Физиологическая функция каудальной нейросекреторной системы

Острая и хроническая токсичность активного пептида, его влияние на гемодинамические показатели в остром и хроническом опытах, влияние на электрокардиограмму, вазотонический эффект в опыте по методу Кравкова-Соловейчика на изолированных ушах кролика, исследование сократительной способности вен, влияние V-H на массу органов растущих крыс, более точное определение его контрацептивного эффекта, наблюдение за развитием и размножением у крыс 2 и 3 поколений после контрацептивного эффекта, влияние исследуемого препарата на массу органов у кастрированных крыс обоего пола, морфологические методы исследования органов при влиянии V-H на самцов и самок крыс, влияние V-H на развитие эмбрионов птиц и выклев головастиков из икры лягушки при действии пептида на их оплодотворенную икру, регуляцию функции меланоцитов кожи лягушек, действие их на макрофаги печени взрослых крыс при хроническом опыте и другие опыты будут рассмотрены отдельно.[2]

 

2.3. Биологический метод исследования короткого пептида КНСС человека

Известно, что биологическая активность и концентрация гормонов прямо пропорциональны его количеству (Бакл Дж., 1986). Биологическую активность короткого пептида КНСС человека определяют перед проведением каждой серии опытов не менее чем на двух обездвиженных и вскрытых взрослых самцах лягушек, коих фиксируют к пробкой пластинке я положении на спине.  Их сердце обнажают, вскрыв  эпикард, и подсчитывают исходную частоту сердечных  сокращений (ЧСС). Затем на сердце каждой лягушки наносят по одной капле коротко пептида КНСС человека, титруемого в  0,9%-ном растворе хлорида натрия, начиная с титра  раствора 1 : 16. При этом титр пептида КНСС человека постепенно уменьшают (1 \ 8; 1 * 4j I .1 2), предварительно отмыв сердце 0,9%-ным раствором хлорида натрия, отмечая каждый раз возрастание ЧСС в течение 1 минуты и сравнивая с исходным количеством сердцебиении у каждой из лягушек. Титр пептида КПСС человека, которому соответствует увеличение числа ЧСС на 10,0±2,7% от исходного, по данным B.C. Бахтиновой (1986), соответствует концентрации пептида КПСС человека, равной 0,5 мкг/мл белка, что было доказано ею по методу Lowry (1951).[6]

Лиофильно высушенный препарат в укупоренной таре, например. в запаянной ампуле, хорошо сохраняется в холодильнике при ~5 - 8 °С в течение 12-36 месяцев. В растворе с добавление 0,02 % мертиолата натрия в укупоренной посуде в холодильнике при 5 - 8 °С он не теряет своей активности до 4-6 месяцев. В парах тимола без консервантов раствор препарата в холодильнике при 5 - 8 °С также сохраняет активность до 1,5 - 2 месяцев.[3]

 Научные факты, полученные зарубежными учеными (Onstott D. и Elde R.) при иммунофлуоресцентных методах определения U II отметили, что наряду со специфическим свечением в ряде нефроцитов. свидетельствующем о наличии в них UII, определялись профили темных нейронов, что могло указывать на секрецию ими другого гормона - уротензина I.

Наши подобные исследования, проведенные в 1978 году на сре-зах спинного мозга человека, быка, кролика, крыс методом непрямой флуоресценции со специфической кроличьей сывороткой против UII (V-H), свидетельствовали о специфическом свечении в части мотонейронов, соседствующих с абсолютно темными нейронами. Наряду с этим, специфическое свечение имелось в наших препаратах по ходу кровеносных сосудов и внутри них, что свидетельствовало двух фактах: Не все мотонейроны секретируют короткий пептид. Данный пептид транспортируется по кровеносным сосудам.

 

Глава 3. Влияние короткого пептида КНСС человека на системы органов

3.1. Влияние короткого  пептида КНСС на половую и  репродуктивную систему крыс

Гистологические исследования и изучение массы внутренних половых органов крыс, участвующих при исследовании хроничес¬кой токсичности короткого пептида КНСС человека свидетельству¬ют о значительных структурных их изменениях и снижении массы по сравнению с контрольными животными. [3]

