, но наиболее чувствительной является РИФ с антигеном, очищенным  от тканевых клеток.

Диагноз диареи, вызванной  кандидами, основывается на обнаружении в мазках из фекалий большого количества дрожжеподобных организмов, выделении чистой культуры гриба и ее идентификации, постановке серологических и аллергической реакций.

Приготовленные из фекалий больного препараты под микроскопом можно изучать в неокрашенном и окрашенном состояниях. При микроскопии без окраски жидкие фекалии исследуют в раздавленной капле в смеси спирта с глицерином (глицерина – 4ч., спирта этилового – 2ч., дистиллированной воды – 4ч.). Для выявления оболочек и глыбок гликогена у дрожжеподобных организмов используют двойной концентрации раствор Люголя, который добавляется к ним в равном объеме. Микроскопируют вначале объективом х8, а затем х40. В препаратах обнаруживают круглые или овальные почкующиеся дрожжеподобные клетки (3–6 мкм) и псевдомицелий (гифы–нити) длиной 20–30 мкм, образующийся за счет удлинения зрелых кандид.

Для исследования препаратов в окрашенном виде на предметном стекле готовят  тонкие мазки, подсушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом  или смесью Никифорова. По Граму кандиды окрашиваются в темно–фиолетовый цвет, иногда с розовой центральной частью клетки.

Чистую культуру кандид выделяют на агаризованной среде Сабуро, пивном сусло–агаре, морковно–картофельном  отваре. К этим средам добавляют  пенициллин, стрептомицин или хлортетрациклин в количестве 300–400 ЕД/мл среды для подавления роста сопутствующих бактерий. Посевы культивируют при температуре 30°С. Колонии кандида имеют беловато–желтый цвет, по мере роста и увеличения размеров приобретают перламутровый оттенок и куполообразное возвышение. Выделенные колонии кандид для выявления псевдомицелия засевают на картофельную воду или морковно–картофельный отвар. В жидких питательных средах они образуют равномерную муть или осадок, нередко – пленку на поверхности среды. При положительном результате псевдомицелий можно обнаружить, пользуясь малым увеличением микроскопа, на 3–5 сутки культивирования.

Идентификация грибов рода Candida проводится по ряду морфолого–культуральных и биохимических свойств.

Для обнаружения в крови больных специфических антител можно ставить реакции агглютинации, преципитации и реакцию связывания комплемента. Антигены для этих реакций готовят из культуры дрожжеподобных грибов. В качестве антигенов в реакции связывания комплемента применяют вакцину из Candida, полисахаридные фракции дрожжеподобной культуры гриба, а также его лизат. В реакции агглютинации используют двухмиллиардную взвесь культуры кандида в 1 мл изотонического раствора натрия хлорида.

Аллергическую пробу взрослым ставят путем внутрикожного введения 0,1 мл поливалентной вакцины, содержащей 200 млн клеток кандида в 1 мл. Для детей ее разводят в 10 раз. Результаты реакции учитывают через 24–48 ч, при СПИДе она всегда отрицательная.

24. Вирусы группы герпеса. Лабораторная  диагностика герпесвирусных инфекций.

Семейство Herpetoviridae (герпесвирусов)

Сем. Herpetoviridae подразделяется на три подсемейства: a-герпесвирусы, b-герпесвирусы, g-герпесвирусы, насчитывающих около 50 видов.

Структура и химический состав. Герпесвирусы представляют собой частицы с икосаэдрическим типом симметрии. Они имеют внешнюю оболочку, содержашию липиды, углеводы и белок. Диаметр вириона 150 - 200 нм. ДНК двунитчатая, молекулярная масса 85-150. У разных представителей герпесвирусов в ДНК обнаружены разнообразные нуклеотидные последовательности, что свидетельствует о ее гетерогенности и, возможно, об отдаленном родстве вирусов, включенных в данное семейство.

Резистентность. Чувствительны к воздействию физических и химических факторов (нагревание до 55°С, высушивание, эфир, обычные растворы дезинфицирующих веществ). Длительно сохраняются в лиофилизированном состоянии.

Антигены. Герпесвирусы содержат несколько антигенов, связанных с внешней оболочкой и белками капсида, которые различают в РСК, РН и методом флюоресцирующих антител.

Культивирование и репродукция. Вирусы различаются по своей способности репродуцироваться в курином эмбрионе. Культивируются в клетках разных тканей.

