Шпаргалка по "Микробиологии"

Септицемия. Термин определяет состояния с характерными клинической картиной различной выраженности, течением процесса и склонностью к образованию вторичных очагов. Микроорганизмы, циркулирующие в крови, активно размножаются. Наиболее часто этиологические агенты септицемий диссеминируют в кровоток из очагов инфекции, но также возможна и травматическая инокуляция возбудителя. Микроорганизмы циркулируют в кровотоке вплоть до проведения эффективной терапии либо, при её отсутствии, до смерти пациента.

Бактериемия и септицемия часто  являются составными частями многих инфекционных процессов. Например, внутрисосудистое диссеминирование отмечают при пневмококковой пневмонии, бартонеллёзе, лихорадке Скалистых Гор и других риккетсиозах, сифилисе и желтушном лептоспирозе. В ряде случаев бактериемия и септицемия вызывают клиническую симптоматику, характерную для определённых заболеваний. Следует помнить, что независимо от этиологии основные клинические проявления – лихорадка и озноб. Одно из самых распространённых осложнений грамотрицательных бактериемий и септицемий – эндотоксиновыи шок. Как правило, состояние развивается при одновременном поступлении в кровь значительного количества бактериальных токсинов. Бактериемию способны вызвать практически любые микроорганизмы.

Бактеремические инфекции.

Грамотрицательные бактериемии. В подавляющем большинстве случаев термин применяют при состояниях, вызванных представителями семейства Enterobacteriaceae и Pseudomonadaceae. В среднем подобные состояния возникают у 1% госпитализированных пациентов. Наиболее распространённые возбудители – Escherichia coli (35% всех случаев), виды Klebsiella, Enterobacter и Serratia (27% случаев), виды Proteus (11% случаев) и Pseudomonas aeruginosa (12% случаев).

Грамположительные бактериемии. Основной возбудитель – коагулазо–положительный золотистый стафилококк; коагулаза–отрицательные стафилококки (S. epidermidis и S. saprophyticus) редко вызывают подобные поражения. Выделяют первичные (возбудитель проникает с кожных покровов) и вторичные стафилококковые бактериемии (источник возбудителя – очаг существующей инфекции). Инфекции, наиболее часто сопровождаемые бактериемиями – Salmonella choleraesuis serovar typhi (S. enterica serovar typhi); Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis серогрупп А, В, С.

Септицемические инфекции. Возникают при высокой вирулентности микроорганизмов и наличии предрасполагающих факторов. Большинство возбудителей септицемии способно вызывать и бактериемию.

Септицемия, вызванная бактероидами. Основные возбудители – Bacteroides fragilis и Prevotella melaninogenica.

Клостридиальная септицемия. Потенциальным возбудителем бактериемии и септицемии может быть любой из более чем 70 видов рода Clostridium. Более 90% всех клостридиальных септицемии вызывает С. perftingens. Менее вирулентные виды, С. septicum и С. ramosum, способны вызвать шок и гибель новорождённых, а также взрослых пациентов со злокачественными новообразованиями и иммунодефицитами. Источники клостридиальной септицемии – толстая кишка, желчевыводящие пути, матка. Клинически точную локализацию источника определяют только в половине случаев; в остальных предполагают вышеуказанную локализацию. Для получения адекватного результата предпочтительно забирать 20-30 мл крови. У детей концентрация микроорганизмов обычно выше, и объём образца зависит от возраста ребёнка (1-5 мл). Кровь немедленно вносят в сосуд с питательной средой (не меняя иглы) в соотношении 1:10 и перемешивают. Отобранные образцы необходимо быстро доставить в лабораторию, сохраняя при комнатной температуре. Образцы крови нельзя замораживать. Как правило, успешное выявление бактерий у 99% пациентов возможно только при изучении трёх гемокультур, взятых в течение 24 ч. При исследовании только одной гемокультуры бактерии обнаруживают в 80% случаев.

Техника выделения возбудителя. В отличие от грибковых и паразитарных инфекций, микроскопическое исследование крови обычно не проводят, т.к. обнаружить бактерии микроскопией мазков крови удаётся редко. Одна из немногих бактерий, наиболее часто обнаруживаемая в мазках, – Borrelia recurrentis. Для культивирования образцов крови применяют относительно стандартные методики. Разведение крови в соотношении 1:10 стабильно снижает бактерицидное действие сывороточных факторов. При возможности в среду вносят 0,025% раствор полианитолсульфоната Na, ингибирующего фагоциты и компоненты комплемента, а также инактивирующего аминогликозидные антибиотики. Обычно используют обогащённые питательные среды, например, 100 мл триптического соевого бульона. При подозрении на конкретную инфекцию можно использовать соответствующие среды, например среду для выращивания бруцелл. Посев необходимо проводить в 2 сосуда; в каждый вносят по 5 мл крови. В один обеспечивают поступление воздуха для обнаружения аэробов и факультативных анаэробов; в другом создают условия, препятствующие контакту среды с воздухом (например, заливают парафином или минеральным маслом), что необходимо для роста строгих анаэробов. Гемокультуры инкубируют при температуре 35-37°С и в течение 7 дней ежедневно осматривают. Помутнение среды указывает на рост бактерий; при отсутствии роста проводят повторное исследование на 14 день. При выделении бактероидов исследование продолжают в течение 2-3 нед. Через 24 ч готовят мазки и окрашивают по Граму. Из пробирок с отсутствием помутнения проводят повторный посев на чашки с КА. Повторный пересев сильно повышает возможность выявления бактерий в гемокультуре. После 2 нед исследования гемокультуру признают отрицательной при отсутствии роста даже при подозрении на наличие бактерий.