Матка экспериментальных крыс по массе в сравнении с контро¬лем уменьшена на 37,0±2,1 % (р < 0,002), а яичники - на 23,0±1,7 % (р < 0,001). Микроскопические исследования этих органов также показывают их отличие от контроля. Диаметр матки уменьшен на 28,75 % за счет снижения толщины миометрия (миометрий тоньше на 34,57 % в сравнении с контролем) и эндометрия (эндометрий у этих самок тоньше на 22,5 %). В эндометрии экспериментальных самок диаметр маточных желез на 28,73 % меньше, чем у контрольных. Значительно уменьшены ветвления желез эндометрия. Выстлан он кубическим эпителием. Секрет в железах отсутствует. В яичнике экспериментальных крыс имеется масса незрелых растущих фолликулов, определяемых в два раза больше, по сравнению с контролем, масса атретических и белых тел. Желтые тела находятся на стадии пролиферации и васкуляризации. Зрелых фолликулов и желтых тел не имеется. Примордиальных фолликулов в яичнике экспериментальных самок в 2,6 раза больше, чем у контрольных. У экспериментальных самцов масса предстательной железы Уменьшена в 1,35 раза, диаметр ветвления ее желез заметно снижен, Уменьшен диаметр ядер секреторного эпителия.

Таблица 1. Морфологические изменения во внутренних половых органах самок крыс при введении вазотонина – Н в дозе 25 мкг/кг ежедневно в течение 40 дней на примере матки

Группа животных	Внешний диаметр, мкм	Толщина миометрия, мкм	Толщина эндометрия, мкм	Диаметр маточных желез,  мкм
Контроль	788,6	118,60	181,5	29,9
Эксперимент	561,9	77,6	140,2	21,4

 

Таким образом, короткий пептид КНСС вызывает у экспериментальных крыч задержку развития гонад и созревания гоноцитов,  а также признаки нарушения гормональной функции яичников и семенников. Это является причиной не только задержки открытия половой щели у самок, но также отставание соматического развития, заключающееся в заметном снижении массы экспериментальных самок и самцов по сравнению с контролем.

   В связи со значительными  изменениями в структуре гонад  экспериментальных крыс, проведен  эксперимент по выявлению у  них возможности оплодотворения  и репродуктивной функции, времени наступления беременности и плодовитости самок. Для этого были сформированы 4 группы животных по соответствующим клеткам:

1 – 1 самец и 5 самок, получавшие  препарат в дозе 25мкг/кг  в течение 40 дн.

2 – 1 самец, участвующий в эксперименте и 5 самок, не получавший короткий пептид КНСС человека[3]

3 – 1 самец, не получавший  и  5 самок, получавших препарат  в дозе 25 мкг/кг

4- 1 самец и 5 самок не  получавших данный препарат.

За животными велись активные наблюдения, отмечено, что  в течение 4,5 месяцев не беременели и не приносили потомства группы, находящиеся в клетках 1,2,3. Контрольный вариант за данный период времени дал 2 потомства. Еще через 4,5 месяца экспериментальные самки стали приносить нормально здоровое потомства, но количество крысят у них было в 2-3 раза меньше, чем у контроля.  У крыс 2-3 поколения  не было никаких уродств, и по срокам развития и плодоношения они не отличались.

Таблица 2. Влияние вазотонина Н на сроки первых родов и плодовитость белых крыс

Группы животных	Количество матерей	Срок наступления первых родов	Кол-во крысят на самку
Интактные самки и самцы	10	126	9
Экспериментальные самцы и самки	10	195	3
Экспериментальные самцы и интактные самки	10	193	4
Экспериментальные самки и интактные самцы	10	194	3

 

 

Таблица 3. Сроки наступления родов и плодовитость 2-го и 3-го поколения крыс, родившихся от экспериментальных животных

Группы  животных	Количество матерей	Сроки наступления первых родов	Количество крысят на одну самку
Интактные самцы и самки	6	126	9
Самцы 2-го поколения и интактные самки	6	124	8
Самки 2-го поколения и интактные самцы	6	123	9
Самцы 3-го поколения и интактные самки	6	127	8
Самки 3-го поколения и интактные самцы	6	126	9

 

   Таким образом, следует  отметить, что короткий пептид  КНСС вызывает длительный, но  обратимый контрацептивный эффект  у крыс обоего пола. При этом  пептид не обладает тератогенными  свойством, не вызывает эмбриологических  и генетических нарушений.

