Ретикулоцитарные и эритроцитарные показатели периферической крови в системе оценки у лиц, занимающихся и не занимающихся спортом

2.4. Организация исследований

С целью решения поставленных задач на протяжении двух лет многократно регистрировали показатели гемограммы, а также маркеры метаболизма железа у 22 атлетов высшей квалификации – членов сборных команд РФ и Краснодарского края в гребле на байдарках и каноэ (8 лиц мужского пола и 9 лиц женского пола) и беге на средние и длинные дистанции (5 лиц мужского пола). Из них: 2 − ЗМС, 8 − МСМК, 8 − МС, 4 – КМС. Возраст спортсменов колебался от 18 до 22 лет.

Идентичные показатели многократно (до 7 раз) регистрировали также у 422 лиц мужского и женского пола в возрасте 18-40 лет, не связанных с напряженной мышечной деятельностью, которые проходили плановый профилактический осмотр на базе Краснодарского консультативно-диагностического центра городской больницы № 2.

Выборку “физиологический эритропоэз” (здоровые) составили гемограммы лиц с результатами гематологических и биохимических маркеров в пределах общепринятых референтных значений. Группы с латентным дефицитом железа, а также манифестным истинным и перераспределительным дефицитом железа сформированы из гемограмм лиц, у которых на основании “золотых стандартов” установлены соответствующие нарушения функционального состояния эритропоэза.

Половой состав групп с анализируемыми функциональными состояниями эритропоэза представлен в таблице 1.

 

Таблица 1

Половой состав анализирумых групп

Функциональное состояние эритропоэза	Количество гемограмм
	всего	мужчин	женщин
Физиологический эритропоэз	183	70	113
Латентный дефицит железа	52	6	47
Манифестный истинный дефицит  железа	105	18	87
Манифестный перераспределительный  дефицит железа	81	18	53

 

 

Анализ динамики гематологических показателей на фоне восполнения  дефицита железа осуществляли на основании систематического амбулаторного контроля в условиях гематологического кабинета Краснодарского диагностического центра.

Исследовали образцы  венозной крови. Забор проб крови  у высококвалифицированных спортсменов  производили на базе лаборатории информационного обеспечения и функциональной диагностики НИИ проблем физической культуры и спорта Кубанского государственного университета физической культуры, спорта и туризма. Анализ образцов осуществляли в условиях клинико-диагностической лаборатории Краснодарского консультативно-диагностического центра городской больницы № 2.

 

Глава 3. РЕТИКУЛОЦИТАРНЫЕ И ЭРИТРОЦИТАРНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ В СИСТЕМЕ  ДИФФЕРЕНЦИРОВАННОЙ

ОЦЕНКИ ЭРИТРОПОЭЗА

3.1. Предпосылки

Количественный состав крови не только характеризует состояние  крови как системы, но и является интегративным тестом, отражающим результаты деятельности других систем и органов, особенности их целостного функционирования (Г.А. Макарова, С.А. Локтев, 1990; С.А. Волкова и др., 2008). При этом, если эритроцитарные показатели характеризуют эритропоэтическую функцию костного мозга за последние 3-4 месяца, то ретикулоциты, созревая в периферическом кровяном русле за 1-3 дня, практически в режиме реального времени позволяют оценить качественные аспекты эритропоэза (C. Brugnara et al., 2006; S.C. Cifford et al., 2006).

В настоящее время, в  связи с внедрением в медико-биологические исследования автоматизированных методов анализа, количество показателей ретикулоцитарного и эритроцитарного анализа значительно возросло. Тем не менее, новые ретикулоцитарные показатели, характеризующие степень зрелости и уровень гемоглобинизации эритроцитарных предшественников, не нашли широкого практического применения в качестве маркеров оценки функционального состояния эритропоэза. Усугубляет ситуацию то, что для большинства показателей ретикулоцитарного анализа отсутствуют стандартизированные референтные величины, а межлабораторный коэффициент вариации значений одноименных показателей, в ряде случаев, достигает 30–40% (C. Briggs et al., 2001; А.М. Пятницкий и др., 2007).