Онкогенность. Многие виды герпесвирусов обладают способностью вызывать онкогенную трансформацию клеток и индуцировать образование опухолей у новорожденных животных.

Вирусы простого герпеса

Обладают типичными для всех герпесвирусов свойствами.

Культивирование и репродукция. Вирусы хорошо культивируются в курином эмбрионе, образуя белые бляшки на хорионаллантоисной оболочке. Подобные бляшки появляются при репродукции вируса в клеточной культуре.

Вирус проникает в клетку либо прямым путем - непосредственно через повреждения  в клеточной оболочке, либо путем  пиноцитоза. После депротеинизации вириона его ДНК локализуется в ядре клетки, В ней закодирован синтез ряда ферментов: вирусспецифической ДНК-полимеразы и др., а также структурных белков. После начала репликации вирусной ДНК наблюдается подавление синтеза клеточной ДНК и белков и на освободившихся рибосомах начинается синтез вирусных белков. Из цитоплазмы вирусспецифические ферменты и структурные белки транспортируются в ядро, принимая участие в репликации вирусной ДНК и образовании нуклеокапсида. Внешнюю оболочку нуклеокапсиды приобретают при прохождении через измененную ядерную мембрану клетки. Затем вирионы покидают клетку через вакуоли или трубчатые структуры, сообщающиеся с внешней средой.

Антигены. Различают два серотипа вируса, которые имеют перекрестно реагирующие антигены и отличаются друг от друга типоспецифическими антигенами в РСК и реакции нейтрализации с адсорбированными типоспецифическими сыворотками.

Патогенез и иммунитет. Вирусы герпеса типов 1 и 2 проникают в организм разными путями, вызывая разнообразные клинические синдромы.

Вирус герпеса типа 1 обнаруживается при следующих инфекциях: 1) остром гингивостоматите, встречающемся чаще у детей младшего возраста. Отмечаются везикулярные высыпания на слизистой  оболочке ротовой полости, которые  могут изъязвляться; 2) герпетической экземе, поражающей главным образом людей, страдающих хронической экземой; 3) кератоконъюнктивите, который может сопровождаться изъязвлением роговицы и пузырьковыми высыпаниями на веках. В ряде случаев при рецидивах заболевания строма роговицы поражается, в результате чего наступает ее помутнение и слепота; 4) менингоэнцефалите, нередко заканчивающимся летальным исходом; 5) герпетической лихорадке. Это наиболее распространенная герпетическая инфекция. Характеризуется образованием везикулярных высыпаний на губах, которые могут изъязвляться. Заболевание может рецидивировать через различные интервалы времени.

Вирус герпеса типа 1 может персистировать в ганглиях тройничного нерва.

Вирус герпеса типа 2 вызывает: 1) генитальный  герпес, который характеризуется  везикулярно-язвенными поражениями полового члена или влагалища, наружных половых органов и промежности у женщин; 2) герпес у новорожденных, протекающий с поражением мозга или других органов. Заражение происходит при прохождении плода через родовые пути, пораженные вирусом герпеса.

Вирусы герпеса типов 1 и 2, проникая в организм через повреждения  кожи, могут вызывать раневой герпес (например, у стоматологов и медицинских  работников других специальностей). Герпетические  инфекции часто носят рецидивирующий характер.

У новорожденных определяются материнские  антитела в первые полгода жизни  ребенка. Антитела к вирусу типа 1 обнаруживаются у большинства лиц юношеского возраста. В период половой зрелости появляются антитела к типу 2.

После первичной инфекции в большинстве случаев вирус сохраняется в латентном состоянии, несмотря на наличие антител, циркулирующих в крови. Комплементсвязывающие и вируснейтрализующие антитела появляются в максимальном количестве через 2-3 нед после начала заболевания и часто сохраняются пожизненно. После первичного инфицирования организма человека вирусом типа 1 образуются типоспецифические вируснейтрализующие антитела, принадлежащие к IgM. При инфекции, вызванной вирусом типа 2, определяются антитела аналогичного класса, нейтрализующие оба типа вируса. При повторной инфекции вирусом типа 2 появляются антитела IgG к вирусам обоих типов. Однако антитела присутствуют в организме одновременно с вирусом, в результате чего возникает состояние длительного вирусоносительства. Антитела к вирусу типа 1 встречаются почти у 90% взрослых людей.