 

3.2. Влияние короткого пептида КНСС человека на сердечно – сосудистую систему

Наиболее простой экспериментальной моделью для исследования кардиотонического эффекта является сердце лягушки.  Исследование проводилось по М.П.Березину.  Давление перфузионной жидкости при этом устанавливается на уровне 15 см водяного столба. Канюля вводится  взаднюю полую вену. Исследуемый пептид разных доз растворяется в 0,9 % растворе хлорида натрия, вводится в резиновую манжету, соединенную с манжетой. Анализ, полученных эффектов свидетельствует, что по мере увеличения  дозы препарата в перфузате частота и амплитуда сокращения сердца заметно возрастают, уменьшается латентный период и увеличивается продолждительность кардиотонических эффектов. Пептид оказывает на сердце лягушки положительное хроно – и инотропное действие. Сопоставление степени увеличения частоты сердечных сокращений в 1 минуту и нарастание амплитуды его сокращений свидетельствует, что при дозе 8 мкг/ мл препарата выражен в два раза больше, чем частота его сокращений. Иначе говоря, короткий пептид оказывает выраженный кардиотонический эффект, являющийся в эффективной работе сердца в систоле и достаточном времени отдыха в диастоле. [3]

 

Влияние короткого пептида КНСС человека на электрокардиограмму крыс при однократном его введении в дозе 25 мкг/кг

Для выявления влияния изучаемого короткого пептида исследование проводилось на 14 белых крысах (6 самцов и 8 самок). Перфузат вводился в брюшную вену. Запись ЭКГ проводилась на двухканальном чернильно – пишущем электрокардиографе. Данные эксперимента свидетельствуют, что короткий пептид КНСС человека  в дозе 25 мкг/кг  приводит к ускорению сердечных сокращений у животных обоего  пола. При этом тахикардия у самцов по сравнению с исходной возрастает на 20,2%, а у самок – 27,2%

Рис.1. Влияние короткого  пептида КНСС человека на чистоту сердечных сокращений крыс самцов (ряд 1), самок (ряд 2)

Исследование электрокардиограммы крыс свидетельствует, что после подкожного введения исследуемого пептида наблюдается изменение ряда показателей.  Изменение показателей у экспериментальных крыс после подкожного введения короткого пептида человека в дозе 25 мкг/кг, связано с увеличение транспорта ионов кальция через специфические каналы атипических кардиомицетов с ускорением проведения им пульса по проводящей системе сердца. Изучение вазоактивного эффекта V-H производят минимум на двух объектах: кровеносных сосудах брыжейки и перепонки лапок лягушки на изолированных ушах кролика.[3]

 

3.3. Влияние короткого  пептида КНСС человека на системное артериальное давление на примере котов и кроликов

Исследование действия короткого пептида КНСС человека на системное артериальное давление изучалось  в остром опыте на 36 самках кроликов массой 2500 г и на кошках 12 самцах малого 200+150 под уретановым наркозом. Наркотическое вещество вводилось внутрибрюшинно в виде  10% раствора на дистиллированной воде.  Исследуемый пептид растворялся в разных дозах в 0,5 мл 9% ного раствора хлорида натрия и вводился в бедренную вену со скоростью 0,1 мл/с. Регистрация артериального давления производилось с помощью ртутного манометра, соединенного резиновой трубкой с канюлей, введённой  в общую  сонную артерию. Запись показаний артериального давления осуществлялась на электрокимографе при помощи писчика манометра. Каждая последующая доза препарата вводилась не ранее, чем через 5 минут после установления артериального давления на исходных цифрах после предыдущего эффекта.

    Короткий пептид  КНСС человека исследовался в  остром опыте на кошках и  кроликах, которым он вводился внутривенно в дозах 4,8,16,32 мкг/кг. В ходе опыта регистрировалось артериальное и амплитуда пульсовой волны после введения каждой дозы пептида. Полученные научные факты свидетельствуют, что  после инъекции исследуемого пептида наблюдалось закономерное повышение артериального давления и увеличение пульсовой волны, величина которых и время действия зависят от вводимой дозы пептида.[14].[7]

   Таким образом  внутривенное введение короткого  пептида КНСС человека вызывает  у экспериментальных животных повышение системного артериального давления и амплитуды пульсовой волны, которое зависит от вводимого препарата. При этом полученные научные факты свидетельствуют о более выраженном возрастании амплитуды пульсовой волны в сравнении с показателями системного артериального давления, что, несомненно, зависит от преимущественного влияния изучаемого пептида на силу сокращения сердца, что описывалось выше.

 

 

 

Таблица 4. Влияние короткого пептида КНСС человека на показатели артериального давления и острых опытах на кроликах

Доза короткого пептида (мкг/кг)	Исходное артериальное давление	Максимальное артериальное давление после введения мм.рт.ст	Прирост в % к исходному артериальному давлению мм.рт.ст	Артериальное давление латентного периода мм.рт.ст
4,0	110,1	121,0	10,0	138,0
8,0	114,1	137,3	20,3	114,0
16,0	111,9	148,6	32,8	66,0
32,0	115,0	161,0	40,8	30,0