19. Лабораторное исследование мочи  при уроинфекции.

Моча здорового человека стерильна; как правило, бактерии проникают в неё при прохождении через дистальные отделы мочевыводящих путей. Проникшие в мочу микроорганизмы быстро размножаются, т.к. она содержит основные вещества, необходимые для роста (углеводы, мочевина, минеральные соли и т.д.). Росту бактерий также способствуют благоприятные значения рН (5,3–6,5). К резидентной микрофлоре относят стафилококки, микрококки, дифтероиды, сарцины, энтеробактерии, нейссерии, микобактерии, микоплазмы, бактероиды, фузиформные бактерии и трепонемы. Обилие бактерий, колонизирующих наружные половые органы и переднюю уретру, а также способных быстро размножаться в моче, ставит проблемы правильной интерпретации результатов бактериологического исследования. Для проведения дифференциальной диагностики между истинными возбудителями и бактериями, случайно попавшими в мочу, следует правильно проводить забор мочи, использовать методы количественного определения микроорганизмов и знать возбудителей инфекций мочевыводящих путей.

Перед проведением забора мочи следует  попросить больного обмыть наружные половые органы с мылом. В стерильный сосуд отбирают 3–5 мл средней порции утренней мочи, т.к. она содержит повышенное количество микроорганизмов, скопившихся за время сна. Критическая величина нормального содержания бактерий – 105/мл. Полученный образец следует быстро (в течение 30 мин) доставить в лабораторию, исследование необходимо начинать не позднее 1 ч после забора. При невозможности начать работу немедленно мочу можно сохранять в холодильнике не более 24 ч. Некоторые методики позволяют производить посев у постели больного: чаще используют метод предметного стекла (стекло, покрытое слоем питательной среды, погружают в мочу, извлекают, дают моче стечь и инкубируют) и метод калиброванных флаконов (используют сосуды ёмкостью 30 мл, стенки которых покрыты питательной средой: в сосуд вносят 3–5 мл мочи, ополаскивают стенки и сливают; сосуды инкубируют в термостате). При невозможности самостоятельного мочеиспускания показаны катетеризация и надлобковая пункция мочевого пузыря. На факт контаминирования образца часто указывает наличие нескольких видов бактерий. Наличие в моче клеток эпителия влагалища указывает, что забор образца был произведён неправильно.

Количественные методы бактериологического исследования мочи. Наибольшее распространение получил метод калиброванной петли. Образец мочи высевают на подходящую плотную среду платиновой калиброванной петлёй диаметром 2 мм. Следует соблюдать технику посева. Платиновой петлей диаметром 2 мм производят посев мочи (30–40 штрихов) на сектор А чашки Петри с простым питательным агаром. После этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор I и аналогичным образом – из сектора I во II и из II в III.Чашки инкубируют при 37°С 18–24 часа, после чего подсчитывают число колоний, выросших в разных секторах. По этому количеству определяют степень бактериурии.

При латентном течении уроинфекции, а также после лечения антибактериальными препаратами рекомендуется производить посев по 0,1 мл цельной мочи на плотные питательные среды и в пробирку с 0,25% сахарным бульоном. Посевы инкубируют при 37С° 24 часа. При отсутствии роста на 5% кровяном агаре чашки выдерживают в термостате, т.к. может наблюдаться замедленный рост стрептококков.

Быстрый метод определения количества бактерий в образце – микроскопия нецентрифугированной мочи; выявление хотя бы одной бактерии в поле зрения при большом увеличении микроскопа (тысячекратном) эквивалентно наличию 105 бактерий/мл мочи. При поражениях в моче часто обнаруживают лейкоциты и эритроциты, что может указывать на наличие патологического процесса, но не считается диагностическим показателем.

При профилактических осмотрах можно  использовать экспресс–тесты для  скрининговых иссследований, основанные на определении продуктов метаболизма, образующихся при размножении микроорганизмов в моче. При положительном результате, полученном ускоренными методами, необходимы дальнейшие исследования с помощью метода секторных посевов.

Нитритный тест. Нитриты, являющиеся продуктами метаболизма энтеробактерий, можно выявить в моче с помощью реактива Грисса. Готовят 2 раствора

а) 1,25 г. сульфониловой кислоты растворяют в 500 мл 30% уксусной кислоты

б)2,5 г a–нафтиламина растворяют в 500 мл 30% уксусной кислоты.

