Микробиология

    Окончательный  результат выдают: количество КОЕ  ОКБ в 100 мл воды, из них количество  КОЕ ТКБ в 100 мл.

   Определение обших и термотолерантных  колиформных бактерий титрационным  методом.

       Метод  основан на накоплении бактерий  после посева установленного  объема воды в жидкую питательную  среду с последующим пересевом  на дифференциальную  плотную  питательную среду с лактозой  и  идентификацией колоний по  культуральным и биохимическим  тестам.

      Проведение анализа. При исследовании питьевой воды качественным методом засевают 3 объема по 100 мл. При исследовании воды с целью количественного определения ОКБ и ТКБ при повторном анализе производят посев: 3 объемов по 100 мл, 3 объемов по 10 мл, 3 объемов по 1 мл. Посев 100 мл и 10 мл производят в 10 и 1 мл концентрированной лактозо-пептонной среды, посев 1 мл пробы проводят в 10 мл среды обычной концентрации. Посевы инкубируют при 37оС в течение 48 часов. Из емкостей, где отмечено наличие роста (помутнение) и образование газа или только помутнение, производят высев бактериологической петлей на сектора среды Эндо для получения изолированных колоний. Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре 37оС в течение 18-20 часов.

При образовании помутнения и газа в среде накопления и росте на среде Эндо колоний, типичных для лактозоположительных бактерий: темно-красных или красных, с металлическим блеском или без него, выпуклых с красным центром и отпечатком на питательной среде, дают положительный ответ на присутствие общих колиформных бактерий в данном объеме пробы.

Наличие ОКБ требуется подтвердить: 1)если в среде накопления отмечено только помутнение; 2)если принадлежность к лактозоположительным колониям вызывает сомнение  у  исследователя

В этих случаях: 1) проверяют наличие отпечатков на среде Эндо после снятия петлей подозрительной колонии; 2) выполняют оксидазный тест; 3) подтверждают принадлежность к Граму; 4) подтверждают способность к газообразованию при посеве изолированных 1-2 колоний каждого типа с каждого сектора на среду с лактозой с последующей инкубацией посевов при температуре 37оС в течение 24-48 часов. 

Для определения ТКБ делают посев 2-3 изолированных колоний каждого типа с каждого сектора среды Эндо в пробирки с лактозной средой, нагретой до 44оС. Инкубируют в термостате при температуре 44оС в течение 24 часов. Допускается просмотр посевов через 4-6 часов.

При образовании газа в среде накопления, росте на среде Эндо лактозоположительных бактерий и выявлении способности этих бактерий ферментировать лактозу до кислоты и газа в течение 24 часов при температуре 44оС дают положительный ответ на наличие в этом объеме пробы воды ТКБ. Во всех остальных случаях дают отрицательный ответ.

Учет результатов. При исследовании3 объемов по 100 мл результаты оценивают качественно и при обнаружении ОКБ и ТКБ хотя бы в одном из них, делается запись в протоколе «обнаружены в 100 мл». При исследовании количественным методом определеяют наиболее вероятное число (НВЧ) ОКБ и ТКБ по таблице в методических указаниях 4.2.1018-01.Результат сообщают без доверительного интервала. При отрицательном ответе – «не обнаружены в 100 мл».

Норматив: ОКБ и ТКБ должны отсутствовать в 300 мл воды.

3.Определение  спор сульфитредуцирующих клостридий.

Сульфитредуцирующие клостридии – спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, редуцирующие сульфит натрия на железосульфитном агаре при температуре 44оС в течение 16-18 часов.

 Метод основан на  выращивании посевов в железосульфитном  агаре в условиях, приближенных  к анаэробным и подсчете черных  колоний.

Проведение анализа. Пробу воды 20 мл прогревают на водяной бане в пробирках при температуре 75оС в течение 15 минут для исключения вегетативных форм. При исследовании хл