Ответы на вопросы, касающиеся нормативов периферической крови и биологической вариабельности показателей гемограммы, крайне важны для практической физиологии. При этом к настоящему времени имеются только единичные научные работы, посвященные общебиологическим тенденциям распределений эритроцитарных параметров в различных популяциях (Г.И. Козинец, В.А. Макаров, 1997; С.А. Волкова и др., 2008). В доступной литературе нам не встретилось публикаций, относящихся к анализу закономерностей варьирования параметров ретикулоцитарного анализа у здоровых лиц. Еще менее изучены ретикулоцитарные показатели в системе гематологического контроля у высококвалифицированных спортсменов. Несмотря на ряд зарубежных исследований, посвященных изучению информативности отдельных показателей ретикулоцитарного анализа для физиологии спорта (M.J. Asshenden et al., 2004; G. Banfi, 2008; K.E. Fallon, 2008), вопрос о влиянии интенсивной мышечной деятельности на костно-мозговое кроветворение можно считать открытым.

Практически не изучена проблема, касающаяся распределения фракций ретикулоцитов, а также содержания гемоглобина в ретикулоцитах для дифференцированной оценки функциональных состояний эритропоэза, связанных с истинным и перерераспределительным дефицитом железа. По этому поводу в зарубежной печати предоставляются только фрагментарные сведения (M. Buttarello et al., 2004; S. Franck et al., 2004; С. Canals et al., 2005), однако разнообразие используемых методов и методологий делают результаты данных работ мало приемлемыми для нужд конкретной лаборатории. Остается не решенным вопрос и о существовании математических взаимосвязей между ретикулоцитарными и эритроцитарными показателями, что крайне важно для обеспечения эффективного решения диагностических задач на основе анализа большого массива данных.

Все вышесказанное и  послужило основанием для проведения настоящих исследований, основной целью которых являлось установление диагностической значимости ретикулоцитарных и эритроцитарных показателей в системе дифференцированной оценки эритропоэза.

 

3.2. Нормальные величины  ретикулоцитарных и эритроцитарных показателей у здоровых лиц молодого возраста

В таблице 2 представлены значения эритроцитарных показателей гемограмм у исследованной популяции лиц женского и мужского пола 18-40 лет. На основании значений критерия Колмогорова-Смирнова, все выборки анализируемых параметров принадлежали к генеральным совокупностям с нормальным распределением (за исключением показателя среднего объема эритроцитов у женщин), что позволило использовать методы параметрической статистики. Достоверность межгрупповых различий параметра MCV оценивалась на основании критерия Манна-Уитни.

 

Таблица 2

Значения эритроцитарных показателей здоровых молодых мужчин и женщин

Параметр	Мужчины (n=73)	Женщины (n=110)	p
	X – 1,5Sd
RBC, 1012/л	4,96 – 5,47	3,94 – 4,87	< 0,001
HGB, г/дл	13,6 – 16,3	12,10 – 14,2	< 0,001
HCT, %	38,1 – 46,2	32,9 – 41,0	< 0,001
MCV, фл	82,6 – 93,2	82,3 – 91,3	< 0,05
MCH, пг	28,6 – 32,2	28,2 – 31,5	< 0,002
MCHC, г/дл	33,9 – 37,8	33,8 – 37,4	> 0,5
RDW-CV, %	12,3 – 14,1	12,1 – 14,2	> 0,5

 

Согласно данным таблицы 2, у молодых мужчин по сравнению с лицами женского пола статистически значимо увеличены: содержание эритроцитов, концентрация гемоглобина, уровень гематокрита, средний объем эритроцитов, а также среднее содержание гемоглобина в эритроците, что детерминировано генетически соотношением половых гормонов. При этом значения средней концентрации гемоглобина в эритроците и коэффициента вариации эритроцитов по объему в обеих выборках достоверно не различались, что, вероятно, связано с расчетным характером данных параметров.

Распределение основных ретикулоцитарных показателей отличалось от нормального для абсолютного количества ретикулоцитов и фракции ретикулоцитов с высокой флуоресценцией в обеих группах, а также для фракции ретикулоцитов с низкой флуоресценцией в выборке лиц женского пола. Однако, согласно результатам стастистического анализа, внутригрупповое различие между всеми анализируемыми параметрами стастически не достоверно, что соответствует литературным данным (С.А. Луговская и др., 2006).