Оба раствора хранят в защищенном от света месте. Непосредственно  перед исследованием оба раствора смешивают в равных количествах, 1 мл смеси добавляют к 1 мл мочи. Появление красного окрашивания свидетельствует о присутствии в 1 мл мочи не менее 105 микробных клеток.

ТТХ – тест. Трифенилтетразолий хлористый (ТТХ) под действием продуктов жизнедеятельности микроорганизмов переходит из бесцветного в красный нерастворимый в воде трифенилформазан. Интенсивность окраски находится в прямой зависимости от степени бактериурии.

Готовят три раствора: 1) Насыщенный раствор двузамещенного фосфорнокислого  натрия; 2) 750 мг ТТХ растворяют в 100 мл раствора 1; 3) Рабочий раствор – 4 мл раствора 1 смешивают с 100 мл раствора 2. Хранят растворы в прохладном защищенном от света месте. Срок хранения растворов 1 и 2 – до 2 месяцев, рабочего раствора не более 2 недель. При постановке реакции пользуются стерильной посудой.

К 2 мл мочи прибавляют 0,5 мл рабочего раствора и помещают после перемешивания в термостат при 37°С. После 4–х часовой инкубации учитывают результаты. Появление на дне пробирки красного осадка свидетельствует о наличии в 1 мл мочи не менее 105 микробных клеток.

В 1 мл мочи здорового человека содержится не более 104 бактерий (критическое число – 105 бактерий), превышение этих величин считают патологией, а состояние рассматривается как клинически значимая бактериурия. При выявлении 106–108 бактерий в правильно отобранных образцах наличие инфекции мочевыводящих путей можно считать несомненным. Неясные, пограничные значения требуют проведения многократных повторных исследований.

Транзиторная бактериурия. В зависимости от количества микроорганизмов может быть явной или незначимой. Нередко развивается при различных патологиях, например энтероколитах, а также при проведении различных медицинских манипуляций. При отсутствии патологии мочевыводящих путей бактерии быстро выводятся из организма.

Неясная бактериурия. Содержание бактерий в моче не превышает 104, к находке следует отнестись серьёзно и повторить исследования 2–3 раза через различные интервалы (учитывая время проведения последнего курса антибиотикотерапии). Особое внимание следует обратить на наличие бактериурии неясного генеза у детей младшего возраста.

Значимая бактериурия. Как правило, сопровождается объективными или субъективными признаками поражения мочевыводящих путей. К этой группе следует отнести и бессимптомные бактериурии, сопровождающиеся выделением 105 и более бактерий (обычно соответствует бессимптомной стадии цистита или пиелонефрита).

При поражениях, вызванных не энтеробактериями, можно наблюдать менее выраженную бактериурию. У пациентов с заведомой предрасположенностью к развитию инфекции также наблюдают бактериурию с выделением меньшего числа микроорганизмов.

При поражениях мочевыводящих путей  часто большее значение имеют  биологические свойства возбудителя, а не его содержание в моче.

Следует иметь в виду, что в  некоторых случаях – у больных, получающих антибактериальную терапию, при плохом оттоке мочи, при низком ее удельном весе, при рН ниже 5 – может наблюдаться низкая степень бактериурии при имеющемся заболевании. Поэтому, помимо степени бактериурии, следует учитывать вид выделенных из мочи микроорганизмов. Энтеробактерии чаще выделяются из мочи больных уроинфекцией.

Дифтероиды, лактобациллы, грамположительные  палочки обычно выделяются из мочи здоровых людей.

При трактовке результатов исследования следует учитывать повторность  выделения одного и того же вида микроорганизмов, наличие монокультуры или ассоциации микроорганизмов. Монокультура чаще встречается при острых воспалительных процессах и коррелирует с высокой степенью бактериурии. Ассоциации микроорганизмов чаще встречаются при хронических процессах и коррелируют с низкой степенью бактериурии.

Инфекции мочевыводящих путей

Подавляющее большинство случаев  выявляют амбулаторно, на фоне полного  здоровья, хотя отмечают различные  факторы, предрасполагающие к развитию заболевания. Женщины заболевают в 30 раз чаще, чем мужчины, что обусловлено, в частности, относительно небольшими размерами уретры. Частота инфекций мочевыводящих путей у женщин с возрастом линейно возрастает. Поражения диагностируют у 1% девочек школьного возраста, к 30–ти годам их число возрастает до 20% и достигает пика у женщин старше 60 лет. У мужчин поражения мочевыводящих путей наблюдают значительно реже, пик заболеваемости (1%) приходится на возраст старше 60 лет. В течение первых недель после рождения мальчики более предрасположены к развитию инфекции. Несколько чаще (5%) инфекции мочевыводящих путей наблюдают у мужчин в регионах, эндемичных по шистосоматозу.

Предрасполагающие факторы. Включают анатомические аномалии, нарушения метаболизма и сопутствующие заболевания.

К развитию поражений предрасполагает аномальное строение мочевыводящих путей, особенно обструкции, рефлюксы и неполное опорожнение мочевого пузыря. Основной фактор, обусловливающий частые, рецидивирующие или хронические инфекции мочевыводящих путей, – анатомические аномалии.