Дальнейшее исследование проводилось на основе анализа значений стастических параметров и гистограмм распределений. При этом были выявлены некоторые особенности варьирования ретикулоцитарных показателей, присущие популяции в целом.

В таблице 3 представлены основные статистические параметры ретикулоцитарных показателей анализируемой выборки лиц молодого возраста.

 

Таблица 3

Статистические параметры  ретикулоцитарных показателей анализируемой популяции лиц молодого возраста (n=183)

Параметр	X	Erx	Sd	min	max	med	As	Eras	Ex	Erex
Ret,%	0,88	0,02	0,28	0,33	1,77	0,84	0,54	0,18	0,01	0,35
Ret#, 1012/л	0,03	0,001	0,001	0,01	0,09	0,04	0,54	0,18	0,01	0,35
IRF, %	3,98	0,18	2,4	0,0	13,4	3,6	1,1	0,18	1,2	0,36
LFR, %	96,0	0,18	2,3	86,6	100	96,4	-1,1	0,18	1,2	0,36
MFR, %	3,7	0,17	2,5	0,0	11,8	3,3	1,0	0,18	0,95	0,36
HFR,%	0,24	0,02	0,3	0,0	1,6	0,2	1,6	0,18	2,8	0,36
Ret-He, пг	30,9	0,09	1,3	26,9	35,1	30,9	0,14	0,18	0,69	0,36

 

В соответствии с данными таблицы 3 распределение значений, близкое к “нормальному”, установлено для показателя Ret–He.

Рисунок 1 демонстрирует гистограмму распределения значений среднего содержания гемоглобина в ретикулоцитах.

Рис. 1. Гистограмма распределения среднего содержания гемоглобина в ретикулоцитах у здоровых лиц молодого возраста

 

Как видно из рисунка 1, частота распределения значений параметра относительно равномерна. Варьирование значений показателя по закону “нормального” распределения, вероятно, свидетельствует об устойчивости значений Ret-He в популяции, что может быть связано не только с высокой степенью стандартизации методики и точностью метода. Так, известно, что среднее содержание гемоглобина в ретикулоцитах обусловлено, главным образом, размером клети и, в меньшей степени, клеточным содержимым (M. Buttarello et al., 2004). При этом значение Ret-He зависит только от метаболизма железа в организме, а концентрация гемоглобина и размер клетки - прочно генетически детерминированные признаки (Г.И. Козинец и др., 2007).

Согласно результатам  нашего исследования, значение данного ретикулоцитарного показателя не связано стастически значимо с полом или возрастом (p>0,05). Следовательно, в физиологических условиях численное значение среднего содержания гемоглобина в ретикулоцитах стабильно и флуктуирует в узком количественном диапазоне.

Распределение значений остальных ретикулоцитарных показателей в исследуемой выборке отличалось от “нормального”, о чем свидетельствуют значения коэффициентов асимметрии отличные от нуля. Известно, что любая система, биологическая или небиологическая, стремится к равновесному состоянию с минимально возможной энтропией. При этом распределение всех ее параметров должно приближаться к “нормальному”. Если же распределение отличается от такового, система не в равновесии, но находится в динамическом стремлении к равновесию. Возникает вопрос, являются ли установленные особенности варьирования значений ретикулоцитарных показателей случайным или закономерным явлением?

В соотвествии с данными Г.И. Козинеца и В.А. Макарова (1997), в условиях физиологического эритропоэза имеет место правосторонняя асимметрия кривой распределения эритроцитов по объему. Значения площади и диаметра тромбоцитов здоровых лиц имеют характер логнормального распределения (Г.И. Козинец и др., 2002). По аналогии, мы полагаем, что варьирование признака, отличающегося от “нормального” распределения, может иметь место и на популяционном уровне. В частности, согласно результатам проведенного исследования, правосторонняя (положительная) асимметрия отмечена для показателей Ret%, Ret#, IRF%, MFR%, HFR%, а левосторонняя (отрицательная) – для показателя LFR%.